抗生素的大規(guī)模及不合理使用加速了全球性的抗生素耐藥危機（Crisis of antibiotic resistance）。然而單細菌和細菌群體的耐藥性研究并不能解決不斷出現的抗生素治療失效問題。從宿主細胞,抗生素和病原菌三者相互作用的角度研究抗生素耐受性（Antibiotic tolerance）的產生可以為抗生素耐藥性的研究帶來新的策略。經過長期的臨床實踐也表明抗生素耐受性的產生先于耐藥性并且促進了耐藥性的進化。因此,本論文深入研究了一種宿主細胞介導的抗生素耐受性（Cell-associated antibiotic tolerance）的發(fā)生機制。本研究首先表征了細胞外細菌包括蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus NVH0075/95）,糞腸球菌（Enterococcus faecalis ATCC29212）,金黃色葡萄球菌（Stphylococcus aureusATCC29213）,豬鏈球菌（Streptococcus suis CQ2B50）,大腸桿菌（Escherichia coli ATCC25922）,肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae... 

【文章來源】：中國農業(yè)大學北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－２抗菌藥作用靶點和耐藥性機制［１８］??抗生素可以根據其作用機制分類，一類抗生素耐藥的靶點同樣可以是其?

第一章緒論??中的關系可以為抗生素研究策略奠定基礎抗生素耐藥性（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ?ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）在前面的論述??中己經說明，主要是通過遺傳突變或者獲得耐藥基因而產生耐藥性。如圖１－３?ａ所示，區(qū)分耐藥??菌（Ｒｅｓｉｓｔａｎｔｓｔｒａｉｎ）和敏感菌的最本質區(qū)別是，單個耐藥菌（Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ?ｓｔｒａｉｎ）的ＭＩＣ值比相應??的敏感菌的ＭＩＣ顯著升高，并且升高的濃度遠超過了治療該類細菌的濃度。因此，耐藥性的獲??得使得耐藥菌在高濃度的抗生素作用下無法殺滅。??然而，耐受菌（Ｔｏｌｅｒａｎｔ?ｓｔｒａｉｎ）和非耐受菌（Ｎｏｎ－ｔｏｌｅｒａｎｔ?ｓｔｒａｉｎ）無法僅憑ＭＩＣ來區(qū)分，因為??耐受菌的ＭＩＣ與敏感菌相比并沒有改變（如圖１－３?ｂ）。同樣的持留菌（Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ?ｓｔｒａｉｎ）的ＭＩＣ??值也沒有發(fā)生變化（圖丨－３?ｃ）。而最小殺菌時間（ｔｈｅ?ｍｉｎｉｍｕｍ?ｄｕｒａｔｉｏｎ?ｆｏｒ?ｋｉｌｌｉｎｇ，ＭＤＫ）可以進??一步區(qū)分耐受菌和持留菌．耐受菌的ＭＤＫ最早期就比敏感菌大很多，而持留菌的ＭＤＫ在最初??是與敏感菌相同，一段時間后才高于敏感菌（如圖１－３?ｂ和ｃ）。事實上，細菌持留現象早在１９４４??年就己經被發(fā)現１５４１，抗生素作用細菌后發(fā)現細菌群體中一定比例的表型異化的小亞群表現為對抗??生素耐藥

細胞的自噬作用是清除細胞內入侵的細菌的機制之一，主要通過自噬小體和溶酶體的相互作??用完成ＤＯＭ％，細胞吞噬作用是細胞自噬的基礎，大部分的病原體進入細胞內依靠吞噬作用［％’??如圖１－７所示，細菌經吞噬作用進入內涵體或核內體（Ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ）中，然后內涵體通過??與自暖小體（Ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ）融合將細菌送入自嗤體中進一步形成自噬內涵體（Ａｍｐｈｉｓｏｍｅ）。最??后自唾內涵體和溶酶體（Ｌｙｓｏｓｏｍｅ）促進自嗤溶酶體融合（Ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍａｌ－ｌｙｓｏｓｏｍａｌｆｕｓｉｏｎ），利??用溶酶體內的酸性環(huán)境（Ａｃｉｄｉｃ?ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ）和溶菌酶（Ｌｙｓｏｚｙｍｅ）等將自嗤溶酶體中的細菌降??解完成自噬的清除機制。細菌逃逸自噬的方式可以通過阻止自噬過程中姿勢溶酶體的酸性環(huán)境來??抵抗自噬的捕殺。如副溶血弧菌就可以通過阻止上皮細胞的早期核內體和晚期核內體酸化進一步??阻止溶酶體的酸化并在上皮細胞內形成保護壁龕而成功的在細胞內存活［５又另一方面，細菌可以??通過阻止自噬體的形成而阻止自噬過程［１＜）８］。自噬中的標志性的蛋白可以用來示蹤自噬發(fā)展過程。??例如自噬的關鍵蛋白ＬＣ３＿，ＬＣ３家族包括ＬＣ３Ａ，?Ｂ，?Ｃ和ＧＡＢＡＲＡＰ等亞家族其中??對ＬＣ３Ｂ研究最為廣泛，它是一個具有１２５個氨基酸殘基的蛋白，被Ａｔｇ４剪切失去Ｃ端的２２個??氨基酸蛋白并暴露出Ｃ端的甘氣酸，這時的蛋白為細胞質中的ＬＣ３Ｂ－Ｉ１１１２１。在自噬的過程中，??ＬＣ３Ｂ－Ｉ的Ｃ端的甘氨酸經過泛素化過程，在Ｃ端上共價連接一個磷脂酰乙醇胺（Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙ??ｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ


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