本文關(guān)鍵詞：紫花苜�？傸S酮的提取、純化及其抗氧化活性研究　出處：《中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：本論文共包括三個(gè)部分。首先對回流法和超聲波輔助法提取紫花苜蓿總黃酮的工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,確定提取工藝及參數(shù);然后通過大孔樹脂對紫花苜蓿黃酮粗提物進(jìn)行初步純化,并用聚酰胺樹脂進(jìn)一步純化,得到純度較高的紫花苜蓿黃酮組分;最后通過體外自由基產(chǎn)生系統(tǒng)對紫花苜�？傸S酮及不同組分進(jìn)行抗氧化能力的評(píng)價(jià)。試驗(yàn)一紫花苜�？傸S酮的提取工藝研究試驗(yàn)一分為兩個(gè)部分,第一部分旨在優(yōu)化篩選回流法和超聲波輔助法提取紫花苜蓿總黃酮的工藝參數(shù),確定高效提取紫花苜�？傸S酮的工藝及參數(shù)。首先,利用單因素試驗(yàn)研究各個(gè)提取因素對紫花苜�？傸S酮提取率的影響。根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)和響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)分別對兩種工藝進(jìn)行優(yōu)化,并對不同提取工藝下紫花苜�？傸S酮的提取率進(jìn)行對比。最終確定超聲波輔助提取工藝為紫花苜�？傸S酮提取工藝,確定以下工藝參數(shù):液料比51.16:1(m L/g),提取溫度為62.33°C,提取時(shí)間57.08 min,乙醇濃度52.14%,此條件下,紫花苜蓿總黃酮提取率為6.40 mg/g。第二部分分別以清除ABTS自由基和清除DPPH自由基為響應(yīng)值,旨在通過響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化篩選超聲波輔助提取紫花苜蓿抗氧化物質(zhì)的工藝參數(shù),最終確定以下工藝參數(shù):(1)以清除ABTS自由基為評(píng)價(jià)指標(biāo)的最佳工藝參數(shù)為:液料比47.29:1(m L/g),提取溫度62.73°C,提取時(shí)間51.62 min,乙醇濃度60%,此條件下,所得提取物對ABTS自由基清除率為87.38%;(2)以清除DPPH自由基為評(píng)價(jià)指標(biāo)的最佳工藝參數(shù)為:液料比60.30:1(m L/g),提取溫度54.56°C,提取時(shí)間45.59 min,乙醇濃度46.67%,此條件下,所得提取物對DPPH自由基清除率為80.72%。試驗(yàn)二紫花苜蓿總黃酮的分離與純化研究本試驗(yàn)旨在通過研究不同樹脂對紫花苜�？傸S酮粗提物的純化,得到純度較高的紫花苜蓿黃酮組分。首先對5種不同物理和化學(xué)性能的大孔樹脂(AB-8、D101、HPD-100、HDP-600和NKA-9)進(jìn)行篩選,以對紫花苜�？傸S酮吸附率和解析率為考察指標(biāo),確定適宜紫花苜蓿總黃酮純化的最佳樹脂;然后通過考察樹脂吸附因素(吸附液p H、吸附溫度、上樣體積及濃度)對紫花苜�？傸S酮吸附量的影響,確定最佳吸附條件,最后通過聚酰胺樹脂的進(jìn)一步純化得到純度較高的黃酮組分。研究結(jié)果表明AB-8大孔樹脂對紫花苜�？傸S酮的吸附量大且易解吸,對紫花苜�？傸S酮具有較好的吸附和解析性能,適宜用于對紫花苜�？傸S酮進(jìn)行純化。確定的最佳吸附條件為:上樣液質(zhì)量濃度為0.6 mg/m L,上樣液p H為4,上樣體積為1~4 BV,吸附溫度為25 oC。粗提液在最佳吸附條件下經(jīng)AB-8大孔樹脂富集后,以4 BV的蒸餾水和不同濃度的乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫,得到苜蓿總黃酮的最高純度組分為33.03%。經(jīng)過AB-8大孔樹脂富集后的紫花苜蓿黃酮類組分再經(jīng)聚酰胺樹脂柱進(jìn)一步分離純化,用不同濃度的乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫達(dá)到了良好的分離效果,紫花苜蓿黃酮組分的純度最高可達(dá)到79.62%。試驗(yàn)三紫花苜蓿黃酮類化合物抗氧化作用研究本試驗(yàn)旨在研究紫花苜�？傸S酮及不同極性洗脫部分的體外抗氧化能力。采用分光光度法,以Vc為對照,研究了對1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基、2;2’-連氮-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)自由基、羥基自由基的清除率以及對Fe3+還原能力的測定。結(jié)果表明,紫花苜蓿黃酮類化合物具有較好的去除DPPH自由基的能力,清除率最高可達(dá)到88.01%;紫花苜蓿黃酮類化合物對ABTS自由基的清除率最高可達(dá)到75.25%;在清除羥基自由基的試驗(yàn)中,紫花苜蓿黃酮類化合物對其清除率最高為83.97%,當(dāng)濃度為0.1 mg/m L時(shí),75%乙醇洗脫組分去除羥基自由基的能力優(yōu)于Vc。通過對Fe3+的還原能力測定,考察了紫花苜蓿黃酮類化合物的總抗氧化能力,抗氧化活性最高的組分為75%乙醇洗脫組分,其總抗氧化能力值相當(dāng)于55.19±3.37mg Vc/g。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S816

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本文編號(hào)：1407634