本文關(guān)鍵詞：日糧硒缺乏對雞肝臟蛋白質(zhì)組學(xué)及自噬變化的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《東北農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2015年

日糧硒缺乏對雞肝臟蛋白質(zhì)組學(xué)及自噬變化的影響

劉春朋  

【摘要】：硒(Selenium,Se)是動物機(jī)體必須的一種微量元素,對動物的生長、發(fā)育、繁殖等方面都起到極其重要的作用。肝臟是畜禽缺硒性疾病的主要靶器官之一。硒缺乏時,肝代謝功能紊亂,導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷,甚至壞死。目前,對硒缺乏性肝損傷機(jī)制從氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡等角度進(jìn)行了大量研究,但機(jī)制尚未完全闡述清楚。因此,進(jìn)一步對缺硒雞肝臟組織的損傷機(jī)制進(jìn)行探討,將極大地豐富這一領(lǐng)域的研究內(nèi)容。本試驗(yàn)在建立雞缺硒性肝組織損傷模型基礎(chǔ)上,對肝臟組織進(jìn)行顯微和超微結(jié)構(gòu)觀察;檢測氧化應(yīng)激相關(guān)因子(GSH-Px、GSH、MDA、NO和i NOS)的含量和/或酶活性,實(shí)時定量PCR法檢測了21種硒蛋白(Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Sepn1、Sepp1、Selo、Sepx1、Selu、Txnrd1、Txnrd2、Txnrd3、Dio1、Dio2、Dio3、SPS2、Seli、Selm、Sel Pb、Sep15和Sels)、熱休克蛋白基因家族(Hsp27、Hsp40、Hsp60、Hsp70和Hsp90)m RNA的表達(dá)量;運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對硒缺乏雞肝臟組織進(jìn)行蛋白組水平檢測,分析上調(diào)或下調(diào)蛋白,篩選出自噬相關(guān)通路;通過PCR法檢測自噬相關(guān)基因(LC3-1、LC3-2、ATG5、Dynein,TOR和Beclin1)m RNA的表達(dá)量和蛋白免疫印跡法檢測(LC3-1、LC3-2、Dynein和Beclin1)蛋白含量,進(jìn)而驗(yàn)證篩選出的自噬通路,旨在從自噬角度闡明雞缺硒性肝損傷的發(fā)病機(jī)制,為防治缺硒性肝損傷提供理論依據(jù),也為比較醫(yī)學(xué)提供借鑒。本研究結(jié)果如下:(1)病理組織學(xué)觀察到飼喂低硒日糧的雞肝細(xì)胞內(nèi)發(fā)生炎性浸潤、肝組織結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞,甚至出現(xiàn)肝組織壞死,超微結(jié)構(gòu)觀察到低硒時雞肝細(xì)胞亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)(線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng))受損明顯,同時還在肝細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)了自噬,證明自噬參與硒缺乏性肝損傷的病理過程。(2)試驗(yàn)組肝組織中GSH-Px活性和GHS含量隨著時間延長,呈逐漸下降趨勢,而MDA和NO含量及i NOS活性呈逐漸升高趨勢,與對照組相比差異顯著(P0.05),表明隨著病程的延長,肝組織中氧化應(yīng)激加重。(3)在試驗(yàn)期間,試驗(yàn)組肝組織中18種硒蛋白基因(Gpx1、Gpx2、Gpx3、Gpx4、Sepn1、Sepp1、Selo、Sepx1、Selu、Txnrd1、Txnrd2、Txnrd3、Dio1、Dio2、SPS2、Selm、Sel Pb和Sels)mRNA表達(dá)量均呈下降趨勢,Sep15基因則呈現(xiàn)先升高后降低趨勢,與對照組相比差異顯著(P0.05),seli和Dio3基因mRNA表達(dá)量與對照組相比差異不顯著,提示在雞肝組織中硒調(diào)控硒蛋白基因表達(dá)存在差異性。(4)持續(xù)的硒缺乏導(dǎo)致雞肝臟Hsp27、Hsp40、Hsp60、Hsp70和Hsp90的m RNA表達(dá)增加,而編碼的蛋白(Hsp60、Hsp70和Hsp90)的表達(dá)也隨之上調(diào),表明其參與了肝損傷的發(fā)生。(5)通過蛋白質(zhì)組學(xué)初步分析,發(fā)現(xiàn)缺硒致雞肝臟中113個差異蛋白上調(diào),95個差異蛋白下調(diào)。KEGG代謝通路分析表明差異蛋白主要參與自噬相關(guān)通路,進(jìn)一步對自噬通路進(jìn)行Pathway富集分析發(fā)現(xiàn)差異性表達(dá)蛋白質(zhì)主要參與6條自噬信號通路,其中MARK和mTOR信號途徑是主要富集通路。(6)試驗(yàn)組肝組織中LC3-1、LC3-2、ATG5、Dynein和Beclin1隨著時間延長呈逐漸升高趨勢,而TOR則是呈先升高后降低趨勢,與對照組相比差異顯著(P0.05)。結(jié)合形態(tài)學(xué)結(jié)果表明,自噬是缺硒性肝損傷病理機(jī)制之一。綜上所述,缺硒時雞肝臟發(fā)生氧化應(yīng)激,雞肝臟組織中HSPs表達(dá)量增加,通過蛋白質(zhì)組學(xué)分析,篩選出自噬的主要信號通路。從形態(tài)學(xué)和自噬相關(guān)基因檢測結(jié)果證實(shí),自噬是缺硒性肝損傷病理機(jī)制之一。這一結(jié)果豐富了缺硒性肝損傷的病理學(xué)機(jī)制,為進(jìn)一步研究缺硒性肝損傷和比較醫(yī)學(xué)奠定了基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S831.5
【目錄】：

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