本文關鍵詞：蛭弧菌和乳桿菌對大菱鲆和皺紋盤鮑腸道菌群的影響研究　出處：《華南理工大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：隨著人們對健康的不斷追求,最近些年來益生菌在食品領域(特別是其在宿主腸道中的調控研究)的研究越來越受重視。益生菌是一類活體微生物或其產物,通過向宿主補給這類活體微生物或其產物后,它們往往會對宿主腸道菌群進行有益修飾和平衡。在水產領域,眾多研究表明,益生菌可以更好的解決抗生素濫用所遺留的一系列難題,并逐步成為了抗生素的替代品。但是,乳酸菌和蛭弧菌類(Bdellovibrio and Like Organisms,BALOs)在冷水性養(yǎng)殖大菱鲆(Scophthatmus maximus)和皺紋盤鮑(Haliotis discus hannai Ino)養(yǎng)殖體系(特別是在產業(yè)水平)中的調控作用還有待探索。本研究從水產養(yǎng)殖產業(yè)的層面設計試驗,采用不同的益生菌拌食喂養(yǎng)方式,通過高通量測序技術和DGGE技術研究了乳酸菌和BALOs對冷水性養(yǎng)殖大菱鲆和皺紋盤鮑養(yǎng)殖水體和腸道菌群結構的作用等。論文主要研究內容和結果如下:1、實驗采用變性梯度凝膠電泳技術(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)研究了BALOs菌株BDW03潑灑水體喂食幼苗種苗大菱鲆60 d后,BALOs菌株BDW03對大菱鲆養(yǎng)殖水體菌群結構的影響。并研究了BDW03對幼苗大菱鲆養(yǎng)殖水質、養(yǎng)殖水體和腸道中可培養(yǎng)總菌(TCBC)以及可培養(yǎng)總弧菌(TCVC)、存活率等的影響。結果表明:BDW03對試驗組中主要水質參數(shù)無顯著性影響(P0.05);和對照組相比,BDW03顯著降低(P0.05)了試驗組大菱鲆水體和腸道中TCBC和TCVC濃度;實驗60 d后,BDW03顯著提高(P0.05)了大菱鲆存活率、體長獲得率、體重獲得率等;養(yǎng)殖水體DGGE結果表明,BDW03簡化了大菱鲆養(yǎng)殖水體菌群,消失的DGGE條帶中,經測序證實有兩個條帶為弧菌屬,其他均為不可培養(yǎng)細菌。2、研究采用高通量測序技術探討了BALOs菌株BDW03潑灑水體喂食種苗大菱鲆60 d后,BALOs菌株BDW03對大菱鲆腸道菌群結構的影響。并研究了BALOs菌株BDW03對幼苗大菱鲆養(yǎng)殖水質、養(yǎng)殖水體和腸道中TCBC以及TCVC、存活率、生長表現(xiàn)等的影響。研究結果表明,BDW03對大菱鲆養(yǎng)殖水質影響不顯著(P0.05);BDW03對大菱鲆養(yǎng)殖水體和腸道中的TCBC和TCVC的影響差異顯著(P0.05);再者,高通量測序結果進一步表明:BDW03降低了試驗組大菱鲆腸道菌群中的Shannon指數(shù)、ACE指數(shù)和Chao1指數(shù);BDW03對試驗組大菱鲆腸道沒有控制作用的菌屬為8個(占53.3%),這8個菌屬中多為革蘭氏陽性菌屬(6/8);而BAlOs菌株BDW03對試驗組大菱鲆腸道菌屬有控制作用的菌屬為7個,占總菌屬的46.6%,這7個菌屬中26.7%為革蘭氏陰性菌,20.0%為革蘭氏陽性菌;60d時,除對試驗組中大菱鲆體長獲得率影響不顯著(p0.05)外,bdw03對試驗組中大菱鲆的存活率、最后體長、最后體重、體重獲得率和每天體重獲得(adwg)影響均顯著(p0.05)。3、為觀察balos菌株是否對其它冷水養(yǎng)殖種類也有類似的作用,實驗采用dgge技術驗證性研究了balos以潑灑水體喂食種苗皺紋盤鮑90d后,balos在其它冷水養(yǎng)殖中對皺紋盤鮑內臟菌群結構的影響。并研究了balos對皺紋盤鮑養(yǎng)殖水體主要水質、水體和內臟中tcbc以及tcvc、存活率等的影響。結果表明,balos對試驗組水質無顯著影響(p0.05),但是顯著降低(p0.05)了試驗組皺紋盤鮑養(yǎng)殖水體和內臟中tcbc和tcvc;90d時,和對照組相比,balos對試驗組皺紋盤鮑的存活率、皺紋盤鮑體長獲得率、體重獲得率和adwg影響顯著(p0.05)。皮爾森相關性(pearsoncorrelation)分析表明,試驗組中皺紋盤鮑最后體重和最后體長均與皺紋盤鮑水體和內臟中tcvc和tcbc呈負相關,且相關性顯著(p0.05)。皺紋盤鮑內臟dgge分析進一步表明:試驗組中,消失或無法檢測到的dgge條帶占總條帶的22.22%(6/27)。進一步dgge測序結果表明,消失或無法檢測的dgge條帶中,有兩個條帶為弧菌(v.halioticoliandv.tapeti),其它分別為:serratiasp.、alteromonassp.、sphingomonassp.和psychrobacterfozii。4、實驗從廣州市售隨機泡菜樣品中分離出多株乳酸菌菌株。對其溶血性、產生物胺(組胺,酪胺和苯乙胺)特性、抗菌活性(39株不同來源致病菌)、耐酸性、耐膽汁鹽特性、β-半乳糖苷酶活性、抗生素耐藥性等進行了研究。結果表明:14株乳酸菌在血平板(羊血)上均不溶血(γ-溶血);且均不產組胺,酪胺和苯乙胺;對39株不同來源致病菌有著不同的抗菌活性,其中,p1、p2和p11抑菌譜較廣,抗菌活性較強,分別對34株、33株和33株具有抗菌活性。再者,對致病菌達到最強抑菌效果株數(shù)最多的乳酸菌為p2,它對13株致病菌達到了最強抑菌效果(為“+++”,抗菌直徑15mm)。經過以上篩選后,實驗對p1、p2和p11特性進行了深入分析。耐酸和耐膽鹽實驗表明:p2在ph2.5條件下能正常生長,其它兩株卻不能耐受這些酸度酸度;p2和p11在0.5%、1.0%和1.5%膽汁鹽濃度下表現(xiàn)出較強的耐受性。