本文關鍵詞：紫花苜�？傸S酮的提取、純化及其抗氧化活性研究　出處：《中國農業(yè)科學院》2016年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：本論文共包括三個部分。首先對回流法和超聲波輔助法提取紫花苜�？傸S酮的工藝參數(shù)進行優(yōu)化,確定提取工藝及參數(shù);然后通過大孔樹脂對紫花苜蓿黃酮粗提物進行初步純化,并用聚酰胺樹脂進一步純化,得到純度較高的紫花苜蓿黃酮組分;最后通過體外自由基產(chǎn)生系統(tǒng)對紫花苜�？傸S酮及不同組分進行抗氧化能力的評價。試驗一紫花苜�？傸S酮的提取工藝研究試驗一分為兩個部分,第一部分旨在優(yōu)化篩選回流法和超聲波輔助法提取紫花苜�？傸S酮的工藝參數(shù),確定高效提取紫花苜�？傸S酮的工藝及參數(shù)。首先,利用單因素試驗研究各個提取因素對紫花苜�？傸S酮提取率的影響。根據(jù)單因素試驗結果,通過正交試驗設計和響應面試驗設計分別對兩種工藝進行優(yōu)化,并對不同提取工藝下紫花苜�？傸S酮的提取率進行對比。最終確定超聲波輔助提取工藝為紫花苜�？傸S酮提取工藝,確定以下工藝參數(shù):液料比51.16:1(m L/g),提取溫度為62.33°C,提取時間57.08 min,乙醇濃度52.14%,此條件下,紫花苜�？傸S酮提取率為6.40 mg/g。第二部分分別以清除ABTS自由基和清除DPPH自由基為響應值,旨在通過響應面試驗設計優(yōu)化篩選超聲波輔助提取紫花苜�？寡趸镔|的工藝參數(shù),最終確定以下工藝參數(shù):(1)以清除ABTS自由基為評價指標的最佳工藝參數(shù)為:液料比47.29:1(m L/g),提取溫度62.73°C,提取時間51.62 min,乙醇濃度60%,此條件下,所得提取物對ABTS自由基清除率為87.38%;(2)以清除DPPH自由基為評價指標的最佳工藝參數(shù)為:液料比60.30:1(m L/g),提取溫度54.56°C,提取時間45.59 min,乙醇濃度46.67%,此條件下,所得提取物對DPPH自由基清除率為80.72%。試驗二紫花苜�？傸S酮的分離與純化研究本試驗旨在通過研究不同樹脂對紫花苜�？傸S酮粗提物的純化,得到純度較高的紫花苜蓿黃酮組分。首先對5種不同物理和化學性能的大孔樹脂(AB-8、D101、HPD-100、HDP-600和NKA-9)進行篩選,以對紫花苜�？傸S酮吸附率和解析率為考察指標,確定適宜紫花苜�？傸S酮純化的最佳樹脂;然后通過考察樹脂吸附因素(吸附液p H、吸附溫度、上樣體積及濃度)對紫花苜�？傸S酮吸附量的影響,確定最佳吸附條件,最后通過聚酰胺樹脂的進一步純化得到純度較高的黃酮組分。研究結果表明AB-8大孔樹脂對紫花苜�？傸S酮的吸附量大且易解吸,對紫花苜�？傸S酮具有較好的吸附和解析性能,適宜用于對紫花苜�？傸S酮進行純化。確定的最佳吸附條件為:上樣液質量濃度為0.6 mg/m L,上樣液p H為4,上樣體積為1~4 BV,吸附溫度為25 oC。粗提液在最佳吸附條件下經(jīng)AB-8大孔樹脂富集后,以4 BV的蒸餾水和不同濃度的乙醇溶液進行梯度洗脫,得到苜�？傸S酮的最高純度組分為33.03%。經(jīng)過AB-8大孔樹脂富集后的紫花苜蓿黃酮類組分再經(jīng)聚酰胺樹脂柱進一步分離純化,用不同濃度的乙醇溶液進行梯度洗脫達到了良好的分離效果,紫花苜蓿黃酮組分的純度最高可達到79.62%。試驗三紫花苜蓿黃酮類化合物抗氧化作用研究本試驗旨在研究紫花苜�？傸S酮及不同極性洗脫部分的體外抗氧化能力。采用分光光度法,以Vc為對照,研究了對1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基、2;2’-連氮-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)自由基、羥基自由基的清除率以及對Fe3+還原能力的測定。結果表明,紫花苜蓿黃酮類化合物具有較好的去除DPPH自由基的能力,清除率最高可達到88.01%;紫花苜蓿黃酮類化合物對ABTS自由基的清除率最高可達到75.25%;在清除羥基自由基的試驗中,紫花苜蓿黃酮類化合物對其清除率最高為83.97%,當濃度為0.1 mg/m L時,75%乙醇洗脫組分去除羥基自由基的能力優(yōu)于Vc。通過對Fe3+的還原能力測定,考察了紫花苜蓿黃酮類化合物的總抗氧化能力,抗氧化活性最高的組分為75%乙醇洗脫組分,其總抗氧化能力值相當于55.19±3.37mg Vc/g。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：中國農業(yè)科學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S816

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