轉(zhuǎn)基因技術(shù)具有推動農(nóng)業(yè)生產(chǎn)發(fā)生革命性變化的潛力。農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)化法是目前應用最為廣泛的大豆遺傳轉(zhuǎn)化方法。但是,與其他的物種相比較,低轉(zhuǎn)化效率一直是大豆基因功能研究中的一個瓶頸,制約了轉(zhuǎn)基因大豆的商業(yè)化發(fā)展。并且,大豆的遺傳轉(zhuǎn)化效率具有很強的基因型依賴性,這限制了遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)在具有良好性狀的商業(yè)化大豆品種中的應用。本研究采用不同大豆品種進行農(nóng)桿菌介導的大豆子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化和大豆原生質(zhì)體細胞轉(zhuǎn)化試驗,分析了不同大豆品種轉(zhuǎn)化早期階段外源基因表達差異及其調(diào)控機制對大豆抗性叢生芽誘導效率的影響,以期提高大豆的抗性叢生芽再生效率,得到以下主要結(jié)果:（1）篩選得到高/低遺傳轉(zhuǎn)化效率大豆品種。利用農(nóng)桿菌介導的大豆子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化體系對17個大豆品種進行遺傳轉(zhuǎn)化試驗,共獲得168株轉(zhuǎn)基因大豆植株。根據(jù)不同大豆品種的遺傳轉(zhuǎn)化效率,篩選得到大豆品種東農(nóng)50（DN50）,Williams 82（Wm82）,Bert（Br）和沈農(nóng)9（SN9）為高遺傳轉(zhuǎn)化效率大豆品種（轉(zhuǎn)化效率高于5.5%）,而Kottman（Kt）,General（Gr）,中黃35（ZH35）和遼豆16（LD16）為低遺傳轉(zhuǎn)化效率大豆品種（轉(zhuǎn)化... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
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第一章 文獻綜述
    1.1 大豆的遺傳轉(zhuǎn)化方法
        1.2.1 農(nóng)桿菌介導法
        1.2.2 基因槍轉(zhuǎn)化法
        1.2.3 聚乙二醇轉(zhuǎn)化法
        1.2.4 花粉管通道法
    1.2 外源基因表達的影響因素
        1.2.1 外源基因插入特性對基因表達的影響
        1.2.2 宿主調(diào)控對外源基因表達的影響
        1.2.3 外界環(huán)境條件對外源基因表達的影響
    1.3 植物中DNA甲基化
        1.3.1 DNA甲基化的產(chǎn)生機制
        1.3.2 DNA甲基化的功能
        1.3.3 DNA甲基化的研究方法
    1.4 原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化與外源基因表達
        1.4.1 原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化方法在基因功能研究中的優(yōu)勢
        1.4.2 原生質(zhì)轉(zhuǎn)化方法在基因功能研究中的應用
        1.4.3 原生質(zhì)轉(zhuǎn)化方法的影響因素
    1.5 研究的目的與意義
    1.6 技術(shù)路線
第二章 農(nóng)桿菌介導的大豆子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 試驗方法
        2.1.3 數(shù)據(jù)處理與計算
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 農(nóng)桿菌介導的大豆遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.2 不同大豆品種叢生芽誘導效率
        2.2.3 不同大豆品種叢生芽伸長效率
        2.2.4 不同大豆品種生根效率
        2.2.5 不同大豆品種遺傳轉(zhuǎn)化效率
    2.3 本章小結(jié)
        2.3.1 結(jié)論
        2.3.2 討論
第三章 大豆原生質(zhì)體細胞分離和瞬時轉(zhuǎn)化體系
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 試驗方法
        3.1.4 數(shù)據(jù)處理與計算
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 大豆原生質(zhì)體制備和活力檢測
        3.2.2 組織材料培養(yǎng)時間對原生質(zhì)體產(chǎn)量及活力的影響
        3.2.3 預處理液中甘露醇含量對原生質(zhì)體產(chǎn)量和活力的影響
        3.2.4 酶解液成份對原生質(zhì)體產(chǎn)量和活力的影響
        3.2.5 酶解時間對原生質(zhì)體產(chǎn)量和活力的影響
        3.2.6 不同組織材料類型對原生質(zhì)體產(chǎn)量和活力的影響
        3.2.7 大豆原生質(zhì)體中外源基因的瞬時表達
    3.3 本章小結(jié)
        3.3.1 結(jié)論
        3.3.2 討論
第四章 不同遺傳轉(zhuǎn)化效率大豆品種外源基因表達的影響因素研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗材料
        4.1.2 試驗方法
        4.1.3 數(shù)據(jù)處理與計算
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 不同遺傳轉(zhuǎn)化效率大豆品種原生質(zhì)體的制備
        4.2.2 不同遺傳轉(zhuǎn)化效率大豆品種原生質(zhì)體的轉(zhuǎn)化效率
        4.2.3 雌二醇誘導時間對大豆原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化效率的影響
        4.2.4 雌二醇濃度對大豆原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化效率的影響
        4.2.5 培養(yǎng)時間對不同遺傳轉(zhuǎn)化效率大豆品種原生質(zhì)體細胞外源熒光蛋白表達的影響
        4.2.6 不同遺傳轉(zhuǎn)化效率大豆品種原生質(zhì)體細胞內(nèi)外源基因的表達差異
        4.2.7 蛋白酶抑制劑對外源基因表達的影響
        4.2.8 不同轉(zhuǎn)化效率的大豆品種原生質(zhì)體中甲基化酶相關(guān)編碼基因表達水平
        4.2.9 不同轉(zhuǎn)化效率的大豆品種原生質(zhì)體中甲基化水平差異
        4.2.10 甲基化抑制劑5-Azac對外源基因表達水平的影響
        4.2.11 甲基化抑制劑5-Azac對外源基因甲基化水平的影響
    4.3 本章小結(jié)
        4.3.1 結(jié)論
        4.3.2 討論
第五章 5-AZAC對農(nóng)桿菌介導的大豆遺傳轉(zhuǎn)化的影響
    5.1 材料與方法
        5.1.1 試驗材料
        5.1.2 試驗方法
        5.1.3 數(shù)據(jù)處理與計算
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 不同5-Azac處理濃度對大豆遺傳轉(zhuǎn)化的影響
        5.2.2 不同5-Azac使用方式對大豆抗性叢生芽誘導效率的影響
        5.2.3 5-Azac對不同大豆品種抗性叢生芽誘導效率的影響
    5.3 本章小結(jié)
        5.3.1 結(jié)論
        5.3.2 討論
第六章 全文總結(jié)
    6.1 大豆的遺傳轉(zhuǎn)化效率具有顯著的基因型差異
    6.2 建立高效的大豆原生質(zhì)體細胞分離和瞬時轉(zhuǎn)化表達體系
    6.3 DNA甲基化能夠造成大豆品種間外源基因表達水平差異
    6.4 甲基化抑制劑5-AZAC能夠顯著的提高大豆遺傳轉(zhuǎn)化過程中抗性叢生芽的誘導效率
    6.5 創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文目錄


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3199594