本文關鍵詞：茄子遺傳多樣性研究與遺傳連鎖圖譜構建，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《河北農業(yè)大學》 2015年

茄子遺傳多樣性研究與遺傳連鎖圖譜構建

陳雪平  

【摘要】：Solanum melongena L.作為最重要的茄子栽培種在亞洲、歐洲中南部和地中沿岸等地得到廣泛種植,其年生產量和生產值均已躍居于世界蔬菜生產的前十位。但目前茄子遺傳育種的研究水平與其作為世界性大宗蔬菜的生產地位不相稱,嚴重制約著茄子生產的發(fā)展與產品的質量水平。分析可能造成這種局面的原因,主要有以下幾點:一是茄子栽培種內遺傳背景狹窄,直接制約著遺傳研究和育種實踐水平;二是茄子數量性狀遺傳的研究手段仍局限于傳統(tǒng)方法;三是茄子重要經濟性狀的關聯標記開發(fā)和基因挖掘嚴重滯后。在目前關于茄子遺傳育種的研究中,主要體現在遺傳多樣性研究所用資源的地理來源的豐度不高,用于遺傳多樣性研究的分子標記資源有限,已構建的遺傳圖譜分子標記的飽和度不夠,鑒定的與重要經濟性狀相關的QTL及與其緊密連鎖的可用于分子標記輔助育種(marker-assisted selection,MAS)和基因組選擇育種(genomic selection,GS)的分子標記較少。針對上述問題與不足,本研究以來自5個洲33個國家的茄子種質資源為試材,利用SSR和SRAP兩種分子標記,結合形態(tài)學表型性狀鑒定,采用關聯作圖的方法對其進行遺傳多樣性及性狀關聯標記的研究;同時,以存在多個性狀差異的高代自交系為親本獲得F1及F2代分離群體,利用高通量簡化基因組測序技術開發(fā)高多態(tài)性的新型分子標記,構建高密度的茄子遺傳圖譜,開展目標性狀的QTL定位研究。主要研究結果如下:1.對133份茄子及其近緣種的27個形態(tài)學性狀進行遺傳多樣性分析表明,研究群體內存在著豐富的形態(tài)變異,Shannon多樣性指數H'和均一度值J的總體平均值分別為2.110和0.753;與育種密切相關的性狀中果形指數、果長、果色、萼下果色和果形等變異系數較大;葉刺、果萼刺和果棱的變異系數最高,可作為植物學分類的重要依據。依據因子分析結果對供試材料進行形態(tài)學聚類分析,可將其清晰劃分為7個組,命名為GⅠ-GⅦ,GⅠ組進而分為4個亞組,命名為sub G1-sub G4。2.利用5對SSR引物和25對SRAP引物對133份材料進行遺傳多樣性分析表明,引物多態(tài)性條帶率99.24%,各位點PIC值范圍為0.015-0.500,平均值0.312;有效等位基因數范圍1.2905-1.7459,平均值為1.5114;Nei's多樣性指數H范圍為0.1701-0.4056,平均值為0.2992;Shannon指數I范圍為0.02661-0.5855,平均值為0.4550。相似系數范圍0.024-0.968,平均值0.764,反映出群體內分子水平的遺傳多樣性不高,遺傳背景較為狹窄。利用PIC0.25的位點聚類,可將材料劃分為M1-M6六個類別。S.melongena和S.dasyphyllum、S.integrifolium、S.aethiopicum、S.macrocarpen、S.viarum及S.anguivi之間的平均相似系數依次為0.837、0.828、0.822、0.767、0.589和0.541。3.利用Structure2.3.4和Tassel3.0對供試材料分子標記0、1數據矩陣進行群體結構分析和關聯分析表明,Structure將供試材料劃分為A1、A2和A3三個亞群,各亞群內Q值0.6的個體材料所占比例依次為89.66%,91.30%和70.69%,表明供試群體血緣較為單一,尤其是A1和A2兩個亞群遺傳基礎較貧乏。通過Tassel作關聯分析找到了28個標記位點與供試材料的14個性狀在R20.05和P0.001水平上相關,其中4個位點與性狀關聯度極高(P10-4),即GA34SA11-2(R20.1)和OD3SA16-5與花冠直徑、GA34SA11-4與株型和FC8ME7-3與花柱長度;此外,有9個性狀分別同時與2個以上標記關聯。4.以茄子高代自交系609和749及二者F2群體為試材,利用基于簡化基因組深度測序的SLAF-seq技術,構建了由120,925個SLAF標簽組成的文庫,親本平均測序深度24.40×,子代平均測序深度為4.09×;共獲得多態(tài)性SLAF標簽6883個;以擬南芥為對照材料,按照與供試材料相同的程序建立SLAF標簽文庫,監(jiān)控試驗過程準確性和有效性,結果表明雙端比對效率在79.19%,酶切效率為96.74%,絕大多數reads插入片段的長度分布于414bp-464bp預期范圍內。通過對親本和子代進行2等位基因編碼,篩選出5543個滿足aa×bb類型的多態(tài)性SLAF標簽,占開發(fā)文庫SLAF標簽總量的4.38%。5.據測序深度、SNP數量和親本基因型純合等原則,從5543個多態(tài)性SLAF標簽中篩選出1782個作為上圖標記(Marker),利用High Map軟件對各連鎖群內的Markers進行遺傳距離估算和線性排列,獲得茄子高密度遺傳圖譜NHE2015,包含12個連鎖群,總圖距為1,454.63c M,平均圖距0.82 c M,最大間隙5.42c M。Markers平均測序深度32.73×,父本和母本平均測序深度分別為49.72×和42.32×,子代平均測序深度為6.17×;群體材料間各連鎖群內的單體來源一致,圖譜Markers重組關系圖對角線呈現出一條清晰的黃線,排圖準確可靠。6.通過CIM算法檢測到9個QTL,其中6個與果形指數相關,fs11.1、fs11.2、fs11.3、fs11.4和fs11.5位于11連鎖群的Marker1404739-Marker14859之間,標記區(qū)間大小在1.0-2.4c M之間,貢獻率均在20%以上,為主效QTL。fs8.1位于第8連鎖群上Marker565746-Marker1200185之間,標記區(qū)間大小為3.2c M,貢獻率為7.26%,表現為微效QTL。檢測到3個與萼下果色相關的QTL,命名為cuc6.1、cuc6.2和cuc6.3,位于第6連鎖群的Marker1661695-Marker591764之間,QTL大小在1.1-3.0之間。該組QTL的貢獻率均在10%以上,表現為主效QTL。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：河北農業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S641.1
【目錄】：

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