發(fā)布時間：2018-03-22 18:08

  本文選題：綿羊　切入點：胎兒　出處：《中國農(nóng)業(yè)大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：LncRNA是一類長度大于200個nt且不表現(xiàn)出蛋白質(zhì)編碼潛能的RNAs。參與了X染色體沉默,基因組印記以及染色質(zhì)修飾,轉(zhuǎn)錄激活,轉(zhuǎn)錄干擾,核內(nèi)運輸?shù)榷喾N重要的調(diào)控過程,涉及到表觀遺傳調(diào)控、轉(zhuǎn)錄調(diào)控及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等多個層面。最新報道LncRNA分子可以調(diào)節(jié)人和小鼠的肌肉功能,但LncRNA對肉用家畜肌肉分化發(fā)育調(diào)控的研究尚無報道。本研究通過高通量測序的手段篩選到一個的可以促進綿羊肌肉細胞分化,促進成肌生成的LncRNA分子(命名為Lnc-SEMT),試驗分析發(fā)現(xiàn)它對骨髂肌發(fā)育具有重要調(diào)控作用.該分子的研究為闡明動物肌細胞的增殖、分化的分子機制具有重要意義,并可為肉羊分子輔助育種和開發(fā)新型的促生長制劑提供科學依據(jù)和技術(shù)支持。主要研究結(jié)果如下：1.通過對胚胎期90口和120日齡綿羊背最長肌樣品進行高通量測序,共計得到1114個lncRNA,其中466個lncRNA差異表達,而466個差異表達的lncRNA中,其中157個lncRNA上調(diào),309個lncRNA下調(diào)。2.通過對測序得到的1114個lncRNA進行芯片驗證,發(fā)現(xiàn)有867個預測的lncRNA存在,其中有119個lncRNA的表達上調(diào),對這119個lncRNA進行定量篩選后,得到了一個在骨骼肌組織中特異性高表達的上調(diào)LncRNA(命名為Lnc-SEMT)。3.通過檢測綿羊不同生長時期的Lnc-SEMT表達水平發(fā)現(xiàn),在胚胎期120日齡時,其表達量最高,出生后逐漸降低,成年后表達水平變化不大。4.通過檢測綿羊成肌細胞生長分化過程中的lncRNA表達量變化,在成肌細胞分化0-5天內(nèi),隨著成肌細胞的生長分化,MYOG和MYOD基因表達水平也隨著升高。5.構(gòu)建了Lnc-SEMT的高表達和干擾載體,分別轉(zhuǎn)染到綿羊成肌細胞,通過DAPI和MyHC試驗分析,結(jié)果表明隨著成肌細胞分化過程中Lnc-SEMT的過表達和干擾,MYOG, MYOD等基因隨著Lnc-SEMT的變化而變化。6.通過顯微注射的手段,得到了5只轉(zhuǎn)Lnc-SEMT綿羊。轉(zhuǎn)基因突變綿羊的Lnc-SEMT表達水平是野生型綿羊的3.3倍。7.通過對轉(zhuǎn)Lnc-SEM T綿羊出生后的體重進行測量,發(fā)現(xiàn)突變羊在3月齡,6月齡和9月齡的體重都顯著高于對照野生組。另外屠宰試驗中突變羊的胴體重也顯著高于對照野生組。8.通過對轉(zhuǎn)Lnc-SEMT綿羊進行HE染色和免疫熒光染色,發(fā)現(xiàn)突變羊的肌纖維的橫截面積顯著高于對照組,另外,突變羊的30-45μm直徑的肌纖維顯著高于對照組,其他直徑的肌纖維差異不明顯。9.通過應用軟件,預測到了Lnc-SEMT 與 miR-125 b的潛在結(jié)合位點。10.對Lnc-SEMT 于 miR-125b的結(jié)合位點進行突變,并進行體外轉(zhuǎn)染試驗,發(fā)現(xiàn)miR-125b確實存在與L nc-SEMT潛在的結(jié)合位點,同時Lnc-SEMT與miR-125b競爭性的結(jié)合IGF-2,以實現(xiàn)促進成肌細胞分化和成肌生成的作用。11.通過對轉(zhuǎn)Lnc-SEMT綿羊的血清進行檢測,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)Lnc-SEMT綿羊血液中的IGF-2表達量顯著高于對照野生組。
[Abstract]:LncRNA is a kind of length greater than 200 nt and does not show the protein encoding potential RNAs. in chromosome X silencing, genomic imprinting and chromatin modification, transcriptional activation, transcription regulation of nuclear interference, transportation and other important, involved in epigenetic regulation, transcriptional regulation and post transcriptional regulation of multiple the latest reported level. LncRNA molecules can regulate human and mouse muscle function, but there is no report on LncRNA development regulation of meat animal muscle differentiation. This study screened a can promote sheep muscle cell differentiation by means of high-throughput sequencing, promote LncRNA molecules into muscle formation (named Lnc-SEMT), test the analysis found that it has an important role on the development of skeletal muscle. The molecular research to elucidate animal muscle cell proliferation plays an important role in the molecular mechanism of differentiation, and for molecular assisted sheep 鑲茬鍜屽紑鍙戞柊鍨嬬殑淇冪敓闀垮埗鍓傛彁渚涚瀛︿緷鎹拰鎶，

本文編號：1649787