本文關鍵詞：郁金散半仿生提取物對急、慢性腸炎的保護作用及其機制研究

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【摘要】：郁金散是中(獸)醫(yī)臨床常用經(jīng)典方藥,主治急慢性腸炎、腹瀉、傳染性發(fā)熱、肺炎、肝炎等,療效顯著,現(xiàn)代藥理學研究表明其具有抗炎、抗菌及解熱鎮(zhèn)痛的作用,但對其治療腸炎作用的確切機制尚無深入研究。本研究采用均勻設計法優(yōu)選郁金散半仿生提取的最佳工藝條件,對郁金散半仿生提取物(Semi-bionic Extraction of Compound Turmeric,SET)、醇提物(Alcohol Extraction,AE)及水提物(Water Extraction,WE)進行平行對照實驗,用化學指標結合藥效學指標綜合評價,確定郁金散的最佳提取方法。研究SET的急性毒性、解熱和抗炎鎮(zhèn)痛作用,并采用葡聚糖硫酸鈉(Dextran Sulfate Sodium,DSS)誘導建立大鼠急性腸炎(Acute Enteritis,AE)及慢性腸炎(Chronic Enteritis,CE)模型,觀察SET對急、慢性腸炎的治療作用及其機制,為中藥郁金散的開發(fā)與應用提供理論依據(jù),主要研究結果如下:1、采用均勻設計法研究郁金散的半仿生提取工藝,以黃芩苷、鹽酸小檗堿、大黃素、姜黃素、芍藥苷和梔子苷含量為指標,并對提取物總黃酮、總生物堿、總蒽醌進行檢測,綜合評判工藝參數(shù),優(yōu)選出郁金散半仿生提取的最佳條件,結合生產(chǎn)實際,確定其工藝參數(shù)為:3煎用水pH依次為:2.0,7.0和9.0;提取時間依次為:2,1.5和1.5h。此方法可控性強、操作簡單、穩(wěn)定性較好。2、以干浸膏得率、總蒽醌、總黃酮、總生物堿為化學指標,以抗炎效應(小鼠耳殼腫脹試驗)和抗菌效應(體外大腸桿菌、綠膿桿菌、金葡萄球菌及白色念珠菌抑菌試驗)為藥效學指標,對SET、AE及WE進行平行對照實驗,比較郁金散不同方法提取物的作用效果。結果表明三種不同方法的提取液的作用效力順序為:SETAEWE,表明用化學指標結合藥效學指標綜合評價,優(yōu)選出的郁金散半仿生工藝可行,且提半仿生取法優(yōu)于傳統(tǒng)的水提及醇提法。3、SET對小鼠經(jīng)口給藥LD50為4.20g/kg,置信系數(shù)a=0.05時的置信區(qū)間為3.63g/kg≤LD50≤4.56 g/kg;SET對二甲苯致小鼠耳腫脹試驗及角叉菜膠致小鼠足跖腫脹急性炎癥反應具有明顯抑制作用,對干酵母及對2,4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱具有一定的解熱作用,且呈現(xiàn)量效關系;對冰醋酸致小鼠扭體反應及熱刺激致小鼠痛反應試SET具有一定的鎮(zhèn)痛作用。4、DSS誘導建立大鼠AE模型,動態(tài)監(jiān)測模型大鼠消化功能和組織形態(tài)的變化,結果顯示SET干預后大鼠體重及24小時攝食量均有所恢復;SET可顯著降低DAI值及結腸W/D比值,提示SET可改善模型大鼠消化功能,減輕腸道水腫;血清促炎及抗炎因子檢測結果顯示SET干預后模型大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8含量降低,IL-10含量升高,結腸組織MDA、MPO含量降低,DAO、GSH-Px含量升高;給藥后第7d,模型大鼠CMDI及HPS評分明顯高于正常對照組,經(jīng)SET干預后,各組CMDI及HPS評分值均有不同程度的減小;組織病理學觀察顯示模型大鼠結腸隱窩和上皮結構消失,腺體多數(shù)不完整,炎癥細胞廣泛浸潤,水腫和出血明顯,SET高劑量組大鼠結腸組織炎性細胞的浸潤明顯減少,水腫和充血明顯減輕,SET低劑量組大鼠結腸組織依然有大量的炎性細胞浸潤和出血點,但比模型組有輕微的好轉(zhuǎn);RT-PCR檢測結果顯示,SET干預后模型大鼠NF-кB-p65mRNA及ICAM-1mRNA含量降低;Western bloting分析顯示,SET干預后模型大鼠結腸組織NFκB-p65及ICAM-1表達降低。提示SET可作為急性腸炎的有效治療物質(zhì)。5、DSS誘導建立大鼠CE模型,研究SET對CE模型大鼠的治療作用,結果顯示,SET干預后模型大鼠體重及24小時攝食量明顯增加,模型大鼠DAI值及結腸W/D比值明顯降低;采用擴張球囊對CE大鼠進行結直腸刺激,結果顯示SET干預后在第21d、31d、41d及51d,SET高劑量組大鼠腹部撤回反射(Abdominal withDrawal Reflex,AWR)評分明顯降低,第42d及51d,SET低劑量組大鼠AWR值明顯降低,結果提示SET可緩解DSS引起的CE大鼠內(nèi)臟痛敏;SET干預后模型大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8含量明顯降低,IL-10含量明顯升高,結腸組織MDA、MPO含量顯著降低,DAO、GSH-Px含量顯著升高;提示SET亦可作為治療CE的有效治療物質(zhì)。
【學位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S853.74
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本文編號：1267428