本文選題：偽狂犬病毒　切入點(diǎn)：白細(xì)胞介素10　出處：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：偽狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)感染豬引起偽狂犬病,導(dǎo)致新生仔豬出現(xiàn)致死性腦炎,育肥豬呼吸障礙,母豬繁殖障礙等癥狀,給養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展造成極為不利的影響,PRV具有潛伏感染的特性,嚴(yán)重影響豬場(chǎng)凈化豬偽狂犬病的進(jìn)程。IL-10是一種重要的多效免疫調(diào)節(jié)因子,病毒潛伏感染誘導(dǎo)的細(xì)胞IL-10可阻止病毒潛伏感染的細(xì)胞發(fā)生死亡,有助于儲(chǔ)存潛伏感染病毒的基因組。應(yīng)激顆粒(Stress granules,SGs)作為哺乳動(dòng)物翻譯系統(tǒng)關(guān)閉的結(jié)果,有利于細(xì)胞應(yīng)對(duì)外界環(huán)境壓力(比如熱休克,氧化性應(yīng)激,局部缺血或者病毒感染)。不同病毒對(duì)SGs的影響不同,有些病毒為了借助SGs募集的蛋白完成自身的復(fù)制,會(huì)誘導(dǎo)病毒感染細(xì)胞內(nèi)形成SGs,而有些病毒為了抵抗宿主翻譯休止對(duì)自身蛋白質(zhì)和基因組的復(fù)制的不利影響,則會(huì)破壞感染細(xì)胞內(nèi)SGs的累積。本文通過(guò)體外研究,探討PRV感染對(duì)IL-10及應(yīng)激顆粒的影響,內(nèi)容及結(jié)果如下:1.PRV感染顯著誘導(dǎo)IL-10的啟動(dòng)子,m RNA及分泌水平通過(guò)雙熒光素酶系統(tǒng)及RT-PCR方法,動(dòng)態(tài)分析PRV感染PK-15細(xì)胞對(duì)IL-10啟動(dòng)子及m RNA的影響,同時(shí),在PAM細(xì)胞上,利用ELISA試劑盒檢測(cè)PRV對(duì)IL-10分泌的影響。我們發(fā)現(xiàn)PRV感染PK-15細(xì)胞6 h以上,可極顯著(P0.01)激活I(lǐng)L-10的啟動(dòng)子活性,且與感染時(shí)間有關(guān),隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng),激活倍數(shù)相應(yīng)的增加,但是PRV誘導(dǎo)IL-10啟動(dòng)子與感染劑量無(wú)關(guān);而PRV感染PK-15細(xì)胞12 h可誘導(dǎo)IL-10 m RNA水平,且與感染劑量有關(guān);PRV感染PAM細(xì)胞12h誘導(dǎo)其蛋白水平,18 h達(dá)到峰值,隨后逐漸降低。紫外線滅活的PRV不影響PRV誘導(dǎo)IL-10的啟動(dòng)子,m RNA及蛋白水平,表明PRV誘導(dǎo)IL-10與病毒復(fù)制密切相關(guān)。2.IL-10啟動(dòng)子低甲基化修飾參與PRV誘導(dǎo)IL-10過(guò)程通過(guò)BSP測(cè)序及超表達(dá)po DNMTs,分析IL-10啟動(dòng)子甲基化水平與PRV誘導(dǎo)IL-10的關(guān)系。我們發(fā)現(xiàn),PRV感染PK-15細(xì)胞,可顯著減低IL-10啟動(dòng)子的甲基化水平,且超表達(dá)po DNMT3a或者po DNMT3b抑制PRV誘導(dǎo)IL-10的啟動(dòng)子水平,表明IL-10啟動(dòng)子的低甲基化參與PRV誘導(dǎo)IL-10的過(guò)程。3.PRV感染不誘導(dǎo)SGs累積通過(guò)IFA技術(shù),動(dòng)態(tài)分析PRV感染He La細(xì)胞誘導(dǎo)SGs的情況,結(jié)果顯示PRV感染不同時(shí)間均不誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)SGs,且與感染劑量無(wú)關(guān)。為了排除細(xì)胞特異性的原因,在PK-15細(xì)胞上進(jìn)行同樣的實(shí)驗(yàn),我們得到相同的結(jié)果,即PRV感染不能誘導(dǎo)SGs的累積。4.PRV感染破壞陽(yáng)性刺激物誘導(dǎo)SGs的累積采用IFA技術(shù),動(dòng)態(tài)分析PRV感染對(duì)陽(yáng)性刺激物Arsenite(依賴e IF2α磷酸化誘導(dǎo)SGs)及Hippuristanol(不依賴e IF2α磷酸化誘導(dǎo)SGs)誘導(dǎo)SGs的影響,結(jié)果顯示PRV感染阻礙這2種刺激物誘導(dǎo)SGs的累積,表明PRV阻礙SGs累積不依賴于e IF2α磷酸化。利用western-blot技術(shù),我們發(fā)現(xiàn)PRV感染的He La細(xì)胞內(nèi),TIA-1蛋白水平有所下降,再用Arsenite處理,則TIA-1蛋白水平下降幅度更大,表明PRV感染可能引起TIA-1降解。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.65

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