本文關(guān)鍵詞：針對(duì)禽白血病病毒整合酶的抗病毒機(jī)制及泛素化修飾研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2015年

針對(duì)禽白血病病毒整合酶的抗病毒機(jī)制及泛素化修飾研究

王占新  

【摘要】：禽白血病病毒ivian leukosis virus, ALV)屬于反轉(zhuǎn)錄病毒屬成員,能引起雞發(fā)生腫瘤性疾病,近些年來,ALV-J亞型在我國(guó)雞群中廣泛傳播,給養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。然而到目前為止,對(duì)ALV的感染還沒有有效的商品化疫苗和治療措施。反轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制過程中重要的限速步驟是將病毒逆轉(zhuǎn)錄的cDNA整合到宿主基因組中,而催化這一過程的關(guān)鍵性酶便是整合酶(integrase,IN)。已有研究表明,整合酶除具有整合功能外,還能參與病毒的脫衣殼、反轉(zhuǎn)錄、病毒蛋白的表達(dá)、病毒粒子的包裝等過程,而要完成如此眾多的生物學(xué)功能,必需要有宿主蛋白的參與。然而關(guān)于ALV整合酶與宿主蛋白相互作用的研究報(bào)道非常少�；诖�,本論文篩選了與ALV整合酶相互作用的宿主蛋白并研究了其分了機(jī)制,為全面揭示ALV和宿主細(xì)胞的相互作用及防控該疾病策略的制定奠定基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)首先通過酵母雙雜交技術(shù),以ALV的整合酶為“誘餌蛋白”從雞法氏囊文庫中篩選到了與其相互作用的宿主蛋白CSN6(COP9signalosome subunit6);隨后,利用免疫共沉淀技術(shù)在人293T細(xì)胞中證明過表達(dá)的CSN6和IN可以發(fā)生蛋白間相互作用。通過內(nèi)源性免疫共沉淀證明了在雞DF-1細(xì)胞中過表達(dá)的IN能夠結(jié)合細(xì)胞內(nèi)源的CSN6,同時(shí)也證明了在ALV-J感染時(shí)CSN6可以結(jié)合內(nèi)源性的IN；通過GST-pull Down實(shí)驗(yàn)證實(shí)了CSN6能夠與ALV IN直接結(jié)合,并通過其C端介導(dǎo)與ALV-J IN的結(jié)合,結(jié)合位置是IN的催化中心；激光共聚焦技術(shù)證明了CSN6和ALVIN共表達(dá)時(shí)存在共定位。 在病毒復(fù)制實(shí)驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)當(dāng)DF-1細(xì)胞過表達(dá)CSN6后,細(xì)胞以及細(xì)胞上清液中病毒量明顯低于對(duì)照組；而沉默CSN6時(shí),細(xì)胞以及細(xì)胞上清液中病毒量則高于對(duì)照組。這說明CSN6能有效抑制病毒復(fù)制；為了進(jìn)一步確定內(nèi)源性CSN6對(duì)ALV病毒復(fù)制的抑制作用,我們沉默CSN6后感染病毒,不同時(shí)間提取細(xì)胞基因組,檢測(cè)整合入宿主基因組中病毒cDNA水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)沉默CSN6后整合在宿主基因組中病毒cDNA含量顯著增加。 蛋白質(zhì)泛素化修飾是一種非常重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾,它參與眾多細(xì)胞內(nèi)生物學(xué)過程。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)ALV多種病毒蛋白進(jìn)行泛素化檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)ALV的Gag、IN和RT蛋白可以發(fā)生泛素化修飾。鑒于IN在該病毒復(fù)制過程中的重要作用,我們以ALV IN作為研究對(duì)象進(jìn)一步研究,發(fā)現(xiàn)ALV IN的催化中心是其發(fā)生泛素化修飾的主要結(jié)構(gòu)域,并且這一泛素化修飾不依賴于賴氨酸殘基：相同現(xiàn)象我們?cè)诹硪环崔D(zhuǎn)錄病毒HIV的IN上也得到證實(shí)：進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),ALV IN的鋅指結(jié)構(gòu)會(huì)影響其泛素化水平；經(jīng)MS鑒定,ALV INT10和C38是其發(fā)生泛素化修飾的位點(diǎn)。 綜上所述,我們篩選到了一種能與ALV IN相互作用的宿主蛋白CSN6,對(duì)其功能研究發(fā)現(xiàn)CSN6可以通過其C端直接與ALV IN催化中心結(jié)合,從而影響了病毒cDNA在宿主基因組的整合,并最終抑制了病毒粒子的產(chǎn)生。我們的研究結(jié)果表明宿主蛋白可直接靶向反轉(zhuǎn)錄病毒整合酶并抑制病毒的復(fù)制,為治療反轉(zhuǎn)錄病毒提供了新思路：同時(shí),我們發(fā)現(xiàn)ALV IN能夠發(fā)生不依賴于賴氨酸殘基的泛素化修飾,這種修飾如何影響病毒IN活性和病毒復(fù)制,以及發(fā)生泛素化修飾時(shí)所需要的泛素結(jié)合酶E2和泛素連接酶E3還需要進(jìn)一步的研究。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.65
【目錄】：

