本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌對(duì)奶牛乳腺細(xì)胞幾種生長因子表達(dá)及其信號(hào)機(jī)制作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2015年

金黃色葡萄球菌對(duì)奶牛乳腺細(xì)胞幾種生長因子表達(dá)及其信號(hào)機(jī)制作用的研究

吳建美  

【摘要】：金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S. aureus)是引起奶牛乳腺炎的一種重要的革蘭氏陽性菌,因其對(duì)奶牛乳腺持續(xù)性感染,造成乳腺組織損傷和增生性變化,使奶牛乳腺泌乳量降低或失去泌乳功能而最終被淘汰。關(guān)于S. aureus引起奶牛乳腺炎的研究主要集中在病原、診斷、治療和炎性細(xì)胞因子的調(diào)控方面,對(duì)于乳腺纖維化的研究少。S. aureus感染機(jī)體后,被宿主細(xì)胞細(xì)胞膜上模式識(shí)別受體(PPRs)識(shí)別,激活下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中核轉(zhuǎn)錄因子-κB (Nuclear Factor kappaB, NF-κB)和激活蛋白-1 (AP-1),誘導(dǎo)生長因子及細(xì)胞因子等產(chǎn)生。本文通過研究S. aureus對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞(BMEC)和奶牛乳腺成纖維細(xì)胞(BMFB)TGF-β1、bFGF、 PDGF-BB及其相應(yīng)受體TβR1、FGFR2和PDGFRβ表達(dá)的作用,以及對(duì)TLR2.TLR4. NF-κB和AP-1表達(dá)的影響,以探討S. aureus引起奶牛乳腺炎纖維化的發(fā)病機(jī)理。本試驗(yàn)采用不同濃度的熱滅活的S. aureus(0 CFU/mL、105 CFU/mL、106 CFU/mL和108CFU/mL)作用于體外培養(yǎng)的BMEC和BMFB,于不同的時(shí)間點(diǎn)(6h、12 h、24 h和48 h)提取細(xì)胞的總RNA和總蛋白,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(qPCR)和Western-blot方法檢測(cè)TGF-β1、bFGF、PDGF-BB及其相應(yīng)受體TβRI、 FGFR2、PDGFRβ的mRNA和蛋白表達(dá)水平；采用qPCR和Western-b lot方法檢測(cè)TLR2和TLR4的mRNA和蛋白表達(dá)水平；采用Vestern-blot方法檢測(cè)NF-KB和AP-1的磷酸化蛋白表達(dá)水平；使用NF-KB和AP-1特異性抑制劑L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)和Sp-600125(1,9-pyrazoloanthrone anthrapyrazolone)對(duì)核轉(zhuǎn)錄因子活性抑制,再用105 CFU/mL的熱滅活S. aureus菌液作用細(xì)胞,采用qPCR和Western-blot方法檢測(cè)TGF-β1、bFGF、PDGF-BB的mRNA和蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行Anova雙因素方差處理分析組間差異性,運(yùn)用GraphPad Prism 5數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果表明：(1)S. aureus對(duì)BMEC和BMFB TGF-β1、bFGF、PDGF-BB、TβRI、 FGFR2和PDGFRβ的pmRNA和蛋白的表達(dá)基本起促進(jìn)作用。BMEC TGF-β1、bFGF、 PDGF-BB、TpRI、FGFR2和PDGFRβ、mRNA的表達(dá)均呈正時(shí)效關(guān)系,蛋白的表達(dá)均是隨著作用時(shí)間延長而升高,但是在作用后期升高趨勢(shì)漸緩。BMFB TGF-β1、 bFGF、PDGF-BB、TβRI、FGFR2和PDGFR β的mRNA先隨著S. aureus作用時(shí)間的延長表達(dá)量呈升高趨勢(shì),然后升高趨勢(shì)漸緩,蛋白的表達(dá)呈正時(shí)效關(guān)系。BMEC和BMFB TβR1、FGFR2、PDGFRβ的表達(dá)和TGF-β1、bFGF、PDGF-BB的產(chǎn)生在一定的時(shí)間內(nèi)有極顯著的相關(guān)性。(2)S. aureus對(duì)BMEC和BMFB TLR2和TLR4 mRNA和蛋白的表達(dá)也起到促進(jìn)作用,BMEC TLR2和TLR4 mRNA和蛋白表達(dá)均呈正時(shí)效性；BMFBTLR2、TLR4 mRNA的表達(dá)呈正時(shí)效性,TLR2蛋白表達(dá)呈正時(shí)效性,TLR4蛋白呈負(fù)時(shí)效性。S. aureus顯著促進(jìn)了BMEC和BMFB p-NF-KB-p65和p-c-jun蛋白的表達(dá),基本呈正時(shí)效關(guān)系。(3)NF-κB和AP-1的特異性抑制劑能顯著抑制BMEC口BMFB TGF-β1、bFGF和PDGF-BB mRN A和蛋白的表達(dá)水平。(4)TGF-β1、bFGF和PDGF-BB mRNA及蛋白的表達(dá)與TLR2、TLR4、NF-κB和AP-1的表達(dá)有顯著的相關(guān)性。本研究證實(shí)：S. aureus能夠促進(jìn)BMEC和BMFB TGF-β1、bFGF、PDGF-BB、 TβRI、FGFR2和P DGFRβ以及TLR2、TLR4、 NF-κB和AP-1的表達(dá),TGF-β1、bFGF和P DGF-BB的產(chǎn)生及分泌與TLRs-NF-κB口TLRs-AP-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有顯著的相關(guān)性,本研究初步明確了金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)奶牛乳腺上皮細(xì)胞和奶牛乳腺成纖維細(xì)胞產(chǎn)生纖維化相關(guān)細(xì)胞生長因子的分子機(jī)理。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.611
【目錄】：

