本文關(guān)鍵詞：乙酸參與奶牛乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)乳脂肪與乳蛋白合成的調(diào)控機(jī)理研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2015年

乙酸參與奶牛乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)乳脂肪與乳蛋白合成的調(diào)控機(jī)理研究

生冉  

【摘要】：本試驗(yàn)主要研究了乙酸對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞中(BMECs)乳脂肪和乳蛋白合成及相關(guān)基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平與蛋白表達(dá)水平的影響,并通過抑制劑干預(yù)mTOR信號(hào)通路和JAK2/STAT5信號(hào)通路及小分子干擾RNA (siRNA)沉默mTOR信號(hào)通路中的關(guān)鍵基因eIF4E,探討了乙酸參與乳脂肪及乳蛋白合成的調(diào)控機(jī)理,為探尋乳脂肪及乳蛋白合成調(diào)控通路上的交匯點(diǎn)、科學(xué)調(diào)控乳脂肪與乳蛋白的合成提供了理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐。論文分為4個(gè)試驗(yàn),試驗(yàn)1研究了不同濃度的乙酸(0,4,6,8,10和12mmol/L)對(duì)BMECs活力、甘油三酯(TAG)合成、乳脂肪及乳蛋白合成相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平、以及p-酪蛋白和PPARG蛋白表達(dá)水平的影響,篩選出了乙酸促進(jìn)乳脂肪和乳蛋白合成的最佳濃度,初探了乙酸對(duì)乳脂肪及乳蛋白合成的調(diào)控機(jī)理。試驗(yàn)2以6 mmol/L乙酸作為底物,利用雷帕霉素抑制mTOR信號(hào)通路,通過檢測(cè)BMECs細(xì)胞活力、甘油三酯(TAG)合成、乳脂肪及乳蛋白合成相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平、以及p-酪蛋白和PPARG蛋白表達(dá)水平,探討了乙酸通過mTOR信號(hào)通路同時(shí)調(diào)控乳脂肪及乳蛋白合成的機(jī)理。試驗(yàn)3在試驗(yàn)1基礎(chǔ)上以6 mmol/L乙酸作為底物,利用AG490抑制JAK2/STAT5信號(hào)通路,通過檢測(cè)BMECs活力、TAG合成、乳脂肪及乳蛋白合成相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平、以及p-酪蛋白和PPARG蛋白表達(dá)水平,探討了乙酸通過JAK2/STAT5信號(hào)通路同時(shí)調(diào)控乳脂肪及乳蛋白合成的機(jī)理。試驗(yàn)4采用siRNA手段沉沒mTOR信號(hào)通路中的關(guān)鍵因子eIF4E,通過檢測(cè)BMECs活力、甘油三酯TAG合成、乳脂肪及乳蛋白合成相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平、以及p-酪蛋白和PPARG蛋白表達(dá)水平,進(jìn)一步研究了eIf4E是否是乙酸通過mTOR信號(hào)通路參與乳脂肪及乳蛋白合成的交匯點(diǎn)。本試驗(yàn)研究初步得到以下結(jié)果：①乙酸對(duì)BMECs中TAG的合成具有促進(jìn)作用,隨著乙酸濃度的增加,顯著促進(jìn)了FASN、ACACA、FABP3、SREBP1及PPARG的mRNA相對(duì)表達(dá)量,添加劑量以8-12 mmol/L時(shí)較好；CD36 mRNA相對(duì)表達(dá)量隨著乙酸濃度的增加顯著降低；PPARG蛋白表達(dá)結(jié)果與基因表達(dá)結(jié)果一致。乙酸可顯著下調(diào)αs1-酪蛋白基因CSN1S1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量,濃度為8-12 mmol/L時(shí)較低;但是可上調(diào)p-酪蛋白基因表達(dá)量及蛋白表達(dá)水平；上調(diào)CSN3 mRNA相對(duì)表達(dá)量,均以6和8 mmol/L時(shí)效果較好；6和8 mmol/L乙酸促進(jìn)了mTOR通路內(nèi)相關(guān)基因及JAK2和STAT5的基因表達(dá)。綜合以上各項(xiàng)指標(biāo),乙酸濃度為6 mmol/L時(shí)對(duì)乳脂肪和乳蛋白合成的促進(jìn)效果均較好。②雷帕霉素阻斷mTOR信號(hào)通路,抑制了BMECs的增殖,且濃度越高,細(xì)胞增殖受阻越嚴(yán)重,100nmol/L濃度為雷帕霉素的適宜濃度。③雷帕霉素阻斷mTOR信號(hào)通路,BMECs中FASN、ACACA、SCD1、FABP3、 SREBP1及PPARG基因表達(dá)顯著下降；PPARG蛋白表達(dá)顯著下降;TAG合成沒有顯著變化。采用雷帕霉素阻斷mTOR信號(hào)通路,CSN1S1、β-酪蛋白、CSN3、mTOR, eIF4E、4EBP1及S6K1基因表達(dá)均下降；p-酪蛋白的蛋白表達(dá)顯著下降。提示nTOR信號(hào)通路通過SREBP1和PPARG調(diào)控其它乳脂肪合成相關(guān)基因。④乙酸可能通過mTOR信號(hào)通路同時(shí)調(diào)控BMECs中乳脂肪及乳蛋白的合成,mTOR信號(hào)通路可能是乙酸調(diào)控乳脂肪及乳蛋白合成的共同通路。⑤AG490阻斷JAK2/STAT5信號(hào)通路,抑制了BMECs的增殖,且濃度越高,細(xì)胞增殖受阻越嚴(yán)重,40 umol/L濃度為AG490的適宜濃度。⑥AG490阻斷JAK2/STAT5信號(hào)通路,BMECs中FASN、ACACA、SCD1、LPL、 SREBP1基因表達(dá)顯著下降；PPARG轉(zhuǎn)錄水平及蛋白翻譯均沒有受到抑制；TAG合成沒有顯著變化。采用AG490阻斷JAK2/STAT5信號(hào)通路,CSN1S1、1β-酪蛋白、JAK2、STAT5基因表達(dá)均明顯下降；p-酪蛋白的蛋白表達(dá)顯著下降。提示JAK2/STAT5信號(hào)通路通過SREBP1調(diào)控乳脂肪合成相關(guān)基因的表達(dá)。⑦乙酸可能通過JAK2/STAT信號(hào)通路同時(shí)調(diào)控BMECs中乳脂肪及乳蛋白的合成,JAK2/STAT5信號(hào)通路可能是乙酸調(diào)控乳脂肪及乳蛋白合成的共同通路。⑧eIf4E沉沒抑制了BMECs的細(xì)胞增殖。eIf4E沉沒后,BMECs中FASN、ACACA、SCD1和SREBP1基因表達(dá)顯著下降；PPARG轉(zhuǎn)錄水平及蛋白翻譯均沒有受到抑制,TAG合成沒有顯著變化。eIf4E沉沒后,asl-酪蛋白、p-酪蛋白、kappa-酪蛋白、eIf4E及4EBP1基因表達(dá)均明顯下降；p-酪蛋白蛋白表達(dá)也顯著下降。⑨eIf4E可同時(shí)調(diào)控BMECs中乳脂肪及乳蛋白的合成,它作為mTOR信號(hào)通路中的關(guān)鍵下游因子被認(rèn)為是乳脂肪及乳蛋白合成調(diào)控通路中的一個(gè)交匯點(diǎn)。乙酸通過mTOR信號(hào)通路同時(shí)影響乳脂肪及乳蛋白合成的過程與eIf4E密切相關(guān)。綜上所述,乙酸對(duì)BMECs中乳脂肪及乳蛋白的合成均有顯著的影響。mTOR信號(hào)通路和JAK2/STATS信號(hào)通路是乙酸調(diào)控BMECs中乳脂肪與乳蛋白合成的共同通路,eIf4E可能是乙酸通過mTOR信號(hào)通路調(diào)控BMECs中乳脂肪及乳蛋白合成的交匯點(diǎn)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S823
【目錄】：

