本文關(guān)鍵詞： ZNF33B SNP 卵丘細(xì)胞 卵母細(xì)胞成熟 基因表達(dá)調(diào)控　出處：《吉林大學(xué)》2016年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：鋅指蛋白廣泛存在于真核及原核生物中,作為轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,通過(guò)選擇性的與特異靶結(jié)構(gòu)結(jié)合,在基因表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞分化、配子功能、胚胎發(fā)育等生命活動(dòng)中發(fā)揮著重要的作用。牛鋅指蛋白33B(ZNF33B)基因全長(zhǎng)35440bp,c DNA全長(zhǎng)1358bp,編碼一個(gè)由137氨基酸組成的蛋白。因其含有krüppel相關(guān)性保守盒的C2H2型鋅指蛋白,也稱(chēng)KRAB型鋅指蛋白。ZNF33B基因廣泛存在于各個(gè)器官組織中,目前對(duì)ZNF33B基因功能的研究較少,尤其在卵巢中,僅有少量文獻(xiàn)表明ZNF33B基因的表達(dá)量在實(shí)施超數(shù)排卵的卵巢內(nèi)卵丘細(xì)胞中有顯著改變,但其具體表達(dá)規(guī)律、對(duì)卵巢組織與卵母細(xì)胞成熟的作用及功能尚不明確。本研究首先發(fā)現(xiàn)牛ZNF33B基因5'UTR存在g.-61GT突變,等位基因G、T的基因頻率分別為0.3489和0.6511,三種基因型AA、AB、BB頻率分別為0.1007、0.4964和0.4029。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn),BB型個(gè)體在超排后總卵數(shù)、可用胚胎數(shù)、退化胚胎數(shù)及未受精卵數(shù)都顯著或極顯著高于AA型個(gè)體(P0.05或P0.01),AB型個(gè)體超排性狀位于前兩者之間。同時(shí),在ZNF33B第一內(nèi)含子也存在一段124bp的插入序列,在所測(cè)群體中的插入率為12.95%,但存在該段插入序列的牛個(gè)體在所分析的超排性狀上與未插入組比較并無(wú)顯著差異(P0.05)�；谏鲜鲅芯拷Y(jié)果,為明確ZNF33B基因在卵巢組織中的表達(dá)規(guī)律,本研究首先通過(guò)QRT-PCR、Western Blot、免疫組化及免疫熒光等方法,對(duì)ZNF33B在牛卵巢中的表達(dá)情況進(jìn)行了進(jìn)一步研究。結(jié)果顯示,ZNF33B在卵泡期卵巢皮質(zhì)及髓質(zhì)中的表達(dá)量高于黃體期卵巢皮質(zhì);而在不同發(fā)育時(shí)期黃體中,ZNF33B的表達(dá)由血體期-分泌黃體期-白體期呈逐漸下降趨勢(shì);ZNF33B主要分布于各級(jí)卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞的胞質(zhì)及顆粒黃體細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi),在卵巢基質(zhì)、卵丘細(xì)胞胞質(zhì)、膜黃體細(xì)胞胞質(zhì)均有分布,但表達(dá)量低于卵母細(xì)胞及顆粒黃體細(xì)胞胞質(zhì)。而卵母細(xì)胞在通過(guò)體外培養(yǎng)成熟后分別進(jìn)行孤雌激活和體外受精形成的早期胚胎中,ZNF33B主要分布于早期胚胎各卵裂球的細(xì)胞核中�；赯NF33B基因在卵巢組織內(nèi)具有差異表達(dá)且對(duì)卵母細(xì)胞成熟具有潛在作用的可能,本研究進(jìn)一步對(duì)其在卵丘細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育及卵母細(xì)胞成熟中的作用進(jìn)行了深入研究。本研究首先通過(guò)QRT-PCR發(fā)現(xiàn)卵母細(xì)胞成熟后卵丘及卵母細(xì)胞的ZNF33B的表達(dá)極顯著升高(P0.01),然后通過(guò)RNAi技術(shù)敲減ZNF33B基因在原代培養(yǎng)的卵丘細(xì)胞中的表達(dá),卵丘細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)分析顯示低表達(dá)ZNF33B基因的卵丘細(xì)胞早期凋亡率顯著高于對(duì)照組(P0.05),晚期凋亡率和細(xì)胞凋亡總率極顯著高于對(duì)照組(P0.01),表明低表達(dá)的ZNF33B促進(jìn)卵丘細(xì)胞的凋亡。隨后,為進(jìn)一步探討ZNF33B在卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中的作用和具體機(jī)制,本研究采用顯微注射方法先將si RNA注入GV期卵母細(xì)胞胞質(zhì)中,進(jìn)行體外培養(yǎng)和成熟,通過(guò)觀察第一極體排出情況及相關(guān)功能基因的表達(dá)明確ZNF33B對(duì)卵母細(xì)胞成熟的影響。結(jié)果顯示注射組卵母細(xì)胞成熟率極顯著低于對(duì)照組(P0.01);而對(duì)卵母細(xì)胞成熟具有重要作用的Cdc25C、PDE3A、CCNB1和RBBP4表達(dá)水平顯著或極顯著降低(P0.05或P0.01),而EGFR和RBL2表達(dá)無(wú)顯著變化(P0.05)。綜上所述,ZNF33B基因多態(tài)性對(duì)牛超數(shù)排卵性狀具有重要影響,可作為牛超數(shù)排卵性狀分子標(biāo)記并應(yīng)用于早期選種、選育。ZNF33B在卵巢組織中的表達(dá)具有時(shí)空特異性,可影響卵丘細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育并可調(diào)控特定細(xì)胞因子的表達(dá)影響卵母細(xì)胞成熟,本研究從基因水平及蛋白水平明確了ZNF33B基因影響卵母細(xì)胞成熟的作用,不僅為深入解析鋅指蛋白分子調(diào)控通路及其作用以及卵母細(xì)胞成熟的機(jī)制提供了理論基礎(chǔ),還為提高雌性動(dòng)物繁殖力及早期選種選育提供了新依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S828

