本文選題：大腸濕熱證 + 郁金散　； 參考：《甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：大腸濕熱證(Large Intestine Dampness-heat Syndrome,LIDHS)系指濕熱蘊(yùn)結(jié)大腸致大腸傳導(dǎo)失司所表現(xiàn)以泄瀉下痢為主的一系列證候。為畜禽和人類臨床常見(jiàn)多發(fā)證,見(jiàn)于濕熱型腹瀉性疾病中。在現(xiàn)代畜禽養(yǎng)殖業(yè)中,腹瀉性疾病是困擾現(xiàn)代畜禽養(yǎng)殖的頑疾之一,而濕熱型腹瀉是其最主要的類型,隨集約化養(yǎng)殖和畜禽流動(dòng)性的增加,豬、牛和雞等畜禽中濕熱型腹瀉性疾病呈明顯上升趨勢(shì)。對(duì)人類而言,隨社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展多種因素容易損傷脾胃氣機(jī),進(jìn)而誘發(fā)大腸濕熱證。郁金散(YuJin Powder,YJP)為中獸醫(yī)臨床治療大腸濕熱證的常用經(jīng)典方劑。中獸醫(yī)臨床實(shí)踐表明,郁金散對(duì)濕熱型腹瀉性疾病有較好的治療效果。為研究大腸濕熱證的實(shí)質(zhì)及郁金散對(duì)其治療作用的機(jī)理,本研究通過(guò)設(shè)置復(fù)合因素,模擬發(fā)病條件,建立大鼠大腸濕熱證模型,應(yīng)用高、中、低劑量郁金散進(jìn)行治療。首先進(jìn)行臨床病理學(xué)研究,然后對(duì)大腸濕熱證最主要病變部位回腸和結(jié)腸進(jìn)行腸黏膜屏障研究,并進(jìn)一步對(duì)病變程度更高的結(jié)腸進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究,最后用血清代謝組學(xué)方法對(duì)大腸濕熱證表現(xiàn)出的全身性病理變化進(jìn)行探討。主要研究方法和結(jié)果如下:1.臨床病理學(xué)研究Wistar大鼠60只,雌雄各半,隨機(jī)分為6組,每組10只:正常對(duì)照組、模型組、自愈組、郁金散高劑量組、郁金散中劑量組、郁金散低劑量組。通過(guò)設(shè)置高糖高脂、饑飽失常、高溫高濕、飲酒和腹腔注射大腸桿菌等復(fù)合因素,模擬其發(fā)病條件,建立大腸濕熱證大鼠模型;模型復(fù)制成功后用高、中、低劑量郁金散進(jìn)行治療。然后對(duì)各組大鼠的癥狀體征、血常規(guī)、血生化、全血粘度、血清炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17和IL-23水平以及結(jié)腸、回腸、心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟等各主要臟器的病理變化進(jìn)行了檢測(cè)和觀察。結(jié)果顯示,模型大鼠的臨床癥狀、體征與大腸濕熱證診斷標(biāo)準(zhǔn)相吻合,且機(jī)體出現(xiàn)了血脂血黏度升高、脂肪肝、明顯的炎癥反應(yīng)及多臟器的瘀血病理變化。各劑量郁金散治療后均可改善其臨床癥狀和體征,回調(diào)血常規(guī)、血液生化及血清炎性因子水平,降低全血粘度,減輕各臟器的病理變化,并呈現(xiàn)出一定的劑量效應(yīng)關(guān)系,且以高劑量治療效果最好。2.腸黏膜屏障研究對(duì)正常對(duì)照組、模型組、自愈組和高劑量郁金散組各組大鼠,通過(guò)組織病理學(xué)方法觀察結(jié)腸和回腸黏膜完整性,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)結(jié)腸和回腸組織中TFF3、Occludin、ZO-1和MUC2 mRNA的表達(dá)量,ELISA法檢測(cè)血清中二胺氧化酶(dao)、d-乳酸(d-la)和內(nèi)毒素(et)、結(jié)腸和回腸黏液中的siga及結(jié)腸和回腸組織中炎性細(xì)胞因子tnf-α、il-1β、il-6、il-10、il-17和il-23水平變化,并應(yīng)用illuminamiseq高通量測(cè)序技術(shù)分別對(duì)正常對(duì)照組、模型組和高劑量郁金散組大鼠糞便中的微生物菌群進(jìn)行16srdnav3-v4區(qū)高通量測(cè)序,并分析了alpha多樣性、物種組成和豐度、菌群結(jié)構(gòu)等。