SIRT7作為去乙�；鞍准易逡粏T,是一種NAD+依賴性脫乙酰酶,定位于核仁,參與多種生物學過程,包括rRNA和蛋白質(zhì)合成、DNA損傷反應(yīng)、細胞應(yīng)激以及腫瘤的發(fā)生等。有研究表明SIRT7在LPS致炎的THP-1細胞中表達降低,在甲狀腺癌、膀胱癌、肝癌、結(jié)腸癌以及乳腺癌等組織中高表達,被認為是一種潛在的癌癥因子,但SIRT7在乳房炎和乳腺癌中的研究較少,具體的調(diào)控機制還不清楚。因此本研究將通過構(gòu)建敲低和過表達SIRT7的細胞模型,深入研究SIRT7對LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞炎癥反應(yīng)的作用和分子機制,以及SIRT7對人乳腺癌細胞的生長調(diào)控機制,為奶牛乳房炎和人類乳腺癌分子診治提供新靶點及新線索。研究結(jié)果主要包括以下幾個部分:1、SIRT7降低LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞炎性損傷奶牛乳腺組織的健康直接關(guān)乎著養(yǎng)殖者的經(jīng)濟效益和乳品質(zhì)量。盡管預防和治療方法已經(jīng)實施了幾十年,但奶牛乳房炎仍然是一種棘手的疾病。LPS是引起奶牛乳房炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵細胞毒性因子。所以急需發(fā)展有效控制LPS引起奶牛乳房炎的新型藥物和疫苗等。本試驗中我們分別采集5頭炎癥和5頭正常奶牛乳腺組織,通過Western blot... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：152 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞（ABBREVIATION）
緒論
第一篇 文獻綜述
    第一章 乳房炎和乳腺癌
        1 炎癥的概述
        2 炎癥反應(yīng)
        3 炎癥反應(yīng)的控制
        4 奶牛乳房炎
        5 炎癥與癌癥
        6 乳腺癌
            6.1 乳腺癌的發(fā)病機制
            6.2 乳腺癌的致病因素
            6.3 預防和治療
    第二章 去乙�；鞍�7的研究進展
        1 SIRT7的基因組成
        2 SIRT7的定位
        3 SIRT7的表達
        4 SIRT7在核糖體DNA轉(zhuǎn)錄中的作用
        5 SIRT7在蛋白合成中的作用
        6 SIRT7在細胞應(yīng)激中的作用
            6.1 低氧應(yīng)激
            6.2 低糖應(yīng)激
            6.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
            6.4 基因組應(yīng)激
        7 SIRT7在疾病和癌癥中的作用
            7.1 SIRT7與心臟健康
            7.2 SIRT7與脂肪肝
            7.3 SIRT7與炎癥
            7.4 SIRT7與癌癥
        8 SIRT7與衰老
        9 SIRT7的酶催化活性
本研究的目的和意義
第二篇 試驗研究
    第三章 SIRT7對LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞炎性損傷的作用
        1 試驗材料
            1.1 試驗動物
            1.2 主要相關(guān)試劑
            1.3 主要儀器
        2 試驗方法
            2.1 奶牛乳腺組織樣本的采集
            2.2 奶牛乳腺組織病理學檢查
            2.3 奶牛乳腺上皮細胞的培養(yǎng)
            2.4 LPS處理乳腺上皮細胞
            2.5 總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
            2.6 實時熒光定量PCR（Quantitative Real Time PCR, qRT-PCR）
            2.7 組織和細胞蛋白的提取及變性
            2.8 Western blot檢測
            2.9 SIRT7-siRNA的設(shè)計和合成
            2.10 SIRT7基因克隆和過表達載體的構(gòu)建
            2.11 siRNA和質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染
            2.12 轉(zhuǎn)染效率的檢測
            2.13 NO熒光染色
            2.14 ROS熒光染色
            2.15 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 奶牛乳腺上皮細胞的培養(yǎng)及鑒定
            3.2 SIRT7在奶牛乳房炎組織和細胞中的表達
            3.3 轉(zhuǎn)染效率檢測
            3.4 SIRT7對LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞促炎性因子分泌的影響
            3.5 SIRT7對LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞的炎性介質(zhì)NO產(chǎn)生的作用
            3.6 SIRT7對LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞促炎性介質(zhì)ROS產(chǎn)生的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
    第四章 SIRT7對LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞炎性損傷的作用機制
        1 試驗材料
            1.1 試驗材料
            1.2 主要相關(guān)試劑
            1.3 主要儀器
        2 試驗方法
            2.1 奶牛乳腺上皮細胞的培養(yǎng)
            2.2 熒光定量PCR
            2.3 Western blot檢測
            2.4 免疫熒光染色
            2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 SIRT7對LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞NF-κB通路上游信號因子的影響
            3.2 SIRT7對LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞NF-κB p65激活的影響
            3.3 SIRT7對LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞NF-κB p65核轉(zhuǎn)移的影響
            3.4 SIRT7對LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞凋亡的影響
            3.5 SIRT7對LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞的調(diào)控過程
        4 討論
        5 小結(jié)
    第五章 SIRT7對MCF-7和MDA-MB-231細胞增殖、遷移和凋亡的影響
        1 試驗材料
            1.1 細胞系
            1.2 主要相關(guān)試劑
            1.3 主要儀器
        2 試驗方法
            2.1 乳腺癌細胞的培養(yǎng)
            2.2 乳腺上皮細胞的傳代培養(yǎng)
            2.3 乳腺癌細胞的凍存及復蘇
            2.4 SIRT7-siRNA干擾
            2.5 SIRT7基因克隆和過表達載體的構(gòu)建
            2.6 總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
            2.7 實時熒光定量PCR （qRT-PCR）
            2.8 組織或細胞蛋白的提取及變性
            2.9 CCK-8細胞活性檢測
            2.10 EDU標記細胞增殖
            2.11 細胞劃痕
            2.12 Transwell細胞遷移檢測
            2.13 細胞周期檢測
            2.14 細胞凋亡檢測
            2.15 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 SIRT7的轉(zhuǎn)染效率檢測
            3.2 SIRT7對乳腺癌細胞增殖的影響
            3.3 SIRT7對乳腺癌細胞遷移的影響
            3.4 SIRT7對乳腺癌細胞周期的影響
            3.5 SIRT7對乳腺癌細胞凋亡的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
    第六章 敲低SIRT7對MDA-MB-231細胞成瘤及DOX治療的影響
        1 試驗材料
            1.1 細胞系和裸鼠
            1.2 主要相關(guān)試劑
            1.3 主要儀器
        2 試驗方法
            2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2 慢病毒shRNA
            2.3 裸鼠皮下成瘤
            2.4 阿霉素注射
            2.5 Tunel染色
            2.6 HE染色
            2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 敲低SIRT7對MDA-MB-231細胞裸鼠成瘤的影響
            3.2 組織病理學觀察瘤體
            3.3 DOX對穩(wěn)定敲低SIRT7的MDA-MB-231細胞活性的影響
            3.4 敲低SIRT7對DOX治療裸鼠成瘤的影響
            3.5 組織病理學觀察瘤體
            3.6 敲低SIRT7對DOX處理的瘤體p38MAPK激活的影響
            3.7 SIRT7調(diào)控乳腺癌細胞的作用機制
        4 討論
        5 小結(jié)
全文結(jié)論
創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
攻讀博士學位期間論文發(fā)表情況（第一作者）



本文編號：3160400