下載全文 更多同類文獻(xiàn)

CAJ全文下載

(如何獲取全文？ 歡迎：購(gòu)買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)

CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 杜巖,崔治中,秦愛建,RFSilva,LFLee;雞的J亞群白血病病毒的分離及部分序列比較[J];病毒學(xué)報(bào);2000年04期

2 徐鑌蕊,呂艷麗,董衛(wèi)星,何召慶,余春明,馮小宇,孫艷爭(zhēng),任艷麗;蛋雞骨髓細(xì)胞瘤病的病理學(xué)診斷[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2002年06期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 連京華,秦卓明,黃波;雞傳染性支氣管炎研究進(jìn)展[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2000年01期

2 錢鳳芹,劉長(zhǎng)梅,任紅梅,李愛芹,莊文忠;雞新城疫病毒山東分離株F蛋白基因的克隆與鑒定[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2001年03期

3 東野傳現(xiàn);史玉穎;黃中利;劉玉山;亓麗紅;傅劍;;“禽喘康顆粒沖劑”對(duì)雞人工感染新城疫病毒臨床效果的研究[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年02期

4 李子劍;李云龍;陳蘇;艾武;宋敏訓(xùn);李玉峰;;鴨腸炎病毒US2基因的序列測(cè)定與分析[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年03期

5 李祥輝;黃大鵬;黃玉蘭;;雞抗小鵝瘟病毒IgY提取方法的比較試驗(yàn)[J];安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)(上半月刊);2009年23期

6 張小飛,潘孝成,汪秀娟,趙瑞宏,蔣書東;績(jī)溪縣浩寨兔病毒性出血癥的診斷[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2002年02期

7 沈詠舟,沈樂平,程建整;雞傳染性法氏囊病病毒凍干保護(hù)劑熱穩(wěn)定性研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2004年01期

8 沈詠舟,沈樂平,程建整;雞新城疫病毒耐熱凍干保護(hù)劑的研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2004年02期

9 趙坤,張慧輝,郭東升;豬繁殖和呼吸綜合征組織滅活苗的研制[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2005年07期

10 王樂義,馬洪;自制和進(jìn)口試劑盒檢測(cè)雞傳染性支氣管炎抗體的比較研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2005年09期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙冬敏;B亞群禽白血病病毒分離株的生物學(xué)特性[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 趙鵬;豬繁殖與呼吸綜合征病毒在抗體選擇壓下的變異[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 劉棟;畜禽補(bǔ)體C3d基因克隆及序列分析和重組雞C3d免疫佐劑效果研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