結(jié)果顯示,相比正常對(duì)照組,模型大鼠結(jié)腸和回腸上皮完整性遭受破壞,occludin和zo-1顯著降低(p0.01或p0.05),tff3極顯著升高(p0.01),而muc2在回腸和結(jié)腸中變化不同,血清中dao、d-la和et的含量均顯著升高(p0.01);siga顯著升高(p0.05);促炎因子tnf-α、il-1β、il-6、il-17和il-23顯著或極顯著升高(p0.05或p0.01),抑炎因子il-10顯著或極顯著降低(p0.05或p0.01)。經(jīng)郁金散治療后,各項(xiàng)指標(biāo)均趨于或者接近正常水平。從正常對(duì)照組、模型組和高劑量郁金散組鑒定到的細(xì)菌覆蓋13個(gè)門(mén)、20個(gè)綱、28個(gè)目、46個(gè)科和75個(gè)屬。在門(mén)分類水平上,均以擬桿菌門(mén)、變形菌門(mén)和厚壁菌門(mén)為優(yōu)勢(shì)菌門(mén),但豐度在三組之間存在顯著差異。相比正常對(duì)照組,模型組中擬桿菌和變形菌的豐度顯著升高(p0.05),而厚壁菌豐度顯著降低(p0.05)。經(jīng)郁金散治療后,變形菌門(mén)和厚壁菌門(mén)豐度發(fā)生顯著回調(diào),擬桿菌變化較小。在科分類水平上,與正常對(duì)照組相比,模型組中紫單胞菌科、脫硫弧菌科、sutterellaceae、擬桿菌科、丹毒絲菌科、氨基酸球菌科、腸桿菌科、odoribacteraceae和螺桿菌科的豐度均升高;而普雷沃氏菌科、毛螺旋菌科、瘤胃菌科、優(yōu)桿菌科和乳桿菌科的豐度卻均下降。經(jīng)高劑量郁金散治療后,除普雷沃氏菌科的豐度與模型組相比繼續(xù)升高外,其它各科細(xì)菌豐度均顯著回調(diào)(p0.05)。3.結(jié)腸組織蛋白質(zhì)組學(xué)研究選取病變最嚴(yán)重的部位結(jié)腸組織,采用基于itraq的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)檢測(cè)分析模型組和正常對(duì)照組及高劑量郁金散組和模型組大鼠結(jié)腸組織的差異蛋白,并分析差異蛋白參與的通路。結(jié)果顯示,模型組和正常對(duì)照組之間共篩選出152種差異蛋白,其中84種上調(diào),68種下調(diào)。進(jìn)一步路徑分析表明脂肪消化和吸收、ampk信號(hào)路徑、氧化磷酸化、視黃醇代謝、iga產(chǎn)生的腸免疫網(wǎng)絡(luò)、fcepsilonri信號(hào)路徑、補(bǔ)體和凝集級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)、花生四烯酸代謝等在大腸濕熱證大鼠模型中受到顯著影響。經(jīng)郁金散治療后,與模型組相比共有221種蛋白發(fā)生顯著變化,其中139種上調(diào),82種下調(diào),并且對(duì)大腸濕熱證模型大鼠55種差異蛋白表現(xiàn)出直接的回調(diào)作用,以上異常路徑得到顯著改善。4.血清代謝組學(xué)研究對(duì)正常對(duì)照組、模型組和高劑量郁金散組大鼠血清分別用uplc-qtof-ms/ms技術(shù)進(jìn)行代謝組學(xué)檢測(cè),采用progenesisqi軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)預(yù)處理,使用MetaboAnalyst對(duì)預(yù)處理后的數(shù)據(jù)進(jìn)行單變量分析和模式識(shí)別多變量分析。根據(jù)差異倍數(shù)(Fold change,FC)≥1.5或≤0.677,q-value0.05以及PLS-DA模式下的VIP≥1的原則分別篩選模型組和正常對(duì)照組之間及高劑量郁金散組和模型組之間的差異代謝物,然后對(duì)差異代謝物進(jìn)行相關(guān)性分析和熱圖聚類分析。將獲得的差異代謝物分別輸入KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)查找相關(guān)代謝通路。結(jié)果顯示,模型組和正常對(duì)照組共篩選出41種差異代謝物,包括�；撬�、牛璜鵝去氧膽酸、L-肉堿、L-乙酰肉堿、油酰胺、甘油-3-磷酸、馬尿酸、磷脂酰膽堿類、溶血磷脂酰膽堿類等,主要涉及脂類代謝、己糖胺合成通路、苯丙氨酸代謝及色氨酸代謝。治療組和模型組共篩選出20種差異代謝物,包括D-葡萄糖、D-乳酸、β-羥丁酸、甜菜堿、硬脂酰肉堿、溶血磷脂酰膽堿類等,主要涉及脂肪分解、脂肪酸β-氧化,色氨酸代謝和苯丙氨酸代謝。