就β-半乳糖苷酶活性而言,實驗結果表明,p2的β-半乳糖苷酶活性最強,p11次之,p1最弱;抗生素耐藥性表現(xiàn)上,p2對測試的6種常見抗生素(氯霉素、紅霉素、環(huán)丙沙星、頭孢噻吩、四環(huán)素和慶大霉素)均沒有耐藥性,為100%敏感,然后依次是p11和p1,分別為67%和50%敏感。p216srdna分子測序結果通過rdpclassifier和ncbiblast分析表明,p2為唾液乳桿菌。5、研究采用高通量測序技術探討了乳酸菌菌株P2以拌食餌料喂食種苗大菱鲆60 d后,乳酸菌菌株P2對種苗大菱鲆腸道菌群結構的影響。并研究了其對大菱鲆養(yǎng)殖水質、腸道和水體中TCBC與TCVC、存活率、生長表現(xiàn)等的影響。研究結果表明,P2對其養(yǎng)殖水質無顯著性影響(P0.05);和對照組相比,P2對試驗組大菱鲆養(yǎng)殖水體中TCBC和TCVC影響不顯著(P0.05),但P2對試驗組大菱鲆腸道中TCBC和TCVC影響顯著(P0.05);除對試驗組大菱鲆體長獲得率影響不顯著(P0.05)外,P2對試驗組大菱鲆存活率、最后體長、最后體重、體重獲得率和ADWG影響均顯著(P0.05);大菱鲆腸道高通量測序結果表明:P2降低了試驗組大菱鲆腸道菌群的Shannon指數(shù)、ACE指數(shù)和Chao1指數(shù);同時,P2對大菱鲆腸道中60.0%(9/15)菌屬具有較好的控制作用,在這些具有較好控制作用的菌屬中,33.3%的菌屬為革蘭氏陰性菌,26.7%的菌屬為革蘭氏陽性菌。6、BALOs和乳酸菌的研究比較發(fā)現(xiàn):通過乳酸菌拌食餌料和潑灑BALOs喂食大菱鲆60 d后,乳酸菌和BALOs對大菱鲆腸道菌群中革蘭氏陰性菌的控制作用(分別占總菌屬的33.3%和26.7%)優(yōu)于對革蘭氏陽性菌的控制作用(分別占總菌屬的(26.7%和20.0%)。乳酸菌和BALOs均顯著提高了大菱鲆存活率、最后體重、最后體長、體重獲得率和ADWG(P0.05),BALOs的這些結果也在冷水性養(yǎng)殖的皺紋盤鮑中得到驗證。不同的是:乳酸菌菌株P2在大菱鲆腸道中的定殖能力優(yōu)于BALOs菌株,并且乳酸菌增加了大菱鲆腸道中未分類菌門的菌群豐度。
[Abstract]:The results were as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results of this study are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results are as follows : 1 . The results show that BDW03 has no significant effect on the water quality and the survival rate . The results showed that BDW03 had a significant difference in the survival rate , body length , body weight , weight gain and adwg . The results showed that 14 strains of lactic acid bacteria were non - hemolytic ( 緯 - Hemolysis ) on blood plate ( sheep blood ) . The results showed that 14 strains of lactic acid bacteria were not hemolyzed ( 緯 - Hemolysis ) on blood plate ( sheep blood ) . The results showed that 14 strains of lactic acid bacteria had different antibacterial activity on blood plate ( sheep blood ) . The results showed that P2 reduced the Shannon index , ACE index and pH value of TC BC and TCVC in the intestinal tract of turbot ( P0.05 ) . The results showed that lactic acid bacteria and BALOs were superior to the control of Gram - negative bacteria in the intestinal flora of turbot ( 26.7 % and 20.0 % , respectively ) . The results of the lactic acid bacteria and BALOs increased the survival rate , the last weight , the last body length , the weight gain and the ADWG ( P0.05 ) .

【學位授予單位】：華南理工大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S965.399;S968.31
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本文編號：1400709