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5 李照;邢黎明;云戰(zhàn)友;;原料乳中摻入非乳脂肪的檢出方法[J];農(nóng)產(chǎn)品加工(學(xué)刊);2008年02期

6 妥彥峰;甘伯中;杭鋒;宋馨;;甘肅天祝牧區(qū)白牦牛乳脂肪中脂肪酸的分析[J];乳業(yè)科學(xué)與技術(shù);2013年04期

7 都軍霞;韓立強(qiáng);喬新安;楊國宇;;乳脂肪球膜主要膜蛋白功能的研究進(jìn)展[J];中國畜牧獸醫(yī);2007年10期

8 陸東林;王文秀;徐敏;馬衛(wèi)平;;不同動(dòng)物乳脂肪酸組成的比較分析[J];新疆畜牧業(yè);2014年04期

9 高天云;王麗芳;姚一萍;郝星;薩娜;;利用乳成分分析儀與近紅外光譜儀比較分析牛奶中的乳脂肪和乳蛋白[J];畜牧與飼料科學(xué);2014年02期

10 韓瑞麗;馬健;張佳程;生慶海;;牛乳脂肪甘油三酯中sn-2位脂肪酸組成的分析[J];乳業(yè)科學(xué)與技術(shù);2009年02期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 桂仕林;劉紅霞;付治軍;賈少婷;劉衛(wèi)星;;均質(zhì)形式對(duì)純牛乳脂肪上浮的影響[A];中國奶業(yè)協(xié)會(huì)年會(huì)論文集2009（下冊(cè)）[C];2009年

2 劉紅霞;賈少婷;桂仕林;付治軍;劉衛(wèi)星;;UHT乳脂肪上浮影響因素及其判定方法開發(fā)與探討[A];中國奶業(yè)協(xié)會(huì)年會(huì)論文集2009（下冊(cè)）[C];2009年

3 徐元君;卜登攀;張養(yǎng)東;趙勐;周小喬;張鵬;李發(fā)弟;;日糧對(duì)乳脂肪酸代謝影響研究進(jìn)展[A];第四屆中國奶業(yè)大會(huì)論文集[C];2013年

4 毛雪瑛;歐陽宏;張鴻;;中子活化研究牛奶和酸奶中的微量元素含量[A];第十一屆全國活化分析學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2006年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 保健時(shí)報(bào)特約專家 范志紅;[N];保健時(shí)報(bào);2006年

2 ;[N];中國信息報(bào);2005年

3 ;[N];中國質(zhì)量報(bào);2003年

4 楊松 王力舟;[N];中國國門時(shí)報(bào)(中國出入境檢驗(yàn)疫報(bào));2002年

5 ;[N];重慶商報(bào);2000年

6 福如海;[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2005年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 生冉;乙酸參與奶牛乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)乳脂肪與乳蛋白合成的調(diào)控機(jī)理研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 趙亞東;母乳脂肪類似物的制備及其功能性研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 馮永方;棕櫚油制備母乳脂肪替代油脂的研究[D];齊魯工業(yè)大學(xué);2013年

3 呂志勇;UHT乳脂肪上浮控制技術(shù)研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2009年

4 王貞瑜;牛乳脂肪中甘油三酯Sn-2位棕櫚酸檢測(cè)方法的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

5 張振;GC-MS研究不同泌乳期中國人乳脂肪酸組成[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：乙酸參與奶牛乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)乳脂肪與乳蛋白合成的調(diào)控機(jī)理研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：167522