本文關(guān)鍵詞：ISG15在奶牛早期妊娠診斷中的應(yīng)用及FSH調(diào)控卵丘細(xì)胞中HSP70的機(jī)制研究　出處：《中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：反芻動(dòng)物中,妊娠識(shí)別與機(jī)體內(nèi)大量基因調(diào)控的改變有關(guān)。干擾素誘導(dǎo)基因15(ISG15)作為一種泛素類似蛋白可以通過ISGylatio n相關(guān)酶UBE1L和UBCH8連接到多種蛋白質(zhì)。我們猜測(cè)在妊娠奶牛體內(nèi)發(fā)生妊娠識(shí)別時(shí),ISG15及ISGlytion相關(guān)酶UBE1L和UBCH8可能與非妊娠奶牛的表達(dá)調(diào)控存在不同之處。本項(xiàng)研究的目的在于檢測(cè)ISG15與ISGylation目關(guān)酶在妊娠與非妊娠奶牛中的表達(dá)模式,為奶牛的早期妊娠診斷提供新的分子依據(jù)。同時(shí),還進(jìn)行了奶牛血液中單核淋巴細(xì)胞的體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),選取了不同濃度的干擾素τ(IFNT)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理后檢測(cè)ISG15、UBE1L及UBCH8的表達(dá)變化。結(jié)果顯示,IFNT顯著地上調(diào)了ISG15、UBE1L和UBCH8基因的表達(dá)。同時(shí),選取了30頭奶牛進(jìn)行同期發(fā)情處理,并進(jìn)行了人工授精,并隨機(jī)選取了12頭健康的未妊娠母牛作為對(duì)照組不進(jìn)行人工授精。當(dāng)人工授精后的第18天,分別采取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中奶牛的血液,并對(duì)其中的單核細(xì)胞進(jìn)行ISG15、UBE1L和UBCH8基因的檢測(cè)。授精45天后,通過直腸檢查方式檢查奶牛的妊娠情況。結(jié)果顯示,妊娠奶牛(13頭)中ISG15、UBE1L及UBCH8基因的表達(dá)量與未妊娠奶牛(17頭)及對(duì)照組奶牛(12頭)相比明顯上調(diào),其中授精后未妊娠奶牛與對(duì)照組奶牛中檢測(cè)基因的表達(dá)無明顯差異。綜上所訴,母體妊娠后的胚胎可以通過分泌IFNT作用于血液中的單核淋巴細(xì)胞,從而上調(diào)了ISG15、UBE1L和UBCH8等基因的表達(dá),而且上述三個(gè)基因可以作為奶牛早期妊娠診斷的分子標(biāo)志。卵母細(xì)胞可以完成成熟、受精、生成囊胚直至產(chǎn)生健康的新生命,而卵丘顆粒細(xì)胞對(duì)上述過程的完成有著重要作用。移除卵丘細(xì)胞后,能夠顯著地影響卵母細(xì)胞的成熟及后期發(fā)育。而且,卵丘細(xì)胞的特性及功能被卵母細(xì)胞緊密調(diào)控,并且可以反映卵母細(xì)胞的成熟程度。我們猜測(cè)卵丘細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)及信號(hào)通路情況可以反映配子的質(zhì)量,通過利用分子生物學(xué)檢測(cè)方式如RNA干擾、qRT-PCR及基因通路生物信息學(xué)分析等,著重研究了在應(yīng)激條件下卵丘細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)的改變及其內(nèi)在調(diào)控機(jī)制。本研究首要的目標(biāo)是探索熱應(yīng)激怎樣調(diào)控HSP70的表達(dá)。研究結(jié)果顯示,卵丘細(xì)胞在42℃熱應(yīng)激30 min后可以上調(diào)HSP70的表達(dá)。同時(shí),添加FSH處理細(xì)胞后可以下調(diào)HSP70,說明FSH可能參與了HSP70的調(diào)控。其次,在熱應(yīng)激時(shí)添加了FSH,上調(diào)了IFNT基因的表達(dá)。綜合上述結(jié)果得出IFNT基因可以參與了HSP70基因的調(diào)控。利用RNA干擾技術(shù),當(dāng)對(duì)卵丘細(xì)胞內(nèi)IFNT基因進(jìn)行敲降后,發(fā)現(xiàn)FSH不能在熱應(yīng)激后下調(diào)HSP70的表達(dá)。因此,FSH不僅促進(jìn)了IFNT基因的表達(dá),而且可以通過前者可以調(diào)控HSP70的表達(dá)。健康的卵丘細(xì)胞對(duì)于卵母細(xì)胞的質(zhì)量非常重要,全面的了解卵丘細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路及基因調(diào)控有利于對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育進(jìn)行檢測(cè),還可以作為評(píng)估以后的胚胎發(fā)育的分子指標(biāo)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S823
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本文編號(hào)：1308607