本文關(guān)鍵詞：雙峰駝PIGR和FCGRT的基因克隆、生物信息學(xué)分析及在扁桃體中表達(dá)特性的研究

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【摘要】：機(jī)體黏膜生態(tài)系統(tǒng)主要由黏膜和其表面的微生態(tài)系統(tǒng)構(gòu)成,是抵抗外界病原微生物入侵的第一道防線。pIgR和FcRn是黏膜生態(tài)系統(tǒng)中參與黏膜免疫應(yīng)答的重要效應(yīng)分子,能夠轉(zhuǎn)運(yùn)相應(yīng)抗體到黏膜表面,并能中和清除病原,以維持黏膜生態(tài)系統(tǒng)中正常的微生物菌群和生理環(huán)境。呼吸道、消化道和泌尿生殖道等器官的多種細(xì)胞能夠合成pIgR和FcRn,并在特定部位參與黏膜免疫應(yīng)答。扁桃體(包括腭扁桃體、咽扁桃體、舌扁桃體、軟腭扁桃體、會厭扁桃體、咽鼓管扁桃體)在不同動物呼吸道中的存在情況不同,并且作為重要的黏膜相關(guān)淋巴組織(Mucosa-associated lymphoid tissues,MALT)在呼吸道黏膜免疫和整個(gè)黏膜免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用。以上6種扁桃體在雙峰駝中均存在。為了確定pIgR和FcRn在雙峰駝各扁桃體中的表達(dá)和分布特點(diǎn)以及兩種受體在局部黏膜免疫中的生物學(xué)功能,同時(shí)為進(jìn)一步探究兩種受體在雙峰駝和其他動物體內(nèi)的生物學(xué)功能有無物種間差異。本文以6峰健康成年(6~16歲)阿拉善雙峰駝為研究對象,借助生物信息學(xué)分析對雙峰駝pIgR和FcRnα鏈的相關(guān)生物信息學(xué)特性加以分析;克隆得到雙峰駝的pIgR和FcRnα鏈的編碼區(qū)(coding regions,CDS);并采用免疫組織化學(xué)和實(shí)時(shí)熒光定量(相對)等方法,研究了成年雙峰駝6種扁桃體中FCGRT和PIGR的相對表達(dá)量及各扁桃體各部位pIgR和FcRn陽性細(xì)胞的分布特點(diǎn)。研究結(jié)果如下:(1)PIGR和FCGRT在不同扁桃體中的表達(dá)及相關(guān)生物信息學(xué)分析PIGR和FCGRT在咽扁桃體中的表達(dá)水平顯著高于其他各扁桃體(p0.05)。對兩者的生物信息學(xué)分析表明雙峰駝pIgR和FcRnα鏈均為I型跨膜分泌蛋白;pIgR和FcRnα鏈的一級結(jié)構(gòu)在區(qū)域分布上同人和牛等哺乳動物具有相似性;而雙峰駝與人的pIgR和FcRnα鏈的三級結(jié)構(gòu)顯示出高度的相似性。此外,序列同源性分析顯示,克隆得到的PIGR和FCGRT CDS區(qū)的核苷酸和氨基酸序列與GenBank中預(yù)測序列的核苷酸和氨基酸CDS區(qū)序列高度一致。(2)pigr陽性細(xì)胞在各扁桃體中的分布同一扁桃體不同區(qū)域:腭扁桃體中,濾泡區(qū)顯著高于濾泡間區(qū)(p0.05),濾泡間區(qū)又顯著高于上皮下區(qū)和網(wǎng)狀上皮下區(qū)(p0.05);會厭扁桃體中,濾泡區(qū)顯著高于濾泡間區(qū)和網(wǎng)狀上皮下區(qū),濾泡間區(qū)和網(wǎng)狀上皮下區(qū)(兩者彼此差異不顯著)又顯著高于上皮下區(qū)(p0.05);軟腭扁桃體中,濾泡區(qū)、上皮下區(qū)和網(wǎng)狀上皮下區(qū)(三者之間彼此差異不顯著)顯著高于腺體周圍區(qū)和濾泡間區(qū)(兩者之間彼此差異不顯著)(p0.05);咽鼓管扁桃體中,濾泡區(qū)、濾泡間區(qū)和腺體周圍區(qū)差異不顯著(p0.05),但三者分別顯著高于上皮下區(qū)(p0.05)。