本文關(guān)鍵詞：豬瘟病毒重組腺病毒載體疫苗的構(gòu)建及免疫保護試驗

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【摘要】：豬瘟(Classical swine fever,CSF)是由豬瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的高度接觸性傳染病,被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須報告的動物傳染病,我國將其列為一類動物疫病。豬瘟病毒結(jié)構(gòu)蛋白Erns、E2蛋白能夠產(chǎn)生特異性中和抗體,二者都與免疫保護相關(guān),NS3蛋白亦能誘導(dǎo)抗體,均被用于疫苗研究。在區(qū)別感染和免疫動物(DIVA)豬瘟疫苗研究中,基于人腺病毒5型(HAd V-5)載體的重組活病毒疫苗已經(jīng)取得良好的免疫保護水平,單獨表達(dá)CSFV E2蛋白的重組腺病毒(r Ad V-E2)能夠給試驗豬提供免疫保護,但保護效果不夠穩(wěn)定。研究中常采用許多方法優(yōu)化r Ad V-E2的免疫效果,比如:共表達(dá)CSFV E0和E2蛋白;或適當(dāng)修飾載體,嵌入甲病毒復(fù)制子以增強腺病毒的遞呈效率;或結(jié)合一些具有佐劑效應(yīng)的細(xì)胞因子等。本研究獲得了以下結(jié)果:(1)首次將假結(jié)核耶爾森菌的侵襲素C端(Inv C)引入豬瘟病毒腺病毒載體疫苗研究中,利用腺病毒表達(dá)載體構(gòu)建了共表達(dá)豬瘟病毒E2基因和耶爾森菌侵襲素基因C端重組腺病毒疫苗(r Ad V-E2-Inv C)。本動物免疫接種攻毒試驗結(jié)果表明,免疫豬能夠完全抵抗致死劑量CSFV石門株的攻擊。說明Inv C能夠更好地發(fā)揮佐劑免疫增強效應(yīng),誘導(dǎo)更高的特異性抗體水平和保護水平,r Ad V-E2-Inv C可以作為豬瘟腺病毒活載體疫苗候選株。(2)將Flt3配體引入豬瘟病毒腺病毒載體疫苗研究中,利用腺病毒表達(dá)載體構(gòu)建了共表達(dá)CSFV E2蛋白和FL的腺病毒載體疫苗(r Ad V-E2-FL),旨在通過FL的佐劑效應(yīng)提高r Ad V-E2疫苗免疫效果。但本動物免疫接種攻毒試驗結(jié)果表明,r Ad V-E2-FL組試驗豬的CSFV特異性體液免疫和細(xì)胞免疫水平以及攻毒后的保護水平均與r Ad V-E2免疫組的無明顯差異(p0.05)。(3)利用腺病毒表達(dá)載體構(gòu)建了共表達(dá)豬瘟病毒E0、E2基因和耶爾森菌侵襲素基因C端重組腺病毒(r Ad V-E0-2A-E2-2A-Inv C)、共表達(dá)豬瘟病毒E0、E2和豬IL2基因重組腺病毒(r Ad V-E0-2A-E2-2A-IL2)和共表達(dá)豬瘟病毒E0、E2和NS3基因的重組腺病毒(r Ad V-E0-2A-E2-2A-NS3)3種疫苗,并且以口蹄疫病毒2A蛋白連接3個蛋白。試驗結(jié)果表明,口蹄疫病毒2A能發(fā)揮其自我剪切功能;重組疫苗免疫家兔后6周,能完全保護豬瘟兔化弱毒的攻擊。綜上所述,本研究利用腺病毒載體構(gòu)建了共表達(dá)CSFV E2基因和耶爾森菌侵襲素基因C端重組疫苗(r Ad V-E2-Inv C),本動物免疫接種攻毒試驗結(jié)果表明,其能誘導(dǎo)良好的特異性抗體水平和堅固的免疫保護水平,可以作為豬瘟新型疫苗候選株。在此基礎(chǔ)上,以FMDV 2A蛋白連接多個基因,進(jìn)一步構(gòu)建了r Ad V-E0-2A-E2-2A-Inv C、r Ad V-E0-2A-E2-2A-IL2和r Ad V-E0-2A-E2-2A-NS3 3個重組疫苗,家兔免疫接種攻毒試驗結(jié)果表明,這3種疫苗均能完全保護豬瘟兔化弱毒的攻擊,可深入的進(jìn)行疫苗免疫保護試驗。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.4

【參考文獻(xiàn)】

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1 何雷;張彥明;徐彥召;唐青海;王靜;楊小云;代晨;向華;常鵬祥;林鷙;;共表達(dá)豬瘟病毒E2基因和豬白細(xì)胞介素2基因的重組腺病毒的構(gòu)建及其免疫原性研究[J];病毒學(xué)報;2010年05期

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本文編號：1245106