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8 冉新澤;鄭懷恩;王艾平;王鋒超;韓京;;他汀對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞輻射損傷組織因子與細(xì)胞調(diào)亡的影響[A];中國毒理學(xué)會(huì)放射毒理專業(yè)委員會(huì)第七次、中國毒理學(xué)會(huì)免疫毒理專業(yè)委員會(huì)第五次、中國環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)致突專業(yè)委員會(huì)第二次、中國環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)致畸專業(yè)委員會(huì)第二次、中國環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)致癌專業(yè)委員會(huì)第二次全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

9 崔承彬;閆少羽;蔡兵;趙慶春;姚新生;曲戈霞;;黑果黃皮Clausena dunniana Levl中咔唑生物堿類新細(xì)胞周期抑制劑及細(xì)胞調(diào)亡誘導(dǎo)劑的核磁共振研究[A];第十一屆全國波譜學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2000年

10 吳耀輝;鄒萍;;Sunrivin基因沉默對(duì)K562細(xì)胞調(diào)亡影響的研究[A];第11次中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文匯編[C];2007年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張?zhí)锟?[N];中國人口報(bào);2002年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 朱海燕;熱休克蛋白60在凋亡細(xì)胞和大腸桿菌的表面表達(dá)及意義研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

2 呂志遠(yuǎn);上皮細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞自我分子標(biāo)志CD47在細(xì)胞表面分布狀態(tài)變化機(jī)制的研究[D];南京大學(xué);2012年

3 秦勇;細(xì)胞內(nèi)ROS水平改變對(duì)細(xì)胞活性及相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)途徑的影響[D];浙江大學(xué);2012年

4 劉瀾濤;輻射誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表型改變及其分子調(diào)節(jié)機(jī)制的初步研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2013年

5 王鵬;RING結(jié)構(gòu)泛素連接酶RNF186的功能研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2013年

6 武當(dāng);γδT細(xì)胞在結(jié)腸癌過繼免疫治療中的作用及機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2015年

7 龔平生;RNA干擾survivin基因表達(dá)增強(qiáng)HeLa細(xì)胞電離輻射敏感性的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2008年

8 李覃;微囊藻毒素LR刺激HEK293細(xì)胞產(chǎn)生的PP2A調(diào)節(jié)機(jī)制及其對(duì)細(xì)胞凋亡命運(yùn)的影響[D];浙江大學(xué);2013年

9 畢嘉成;NK細(xì)胞抑制性受體TIGIT的功能研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2014年

10 王明明;AT細(xì)胞輻射敏感性的研究[D];蘇州大學(xué);2004年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃風(fēng)迎;細(xì)胞松馳素D聚乙二醇脂質(zhì)體抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)研究[D];海南大學(xué);2012年

2 楊超;雞NK細(xì)胞的分離鑒定及靶細(xì)胞篩選[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

3 陳晶晶;TIP30感受細(xì)胞氧化應(yīng)激誘導(dǎo)p53依賴的細(xì)胞凋亡機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

4 李詠;蘋果酸、γ-氨基丁酸對(duì)Hela細(xì)胞端粒酶活性影響的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

5 余志堅(jiān);P糖蛋白對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞輻射敏感性負(fù)調(diào)控機(jī)制的初步研究[D];中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué);2003年

6 孫毅;亞硒酸鈉抑制K562細(xì)胞的生長及誘導(dǎo)其凋亡的探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

7 聶建增;家蠅蛹凝集素對(duì)HepG2細(xì)胞的抗腫瘤作用及機(jī)理研究[D];天津科技大學(xué);2012年

8 吳云霞;光動(dòng)力學(xué)療法誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡機(jī)制的初步研究[D];華南師范大學(xué);2005年

9 彭坤;二甲基亞砜抑制培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究[D];武漢大學(xué);2004年

10 殷楚云;急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系THP-1側(cè)群細(xì)胞的分選、鑒定與富集[D];鄭州大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌對(duì)奶牛乳腺細(xì)胞幾種生長因子表達(dá)及其信號(hào)機(jī)制作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：182101