本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌對奶牛乳腺細胞幾種生長因子表達及其信號機制作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2015年

金黃色葡萄球菌對奶牛乳腺細胞幾種生長因子表達及其信號機制作用的研究

吳建美  

【摘要】：金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S. aureus)是引起奶牛乳腺炎的一種重要的革蘭氏陽性菌,因其對奶牛乳腺持續(xù)性感染,造成乳腺組織損傷和增生性變化,使奶牛乳腺泌乳量降低或失去泌乳功能而最終被淘汰。關(guān)于S. aureus引起奶牛乳腺炎的研究主要集中在病原、診斷、治療和炎性細胞因子的調(diào)控方面,對于乳腺纖維化的研究少。S. aureus感染機體后,被宿主細胞細胞膜上模式識別受體(PPRs)識別,激活下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中核轉(zhuǎn)錄因子-κB (Nuclear Factor kappaB, NF-κB)和激活蛋白-1 (AP-1),誘導(dǎo)生長因子及細胞因子等產(chǎn)生。本文通過研究S. aureus對奶牛乳腺上皮細胞(BMEC)和奶牛乳腺成纖維細胞(BMFB)TGF-β1、bFGF、 PDGF-BB及其相應(yīng)受體TβR1、FGFR2和PDGFRβ表達的作用,以及對TLR2.TLR4. NF-κB和AP-1表達的影響,以探討S. aureus引起奶牛乳腺炎纖維化的發(fā)病機理。本試驗采用不同濃度的熱滅活的S. aureus(0 CFU/mL、105 CFU/mL、106 CFU/mL和108CFU/mL)作用于體外培養(yǎng)的BMEC和BMFB,于不同的時間點(6h、12 h、24 h和48 h)提取細胞的總RNA和總蛋白,采用實時熒光定量PCR法(qPCR)和Western-blot方法檢測TGF-β1、bFGF、PDGF-BB及其相應(yīng)受體TβRI、 FGFR2、PDGFRβ的mRNA和蛋白表達水平；采用qPCR和Western-b lot方法檢測TLR2和TLR4的mRNA和蛋白表達水平；采用Vestern-blot方法檢測NF-KB和AP-1的磷酸化蛋白表達水平；使用NF-KB和AP-1特異性抑制劑L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)和Sp-600125(1,9-pyrazoloanthrone anthrapyrazolone)對核轉(zhuǎn)錄因子活性抑制,再用105 CFU/mL的熱滅活S. aureus菌液作用細胞,采用qPCR和Western-blot方法檢測TGF-β1、bFGF、PDGF-BB的mRNA和蛋白表達。實驗數(shù)據(jù)運用SPSS 19.0軟件進行Anova雙因素方差處理分析組間差異性,運用GraphPad Prism 5數(shù)據(jù)分析軟件進行相關(guān)性分析。結(jié)果表明：(1)S. aureus對BMEC和BMFB TGF-β1、bFGF、PDGF-BB、TβRI、 FGFR2和PDGFRβ的pmRNA和蛋白的表達基本起促進作用。BMEC TGF-β1、bFGF、 PDGF-BB、TpRI、FGFR2和PDGFRβ、mRNA的表達均呈正時效關(guān)系,蛋白的表達均是隨著作用時間延長而升高,但是在作用后期升高趨勢漸緩。BMFB TGF-β1、 bFGF、PDGF-BB、TβRI、FGFR2和PDGFR β的mRNA先隨著S. aureus作用時間的延長表達量呈升高趨勢,然后升高趨勢漸緩,蛋白的表達呈正時效關(guān)系。BMEC和BMFB TβR1、FGFR2、PDGFRβ的表達和TGF-β1、bFGF、PDGF-BB的產(chǎn)生在一定的時間內(nèi)有極顯著的相關(guān)性。(2)S. aureus對BMEC和BMFB TLR2和TLR4 mRNA和蛋白的表達也起到促進作用,BMEC TLR2和TLR4 mRNA和蛋白表達均呈正時效性；BMFBTLR2、TLR4 mRNA的表達呈正時效性,TLR2蛋白表達呈正時效性,TLR4蛋白呈負時效性。S. aureus顯著促進了BMEC和BMFB p-NF-KB-p65和p-c-jun蛋白的表達,基本呈正時效關(guān)系。(3)NF-κB和AP-1的特異性抑制劑能顯著抑制BMEC口BMFB TGF-β1、bFGF和PDGF-BB mRN A和蛋白的表達水平。(4)TGF-β1、bFGF和PDGF-BB mRNA及蛋白的表達與TLR2、TLR4、NF-κB和AP-1的表達有顯著的相關(guān)性。本研究證實：S. aureus能夠促進BMEC和BMFB TGF-β1、bFGF、PDGF-BB、 TβRI、FGFR2和P DGFRβ以及TLR2、TLR4、 NF-κB和AP-1的表達,TGF-β1、bFGF和P DGF-BB的產(chǎn)生及分泌與TLRs-NF-κB口TLRs-AP-1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有顯著的相關(guān)性,本研究初步明確了金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)奶牛乳腺上皮細胞和奶牛乳腺成纖維細胞產(chǎn)生纖維化相關(guān)細胞生長因子的分子機理。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.611
【目錄】：

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4 李詠;蘋果酸、γ-氨基丁酸對Hela細胞端粒酶活性影響的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

5 余志堅;P糖蛋白對MCF-7/ADR細胞輻射敏感性負調(diào)控機制的初步研究[D];中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué);2003年

6 孫毅;亞硒酸鈉抑制K562細胞的生長及誘導(dǎo)其凋亡的探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

7 聶建增;家蠅蛹凝集素對HepG2細胞的抗腫瘤作用及機理研究[D];天津科技大學(xué);2012年

8 吳云霞;光動力學(xué)療法誘導(dǎo)細胞凋亡機制的初步研究[D];華南師范大學(xué);2005年

9 彭坤;二甲基亞砜抑制培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞增殖的實驗研究[D];武漢大學(xué);2004年

10 殷楚云;急性單核細胞白血病細胞系THP-1側(cè)群細胞的分選、鑒定與富集[D];鄭州大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌對奶牛乳腺細胞幾種生長因子表達及其信號機制作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：182101