本文關(guān)鍵詞：大車前苷抑制MMP-9活性影響乳腺腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的研究　出處：《中國農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景:轉(zhuǎn)移是腫瘤引起死亡的主要原因,而基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)在腫瘤微環(huán)境和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮關(guān)鍵性作用,現(xiàn)有研究表明MMP-9蛋白的高表達(dá)會促進(jìn)人類乳腺癌的轉(zhuǎn)移。另有報道稱在犬乳腺腫瘤(CMT)中MMP-9對腫瘤的發(fā)生發(fā)展也有促進(jìn)作用。理論上講膠原酶抑制劑可以抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移。本研究目的為從多種小分子藥物中篩選出抑制MMP-9的抑制劑,考察該分子在體外對腫瘤細(xì)胞的抑制作用,在體內(nèi)對腫瘤的形成以及轉(zhuǎn)移的抑制作用,并且分析藥物發(fā)揮作用的機(jī)制。為之后臨床用藥提供依據(jù),并部分揭示腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)理。方法:MMP-9蛋白在CMT中的表達(dá)量由免疫組化(IHC)方法測定,同時對腫瘤組織使用HE染色進(jìn)行病理學(xué)判讀。使用體外酶活抑制試驗以及計算機(jī)分子對接技術(shù)從37種小分子中草藥提取物中進(jìn)行MMP-9抑制劑的篩選。培養(yǎng)MDA-MB-231人類乳腺癌細(xì)胞系和4T1小鼠乳腺癌細(xì)胞系,通過細(xì)胞增殖抑制試驗、克隆形成試驗、劃痕試驗、明膠酶譜分析以及蛋白免疫印跡檢測PMS處理細(xì)胞后兩個細(xì)胞系的增殖、遷移和轉(zhuǎn)移能力,此為細(xì)胞層面試驗。使用4T1細(xì)胞系對BALB/c小鼠進(jìn)行荷瘤試驗,考察大車前苷(PMS)在體內(nèi)的抗腫瘤作用,通過IHC方法檢測相關(guān)因子探究PMS發(fā)揮作用機(jī)制。結(jié)果:1.本研究對犬乳腺腫瘤組織樣本中MMP-9的表達(dá)程度是通過免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行檢測的,結(jié)果發(fā)現(xiàn)惡性CMT的MMP-9高表達(dá)(70.6%),顯著高于其在正常組織和良性CMT中的表達(dá)。同時與惡性CMT的核分級、浸潤性生長和淋巴結(jié)侵襲正相關(guān),即與腫瘤的惡性程度和轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),從而提出MMP-9是促進(jìn)CMT向惡性發(fā)展的重要因素之一。2.成功篩選出的大車前苷,極顯著降低了 MMP-9蛋白的酶活性(P0.01)并且能與MMP-9分子對接結(jié)合(結(jié)合自由能為-10.39 kcal/mol)。濃度為250 μg/m的PMS顯著降低了 MDA-MB-231和4T1細(xì)胞系的增殖,濃度為100 μg/mL的PMS顯著抑制兩細(xì)胞系的克隆形成。250 μg/mL PMS作用36h,傷口愈合抑制率分別為MDA-MB-231 79.3(±8.2)%,4T1:56.4(±4.2)%與對照組差異極顯著(P0.01)。PMS抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲是劑量依賴性的,濃度越高,抑制作用越強(qiáng)。在PMS處理細(xì)胞后,在加入外源MMP-9,細(xì)胞可以恢復(fù)原有的侵襲能力。明膠酶譜分析試驗結(jié)果顯示,兩個細(xì)胞系的MMP-9活性顯著降低。而從免疫蛋白印記試驗結(jié)果可以看出,PMS并不會影響MMP-9蛋白的表達(dá)量。3.PMS抑制4T1荷瘤小鼠腫瘤的生長,PMS顯著降低了腫瘤的質(zhì)量和體積(P0.05),并且抑制腫瘤向肺部轉(zhuǎn)移,對照組(92.8±11.9)的轉(zhuǎn)移灶顯著多于PMS組(29.5 ±8.4),差異為極顯著(P0.01);同時使肺部轉(zhuǎn)移腫瘤灶的增殖能力降低,Ki67的肺部組織IHC染色結(jié)果顯示對照組為(24.3%± 2.1%),PMS 組為(10.6%± 4.5%)(P0.05)。血管生成標(biāo)記物 CD31 和 α-SMA在對照組的表達(dá)顯著高于PMS治療組(P0.01)。結(jié)論:MMP-9在犬惡性乳腺腫瘤中高表達(dá),可以作為診斷犬乳腺腫瘤惡性程度的標(biāo)記分子。PMS在體外通過抑制MMP-9的活性抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力等特性。在體內(nèi),PMS抑制MMP-9活性減少血管生成,發(fā)揮抗腫瘤作用。
[Abstract]:In this study , the expression of MMP - 9 in human breast cancer cell line and 4T1 mouse breast cancer cell line were determined by immunohistochemical method . The results showed that the expression of MMP - 9 was significantly lower than that in the control group ( P 0.01 ) . The results showed that the expression of MMP - 9 was significantly lower in the control group than in the control group ( P 0.01 ) .

【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S857.4

【參考文獻(xiàn)】

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