4 張青嬋;A亞群禽白血病病毒不同分離株的基因組和生物學(xué)特性比較[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

5 宋翠平;H5N1禽流感和鵝Ⅰ型副粘病毒分離株的生物學(xué)特性及感染性的研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2010年

6 黃馨;端�？s短影響原發(fā)性高血壓及其并發(fā)癥的發(fā)生[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

7 張琪;KLT對(duì)中腦神經(jīng)系統(tǒng)疾病的影響及KLT、NDV、SW聯(lián)合抗腫瘤作用機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

8 熊義;IRES調(diào)控α-干擾素的抗FMDV研究[D];武漢大學(xué);2009年

9 孫亞妮;免疫組織化學(xué)技術(shù)在雞三種病毒性腫瘤病鑒別診斷中的應(yīng)用[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

10 邱玉玉;A亞群禽白血病病毒單克隆抗體的制備和不同亞群禽白血病病毒共感染相互影響的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;動(dòng)物所有關(guān)泛素鏈形成機(jī)制研究取得新進(jìn)展[J];江西飼料;2014年01期

2 陳季武;鄭麗娜;王幫正;李曉濤;;泛素化介導(dǎo)的非蛋白質(zhì)降解功能[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2012年07期

3 瞿蘇;王友群;;泛素非經(jīng)典通路的研究[J];醫(yī)學(xué)綜述;2006年17期

4 何冰;宋曉峰;;基于蛋白質(zhì)序列的泛素化位點(diǎn)預(yù)測(cè)研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年18期

5 盧亮;李棟;賀福初;;蛋白質(zhì)泛素化修飾的生物信息學(xué)研究進(jìn)展[J];遺傳;2013年01期

6 呂永坤;周景文;劉龍;;氮代謝調(diào)控相關(guān)蛋白質(zhì)泛素化修飾篩選[J];食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào);2014年06期

7 陳雨晗;張令強(qiáng);賀福初;;去泛素化酶與基因表達(dá)調(diào)控[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2014年02期

8 喻海燕;宋曉峰;;蛋白質(zhì)泛素化位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性的研究進(jìn)展[J];計(jì)算機(jī)與應(yīng)用化學(xué);2014年02期

9 杜秋麗;李莉;;植物泛素化系統(tǒng)[J];濟(jì)寧學(xué)院學(xué)報(bào);2011年03期

10 宋春雷;劉紅林;;組蛋白的泛素化與去泛素化修飾[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2007年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 艾永興;趙程程;鄭海南;吳山力;張玉靜;;病毒編碼的泛素化酶與去泛素化酶的研究進(jìn)展[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2012年

2 豐蕾;李德峰;王大成;;楊樹菇泛素接合酶E2(UbcA1)的晶體結(jié)構(gòu)研究[A];中國(guó)晶體學(xué)會(huì)第四屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議學(xué)術(shù)論文摘要集[C];2008年

3 徐輝明;;Wwp2催化轉(zhuǎn)錄因子Oct-4的泛素化修飾[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

4 趙程程;鄭海南;吳山力;吳涵;張玉靜;艾永興;;UAF1與去泛素化酶USP家族相互作用的研究進(jìn)展[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2012年

5 張浩;李瑋妮;陳立涵;韓白玉;程龍;徐小潔;葉棋濃;;ERbeta類泛素化修飾及其生物學(xué)意義[A];生命的分子機(jī)器及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)——2012年全國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)摘要集[C];2012年

6 李亭亭;關(guān)俊宏;鄭曉峰;;組蛋白的Neddylation拮抗泛素化并參與DNA損傷修復(fù)的調(diào)控[A];細(xì)胞—生命的基礎(chǔ)——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2013年全國(guó)學(xué)術(shù)大會(huì)·武漢論文摘要集[C];2013年

7 廖兵;;Wwp2呈劑量依賴性調(diào)節(jié)Oct-4的泛素化修飾[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)大會(huì)、青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