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 芮榮;卵母細(xì)胞成熟的調(diào)控機(jī)理[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;1998年03期

2 馮伯森,李美娜;成熟促進(jìn)因子及其對(duì)卵母細(xì)胞成熟調(diào)控機(jī)制研究的新進(jìn)展[J];動(dòng)物學(xué)雜志;2003年01期

3 彭禮繁;;促性腺激素在哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞成熟中的作用機(jī)制[J];當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè);2010年01期

4 白玉妍;劉瑩;劉志平;;犬卵泡發(fā)育、卵母細(xì)胞成熟、排卵研究進(jìn)展[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2013年05期

5 劉素娟;卵泡發(fā)育和卵母細(xì)胞成熟[J];國(guó)外獸醫(yī)學(xué).畜禽疾病;1995年03期

6 錢(qián)云,丁家桐,劉紅林;卵母細(xì)胞成熟的形態(tài)學(xué)特征及其調(diào)控[J];國(guó)外畜牧科技;1999年06期

7 夏豐;蘇雷;;卵母細(xì)胞成熟及其成熟調(diào)控因子[J];中國(guó)牛業(yè)科學(xué);2008年01期

8 王曉麗;辛立江;成俊萍;潘紅平;石德順;;卵母細(xì)胞成熟中鈣離子的研究概況[J];四川畜牧獸醫(yī);2008年03期

9 孫青原,秦鵬春;哺乳動(dòng)物的卵母細(xì)胞成熟機(jī)理[J];黑龍江動(dòng)物繁殖;1995年01期

10 張周,昝林森,田萬(wàn)強(qiáng);哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞成熟及調(diào)節(jié)機(jī)制[J];中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào);2005年10期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 劉帥;崔奎青;沈開(kāi)元;劉慶友;石德順;;不同能量底物對(duì)豬卵母細(xì)胞成熟效果的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物繁殖學(xué)分會(huì)第十六屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

2 洪海燕;張美佳;張華;樊鶴;許寶山;歐陽(yáng)宏;周波;夏國(guó)良;;心鈉肽在小鼠卵巢中的表達(dá)定位及其對(duì)卵母細(xì)胞成熟的影響[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第九次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2006年

3 韓瑩瑩;嚴(yán)俊;張美佳;夏國(guó)良;;急性饑餓抑制卵母細(xì)胞成熟與卵丘擴(kuò)散的體外機(jī)制研究[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2010年