不同扁桃體同一區(qū)域:濾泡區(qū)中,會厭扁桃體顯著高于腭扁桃體、咽扁桃體以及咽鼓管扁桃體(三者之間彼此差異不顯著)(p0.05);濾泡間區(qū)中,會厭扁桃體和咽扁桃體(兩者彼此差異不顯著)顯著高于腭扁桃體和咽鼓管扁桃體(兩者彼此差異不顯著),腭扁桃體和咽鼓管扁桃體均又顯著高于軟腭扁桃體(p0.05);上皮下區(qū)中,咽扁桃體和軟腭扁桃體(兩者彼此差異不顯著)均顯著高于腭扁桃體、舌扁桃體、會厭扁桃體以及咽鼓管扁桃體(四者之間彼此差異不顯著)(p0.05);網(wǎng)狀上皮下區(qū)中,會厭扁桃體和軟腭扁桃體(兩者彼此差異不顯著)均顯著高于腭扁桃體(p0.05);腺體周圍區(qū)中,咽扁桃體和咽鼓管扁桃體(兩者彼此差異不顯著)均顯著高于軟腭扁桃體(p0.05)。(3)fcrn陽性細(xì)胞在各扁桃體中的分布同一扁桃體不同區(qū)域:腭扁桃體中,網(wǎng)狀上皮下區(qū)顯著高于其他三個(gè)區(qū)域(p0.05);咽扁桃體中,濾泡區(qū)、濾泡間區(qū)和腺體周圍區(qū)(三者彼此差異不顯著)均顯著高于上皮下區(qū)(p0.05);會厭扁桃體中,濾泡區(qū)和網(wǎng)狀上皮下區(qū)(兩者彼此差異不顯著)顯著高于濾泡間區(qū)和上皮下區(qū)(p0.05);軟腭扁桃體中,濾泡區(qū)、濾泡間區(qū)和網(wǎng)狀上皮下區(qū)(三者彼此差異不顯著)均顯著高于上皮下區(qū)和腺體周圍區(qū)(兩者彼此差異不顯著)(p0.05);咽鼓管扁桃體中,濾泡區(qū)和腺體周圍區(qū)(兩者彼此差異不顯著)顯著高于濾泡間區(qū)和上皮下區(qū)(兩者彼此差異不顯著)(p0.05)。不同扁桃體同一區(qū)域:濾泡區(qū)中,腭扁桃體、會厭扁桃體和軟腭扁桃體(三者彼此差異不顯著)均顯著高于咽扁桃體和咽鼓管扁桃體(兩者彼此差異不顯著)(p0.05);濾泡間區(qū)中,咽扁桃體、會咽扁桃體和軟腭扁桃體(三者彼此差異不顯著)均顯著高于腭扁桃體和咽鼓管扁桃體(兩者彼此差異不顯著)(p0.05);上皮下區(qū)中,腭扁桃體、舌扁桃體和會厭扁桃體(三者彼此差異不顯著)均顯著高于咽扁桃體,軟腭扁桃體和咽鼓管扁桃體(三者彼此差異不顯著)(p0.05);網(wǎng)狀上皮下區(qū)中,腭扁桃體和會厭扁桃體(兩者彼此差異不顯著)均顯著高于軟腭扁桃體(p0.05);腺體周圍區(qū)中,咽扁桃體、軟腭扁桃體和咽鼓管扁桃體三者之間無顯著差異(p0.05)。(4)pIgR和FcRn陽性細(xì)胞在同一扁桃體同一區(qū)域的分布腭扁桃體的濾泡區(qū)、濾泡間區(qū)、上皮下區(qū)和網(wǎng)狀上皮下區(qū)中FcRn陽性細(xì)胞的密度均顯著高于pIgR陽性細(xì)胞的密度(p0.05);咽扁桃體的上皮下區(qū)中FcRn陽性細(xì)胞的密度顯著高于pIgR陽性細(xì)胞的密度(p0.05),其他區(qū)域無顯著差異;會厭扁桃體濾泡區(qū)、濾泡間區(qū)、上皮下區(qū)和網(wǎng)狀上皮下區(qū)兩種陽性細(xì)胞密度差異不顯著(p0.05);軟腭扁桃體和舌扁桃體各區(qū)域兩種受體陽性細(xì)胞差異均不顯著(p0.05)。上述結(jié)果證實(shí),不同類型的扁桃體在發(fā)揮黏膜免疫應(yīng)答時(shí),其免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)部位可能不同,提示不同扁桃體產(chǎn)生黏膜免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)機(jī)制可能不同;pIgR和Fc Rn陽性細(xì)胞在扁桃體各區(qū)域的分布優(yōu)勢可能還與解剖學(xué)位置有關(guān);pIgR和Fc Rnα鏈的核苷酸和氨基酸序列在屬及屬以下分支的物種中的高度同源性表明pIgR和FcRnα鏈在雙峰駝、人、牛、嚙齒類動物以及其他哺乳動物內(nèi)具有相似的生物學(xué)功能。
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S824

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1 賈帥;雙峰駝PIGR和FCGRT的基因克隆、生物信息學(xué)分析及在扁桃體中表達(dá)特性的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

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本文編號：1296899