8 李志強(qiáng);張浩;張根堂;于如同;;腦膠質(zhì)瘤中NEDD4-1調(diào)節(jié)鳥苷酸交換因子CNrasGEF泛素化作用的研究[A];2011中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

9 高明;李小光;董雯;金蕊;馬航航;楊平勛;胡美茹;李譯;郝一;宋倫;;核糖體小亞基蛋白S7通過調(diào)控MDM2依賴GADD45泛素化降解反應(yīng)介導(dǎo)砷化物誘導(dǎo)的促細(xì)胞凋亡效應(yīng)[A];中國(guó)毒理學(xué)會(huì)第六屆全國(guó)毒理學(xué)大會(huì)論文摘要[C];2013年

10 李永濤;吳舒娟;錢偉;金梅林;;HSP27通過K48泛素化途徑降解TRAF3蛋白負(fù)調(diào)控Ⅰ型干擾素信號(hào)通路[A];細(xì)胞—生命的基礎(chǔ)——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)2013年全國(guó)學(xué)術(shù)大會(huì)·武漢論文摘要集[C];2013年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 記者 李嬋;[N];北京科技報(bào);2012年

2 本報(bào)特約撰稿人 陸志城;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 霍英;后期促進(jìn)復(fù)合物合成泛素鏈的機(jī)理[D];吉林大學(xué);2009年

2 嚴(yán)晶;SCYL1-BP1蛋白及XPC蛋白對(duì)p53-MDM2反饋調(diào)節(jié)環(huán)影響的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

3 王占新;針對(duì)禽白血病病毒整合酶的抗病毒機(jī)制及泛素化修飾研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 高天順;泛素偶聯(lián)系統(tǒng)的生物信息學(xué)研究[D];華中科技大學(xué);2014年

5 張蕾;維甲酸受體α（RARα）泛素化降解的調(diào)控機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2013年

6 李偉;多聚泛素化參與鼻咽癌及肺癌發(fā)病的分子機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2013年

7 陳國(guó)棟;c-Maf的泛素化及其泛素連接酶的研究[D];蘇州大學(xué);2013年

8 劉紅占;小麥雄性不育蛋白組學(xué)與泛素化修飾蛋白組學(xué)的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2014年

9 吳慧娟;飾膠蛋白聚糖對(duì)大鼠系膜細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及其泛素化調(diào)節(jié)的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

10 李楚芳;c-Abl與泛素類似蛋白hPLIC-2的相互作用[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 喻海燕;單核苷酸多態(tài)性影響蛋白質(zhì)泛素化修飾的研究[D];南京航空航天大學(xué);2014年

2 陳霞;家族性肌萎縮側(cè)索硬化動(dòng)物模型腰段脊髓泛素表達(dá)特征[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

3 徐聰;釀酒酵母泛素化酶與去泛素化酶基因敲除及泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域表達(dá)純化[D];華中科技大學(xué);2013年

4 王躍;Numb蛋白對(duì)α-synuclein蛋白的寡泛素化水平調(diào)控[D];鄭州大學(xué);2014年

5 殷四濤;UCH37對(duì)三種不同二泛素的水解作用及水解動(dòng)力學(xué)研究[D];蘇州大學(xué);2010年

6 白瑜;維甲酸受體Rarγ2的泛素化修飾[D];蘭州大學(xué);2006年

7 劉甜;泛素特異性蛋白酶USP26突變型去泛素化酶活性檢測(cè)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

8 涂華玉;組蛋白H2B泛素化修飾在減數(shù)分裂過程中作用的初步研究[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2011年

9 王秦豪;靶向性泛素化降解胰島素樣生長(zhǎng)因子受體和胰島素受體的腫瘤基因治療策略[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

10 楊微微;小類泛素化修飾在肺炎支原體感染中作用的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：針對(duì)禽白血病病毒整合酶的抗病毒機(jī)制及泛素化修飾研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：214444