SIRT7作為去乙�；鞍准易逡粏T,是一種NAD+依賴性脫乙酰酶,定位于核仁,參與多種生物學(xué)過(guò)程,包括rRNA和蛋白質(zhì)合成、DNA損傷反應(yīng)、細(xì)胞應(yīng)激以及腫瘤的發(fā)生等。有研究表明SIRT7在LPS致炎的THP-1細(xì)胞中表達(dá)降低,在甲狀腺癌、膀胱癌、肝癌、結(jié)腸癌以及乳腺癌等組織中高表達(dá),被認(rèn)為是一種潛在的癌癥因子,但SIRT7在乳房炎和乳腺癌中的研究較少,具體的調(diào)控機(jī)制還不清楚。因此本研究將通過(guò)構(gòu)建敲低和過(guò)表達(dá)SIRT7的細(xì)胞模型,深入研究SIRT7對(duì)LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用和分子機(jī)制,以及SIRT7對(duì)人乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)調(diào)控機(jī)制,為奶牛乳房炎和人類乳腺癌分子診治提供新靶點(diǎn)及新線索。研究結(jié)果主要包括以下幾個(gè)部分:1、SIRT7降低LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞炎性損傷奶牛乳腺組織的健康直接關(guān)乎著養(yǎng)殖者的經(jīng)濟(jì)效益和乳品質(zhì)量。盡管預(yù)防和治療方法已經(jīng)實(shí)施了幾十年,但奶牛乳房炎仍然是一種棘手的疾病。LPS是引起奶牛乳房炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵細(xì)胞毒性因子。所以急需發(fā)展有效控制LPS引起奶牛乳房炎的新型藥物和疫苗等。本試驗(yàn)中我們分別采集5頭炎癥和5頭正常奶牛乳腺組織,通過(guò)Western blot... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：152 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞（ABBREVIATION）
緒論
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 乳房炎和乳腺癌
        1 炎癥的概述
        2 炎癥反應(yīng)
        3 炎癥反應(yīng)的控制
        4 奶牛乳房炎
        5 炎癥與癌癥
        6 乳腺癌
            6.1 乳腺癌的發(fā)病機(jī)制
            6.2 乳腺癌的致病因素
            6.3 預(yù)防和治療
    第二章 去乙�；鞍�7的研究進(jìn)展
        1 SIRT7的基因組成
        2 SIRT7的定位
        3 SIRT7的表達(dá)
        4 SIRT7在核糖體DNA轉(zhuǎn)錄中的作用
        5 SIRT7在蛋白合成中的作用
        6 SIRT7在細(xì)胞應(yīng)激中的作用
            6.1 低氧應(yīng)激
            6.2 低糖應(yīng)激
            6.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
            6.4 基因組應(yīng)激
        7 SIRT7在疾病和癌癥中的作用
            7.1 SIRT7與心臟健康
            7.2 SIRT7與脂肪肝
            7.3 SIRT7與炎癥
            7.4 SIRT7與癌癥
        8 SIRT7與衰老
        9 SIRT7的酶催化活性
本研究的目的和意義
第二篇 試驗(yàn)研究
    第三章 SIRT7對(duì)LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞炎性損傷的作用
        1 試驗(yàn)材料
            1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 主要相關(guān)試劑
            1.3 主要儀器
        2 試驗(yàn)方法
            2.1 奶牛乳腺組織樣本的采集
            2.2 奶牛乳腺組織病理學(xué)檢查
            2.3 奶牛乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.4 LPS處理乳腺上皮細(xì)胞
            2.5 總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
            2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitative Real Time PCR, qRT-PCR）
            2.7 組織和細(xì)胞蛋白的提取及變性
            2.8 Western blot檢測(cè)
            2.9 SIRT7-siRNA的設(shè)計(jì)和合成
            2.10 SIRT7基因克隆和過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建
            2.11 siRNA和質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染
            2.12 轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)
            2.13 NO熒光染色
            2.14 ROS熒光染色
            2.15 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 奶牛乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定
            3.2 SIRT7在奶牛乳房炎組織和細(xì)胞中的表達(dá)
            3.3 轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)
            3.4 SIRT7對(duì)LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞促炎性因子分泌的影響
            3.5 SIRT7對(duì)LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞的炎性介質(zhì)NO產(chǎn)生的作用
            3.6 SIRT7對(duì)LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞促炎性介質(zhì)ROS產(chǎn)生的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
    第四章 SIRT7對(duì)LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞炎性損傷的作用機(jī)制
        1 試驗(yàn)材料
            1.1 試驗(yàn)材料
            1.2 主要相關(guān)試劑
            1.3 主要儀器
        2 試驗(yàn)方法
            2.1 奶牛乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.2 熒光定量PCR
            2.3 Western blot檢測(cè)
            2.4 免疫熒光染色
            2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 SIRT7對(duì)LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞NF-κB通路上游信號(hào)因子的影響
            3.2 SIRT7對(duì)LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞NF-κB p65激活的影響
            3.3 SIRT7對(duì)LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞NF-κB p65核轉(zhuǎn)移的影響
            3.4 SIRT7對(duì)LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞凋亡的影響
            3.5 SIRT7對(duì)LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞的調(diào)控過(guò)程
        4 討論
        5 小結(jié)
    第五章 SIRT7對(duì)MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞增殖、遷移和凋亡的影響
        1 試驗(yàn)材料
            1.1 細(xì)胞系
            1.2 主要相關(guān)試劑
            1.3 主要儀器
        2 試驗(yàn)方法
            2.1 乳腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.2 乳腺上皮細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
            2.3 乳腺癌細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇
            2.4 SIRT7-siRNA干擾
            2.5 SIRT7基因克隆和過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建
            2.6 總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
            2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR （qRT-PCR）
            2.8 組織或細(xì)胞蛋白的提取及變性
            2.9 CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)
            2.10 EDU標(biāo)記細(xì)胞增殖
            2.11 細(xì)胞劃痕
            2.12 Transwell細(xì)胞遷移檢測(cè)
            2.13 細(xì)胞周期檢測(cè)
            2.14 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
            2.15 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 SIRT7的轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)
            3.2 SIRT7對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的影響
            3.3 SIRT7對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移的影響
            3.4 SIRT7對(duì)乳腺癌細(xì)胞周期的影響
            3.5 SIRT7對(duì)乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
    第六章 敲低SIRT7對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞成瘤及DOX治療的影響
        1 試驗(yàn)材料
            1.1 細(xì)胞系和裸鼠
            1.2 主要相關(guān)試劑
            1.3 主要儀器
        2 試驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 慢病毒shRNA
            2.3 裸鼠皮下成瘤
            2.4 阿霉素注射
            2.5 Tunel染色
            2.6 HE染色
            2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 敲低SIRT7對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞裸鼠成瘤的影響
            3.2 組織病理學(xué)觀察瘤體
            3.3 DOX對(duì)穩(wěn)定敲低SIRT7的MDA-MB-231細(xì)胞活性的影響
            3.4 敲低SIRT7對(duì)DOX治療裸鼠成瘤的影響
            3.5 組織病理學(xué)觀察瘤體
            3.6 敲低SIRT7對(duì)DOX處理的瘤體p38MAPK激活的影響
            3.7 SIRT7調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的作用機(jī)制
        4 討論
        5 小結(jié)
全文結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間論文發(fā)表情況（第一作者）



本文編號(hào)：3160400