蜜蜂作為重要的特種經(jīng)濟(jì)動物,不僅為人類提供豐富的蜂產(chǎn)品,而且在農(nóng)作物授粉和維持生態(tài)系統(tǒng)平衡中發(fā)揮重要作用。然而,近年來,世界范圍內(nèi)的蜜蜂數(shù)量呈銳減趨勢。研究表明,多種環(huán)境脅迫因子（包括熱激脅迫）是造成蜜蜂數(shù)量減少的重要因素。熱激脅迫影響蜜蜂的生長、發(fā)育和采集能力,危害較大。因此,研究蜜蜂的耐熱性,改良和培育耐熱蜜蜂新品種是保持蜂群健康發(fā)展的重要前提。但是,目前關(guān)于蜜蜂抵御熱激脅迫的具體分子機(jī)制的研究較少。核因子Y（Nuclear Factor Y,NF-Y）是一類重要的轉(zhuǎn)錄因子,包括NF-YA、NF-YB和NF-YC三個亞基,在動物和植物中普遍存在,是近年來分子生物學(xué)研究領(lǐng)域的一個熱點。動物NF-Y的研究主要集中在生長、發(fā)育、腫瘤、癌癥和人類的一些其它疾病上。研究表明,植物NF-Y在熱激脅迫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。但是,動物NF-Y響應(yīng)熱激脅迫的分子機(jī)制仍然不清楚。本研究以中華蜜蜂（Apis cerana cerana）和意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica）為實驗材料,首先通過轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)（RNA-sequencing,RNA-seq）篩選蜜蜂熱激脅迫響應(yīng)基因,... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

影響蜜蜂健康的生物脅迫因子分類(Evans and Schwarz,2011)

為了探明NF-YA、NF-YB和NF-YC之間是否存在互作關(guān)系,我們把蜜蜂的NF-YA、NF-YB和NF-YC的CDS序列不僅構(gòu)建到pGBKT7表達(dá)載體上,還構(gòu)建到pGADT7表達(dá)載體上,并做了酵母雙雜交實驗,結(jié)果如圖3-11所示。從圖3-11可以看出,不管把NF-YA、NF-YB和NF-YC構(gòu)建到pGBKT7載體上,還是pGADT7載體上,我們發(fā)現(xiàn),NF-YA和NF-YC互作,NF-YB與NF-YC互作。但是,NF-YA和NF-YB之間不存在互作關(guān)系。為了驗證酵母雙雜交的實驗結(jié)果,我們把蜜蜂的NF-YA、NF-YB和NF-YC的CDS序列分別構(gòu)建到Flag-NF-YA、Myc-NF-YB和HA-NF-YC真核表達(dá)載體上。并且,把這些真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)到果蠅的S2細(xì)胞做Co-IP實驗,結(jié)果如圖3-12所示。從圖3-12A可以看出,只有當(dāng)Flag-NF-YA和HA-NF-YC共轉(zhuǎn)果蠅S2細(xì)胞時,NF-YA和NF-YC才能互作。同樣,只有當(dāng)Myc-NF-YB和HA-NF-YC共轉(zhuǎn)果蠅S2細(xì)胞時,NF-YB和NF-YC才能互作(圖3-12B)。這些結(jié)果進(jìn)一步證明,NF-YA和NF-YC存在互作關(guān)系,NF-YB和NF-YC也存在互作關(guān)系。為了進(jìn)一步證明NF-YB和NF-YC的互作關(guān)系,我們把Myc-NF-YB和HA-NF-YC共同轉(zhuǎn)到果蠅的S2細(xì)胞,并做了免疫熒光實驗,結(jié)果如圖3-13所示。從圖3-13可以看出,Myc-NF-YB和HA-NF-YC共同轉(zhuǎn)到果蠅的S2細(xì)胞后,NF-YB和NF-YC在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中都有表達(dá)(圖3-13)。前面我們證明了NF-YB是細(xì)胞質(zhì)定位,NF-YC在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中都有定位(圖3-7B),表明NF-YC通過與NF-YB互作,可以將在細(xì)胞質(zhì)定位的NF-YB拉進(jìn)細(xì)胞核,增加NF-YB在細(xì)胞核中的積累。

Co-IP實驗被用來驗證NF-YA、NF-YB和NF-YC的互作關(guān)系

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：2977200