本研究證明,通過(guò)模擬發(fā)病條件,成功建立了大腸濕熱證大鼠模型,其實(shí)質(zhì)主要體現(xiàn)在以下四個(gè)方面:(1)其主要臨床癥狀為腹瀉,主要的病變部位在回腸和結(jié)腸,以回腸和結(jié)腸黏膜損傷、炎癥和瘀血,并伴發(fā)全身性的炎癥和淤血為其最典型的病理特征;(2)典型病變部位回腸和結(jié)腸的腸黏膜機(jī)械屏障、化學(xué)屏障、免疫屏障和生物屏障均受到不同程度破壞;(3)大腸濕熱證發(fā)生的關(guān)鍵是由脂質(zhì)代謝紊亂、微循環(huán)和能量代謝障礙、視磺醇代謝紊亂以及生物因子等誘發(fā)消化道免疫網(wǎng)絡(luò)失調(diào)、穩(wěn)態(tài)被破壞,使機(jī)體處于過(guò)敏狀態(tài)而導(dǎo)致腸道損傷與炎癥反應(yīng);(4)膽酸合成與膽汁分泌、脂肪合成與分解、磷脂代謝、花生四烯酸代謝等脂類代謝,己糖胺合成通路,苯丙氨酸代謝、色氨酸代謝通路等發(fā)生紊亂與大腸濕熱證的發(fā)生關(guān)系密切。郁金散對(duì)大腸濕熱證的治療主要體現(xiàn)在:(1)發(fā)揮了抗腹瀉、抗炎、降血脂、緩解血瘀以及調(diào)節(jié)和保護(hù)多臟器等綜合作用;(2)修復(fù)了腸黏膜的機(jī)械屏障、化學(xué)屏障、免疫屏障和生物屏障;(3)調(diào)控了脂質(zhì)代謝、微循環(huán)和能量代謝、視黃醇代謝、消化道免疫網(wǎng)絡(luò)和穩(wěn)態(tài);(4)加強(qiáng)了脂肪分解、脂肪酸β-氧化、葡萄糖有氧氧化,調(diào)控了色氨酸代謝和苯丙氨酸代謝等。本研究為揭示大腸濕熱證的實(shí)質(zhì)提供了重要信息,為大腸濕熱證的臨床用藥提供了指導(dǎo);為尋找濕熱型腹瀉性疾病的靶點(diǎn)、擴(kuò)大郁金散的臨床應(yīng)用、開(kāi)發(fā)治療腹瀉性疾病的藥物奠定理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to study the pathogenesis of damp - heat syndrome in large intestine , it is concluded that Yu Jin Powder ( YJP ) is one of the most common classical prescriptions for the treatment of damp - heat syndrome . The levels of TFF3 , IL - 1尾 , IL - 6 , IL - 10 , IL - 17 and IL - 23 in colon , ileum , heart , liver , spleen , lung and kidney were measured and observed . The results showed that there were 152 kinds of difference proteins in the model group and the normal control group . The results showed that there were 152 kinds of difference proteins between the model group and the normal control group . The results showed that there were 152 difference proteins in the model group and normal control group . The results showed that there were 41 different metabolites , including D - glucose , D - lactic acid , 尾 - hydroxybutyric acid , betaine , phosphatidylcholine , lylhatidylcholine and so on . ( 3 ) The key to the treatment of damp - heat syndrome in large intestine is that : ( 1 ) It plays an important role in regulating lipid metabolism , resisting inflammation , reducing blood fat , reducing blood stasis , regulating and protecting multiple organs .
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S853.2
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本文編號(hào)：2031880