4 丁愛(ài)軍;蘇雷;;生殖激素對(duì)奶水牛卵母細(xì)胞成熟及發(fā)育潛能的影響[A];中國(guó)奶業(yè)協(xié)會(huì)年會(huì)論文集2008（上冊(cè)）[C];2008年

5 劉振方;付強(qiáng);蔣麗;楊麗;黃愉淋;張明;盧克煥;;水牛卵母細(xì)胞成熟前后差異蛋白質(zhì)組的初步研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物繁殖學(xué)分會(huì)第十六屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

6 邱佳菁;吳芝莉;王逸宏;李逸平;;鰻魚(yú)卵母細(xì)胞成熟機(jī)制初探[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第七次會(huì)議論文摘要匯編[C];1999年

7 王曉麗;楊娟;黎江;孟凡麗;潘紅平;陸鳳花;石德順;;不同成熟時(shí)間水牛卵母細(xì)胞成熟與凋亡的比較研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

8 許寶山;王超;陳秀芬;歐陽(yáng)宏;王松波;寧剛;劉丹;洪海燕;張美佳;宋曉明;傅茂勇;夏國(guó)良;;利用RNA干擾技術(shù)研究卵泡刺激素對(duì)小鼠卵母細(xì)胞成熟的調(diào)控機(jī)理[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第九次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2006年

9 孫兆貴;;泛素羧基末端水解酶在卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中作用機(jī)制的初步研究[A];第十屆全國(guó)生殖生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

10 王曉梅;黃天華;謝慶東;;Dynein特異抑制劑對(duì)體外培養(yǎng)卵母細(xì)胞成熟及cyclinB1 mRNA水平的影響[A];中國(guó)的遺傳學(xué)研究——中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)第七次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編[C];2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 方俊順;蛋白質(zhì)�；D(zhuǎn)移酶 ZDHHC3 在卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中的功能研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 李常紅;ZNF33B在牛卵巢中的表達(dá)規(guī)律及其影響卵母細(xì)胞成熟的機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2016年

3 張美佳;心鈉肽對(duì)豬卵母細(xì)胞成熟、受精和大熊貓精子功能的影響[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

4 鄭月慧;細(xì)胞因子在雌小鼠內(nèi)毒素攻擊中的變化及其對(duì)卵母細(xì)胞成熟影響機(jī)理的研究[D];南昌大學(xué);2006年

5 張志平;建立牛胚胎體外生產(chǎn)體系和快速鑒定胚胎性別的方法[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2006年

6 顏山;卵母細(xì)胞成熟潛能獲得的溫度依賴(lài)性分子機(jī)制的初步研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

7 銀鳳霞;Shugoshin1對(duì)牛卵母細(xì)胞成熟、早期胚胎發(fā)育及體細(xì)胞有絲分裂影響的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 董艷華;CDC14B在牛卵母細(xì)胞成熟和早期胚胎發(fā)育中的表達(dá)研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

2 陳西銳;小鼠Mfn2基因在卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中的作用研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

3 李伊然;雌激素及其受體與卵母細(xì)胞成熟的相關(guān)性[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2013年

4 劉濤;應(yīng)激誘導(dǎo)對(duì)牛卵母細(xì)胞成熟和凋亡的影響及金屬硫蛋白基因的初步研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

5 郝元斌;卵丘細(xì)胞對(duì)豬卵母細(xì)胞成熟及其發(fā)育能力的影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

6 張亨德;α-硫辛酸對(duì)山羊卵母細(xì)胞成熟質(zhì)量與發(fā)育的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

7 隋進(jìn)強(qiáng);牛卵母細(xì)胞成熟前基因注射的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2009年

8 王清;硬殼蛤性腺發(fā)育和卵母細(xì)胞成熟機(jī)理初步研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2007年

9 高海霞;丙戊酸對(duì)牛胎兒成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)、牛卵母細(xì)胞成熟及早期胚胎發(fā)育的影響[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2012年

10 柳朝華;cyclin G1在小鼠卵巢的表達(dá)及其與卵泡發(fā)育和卵母細(xì)胞成熟的關(guān)系[D];四川大學(xué);2006年

，

本文編號(hào)：1524806