本文關(guān)鍵詞：過表達(dá)oTLR4轉(zhuǎn)基因綿羊的生物安全評估

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【摘要】：轉(zhuǎn)基因動物在生命科學(xué)、生物醫(yī)藥、環(huán)保、農(nóng)業(yè)等方面有著廣闊的應(yīng)用前景,且轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)發(fā)展越來越快。過表達(dá)oTLR4(ovine toll-like receptor4,oTLR4)轉(zhuǎn)基因綿羊表現(xiàn)出良好的抗病潛力,但只有通過安全評價后,才可能更好地應(yīng)用于廣大人民群眾的生產(chǎn)和生活中。 本研究以課題組先前成功獲得的過表達(dá)oTLR4轉(zhuǎn)基因公羊所擴(kuò)繁的F1代群體為研究對象,通過PCR和Southem Blot方法,共鑒定出過表達(dá)轉(zhuǎn)基因綿羊111只,陽性率為28.7%(111/387只)。通過RT'-PCR發(fā)現(xiàn),在單個核細(xì)胞中oTLR4mRNA表達(dá)量為非轉(zhuǎn)基因的2.5倍。測定了6月齡的轉(zhuǎn)基因綿羊和非轉(zhuǎn)基因綿羊的血液生理和肌肉的成分,觀察了心臟、肝臟、腎臟、肌肉、睪丸和卵巢的組織學(xué)變化。結(jié)果顯示,血液生理指標(biāo)之間沒有差異,器官切片的HE染色沒有病理性變化,且在肌肉主要成分上,過表達(dá)oTLR4轉(zhuǎn)基因綿羊肉與非轉(zhuǎn)基因綿羊肉相似,這表明所獲得過表達(dá)oTLR4Z轉(zhuǎn)基因綿羊體質(zhì)良好、發(fā)育正常。 在過表達(dá)oTLR44轉(zhuǎn)基因羊肉90天喂養(yǎng)Sprague-Dawley大鼠的亞慢性毒理評價研究中,實(shí)驗(yàn)共分七組,包括經(jīng)濟(jì)型飼料組,3.75%、7.5%和15%非轉(zhuǎn)基因羊肉三個添加量組,3.75%、7.5%、15%過表達(dá)oTLR4轉(zhuǎn)基因羊肉三個添加量組。每周對各組大鼠體重進(jìn)行稱量,在第45天和第90天進(jìn)行血液生理和血液生化檢測,在實(shí)驗(yàn)?zāi)┢谕ㄟ^屠宰對大鼠的大腦、心、肝、脾、肺、胸腺、腎上腺、卵巢和睪丸等主要臟器進(jìn)行稱重,計(jì)算臟器系數(shù)；對經(jīng)濟(jì)型飼料組、15%非轉(zhuǎn)基因羊肉組和15%過表達(dá)oTLR4轉(zhuǎn)基因羊肉組的大鼠的大腦、甲狀腺、胸腺、心、肝、脾、腎腺、腎、肺、睪丸、附睪、卵巢、子宮進(jìn)行組織切片觀察。結(jié)果顯示,在第45天時,在所測的22項(xiàng)大鼠血液指標(biāo)中：雌性大鼠,CHO、RBC、Ca、P、Mg在組間有差異；雄性大鼠,MPV、ALT、AST、 ALP、CREA、CHO、Cl在組間有差異,但這些數(shù)值都在正常的范圍內(nèi)；在第90天時,在所測的22項(xiàng)大鼠血液指標(biāo)中：雌性大鼠,W,C、LY、NE、MPV、MCH在組間有差異;雄性大鼠,WBC、LY、MO、PLT、MPV、HB、HCT、MCH、Ca、Cl在組間有差異,但這些數(shù)值都在正常的生理范圍內(nèi)。各組大鼠的體重生長曲線一致,在各組間沒有差異；各組的組織切片觀察顯示,各臟器發(fā)育良好。在90天大鼠的飼喂實(shí)驗(yàn)中,沒有發(fā)現(xiàn)過表達(dá)oTLR4轉(zhuǎn)基因羊肉對大鼠的生長發(fā)育不利的影響,說明過表達(dá)4oTLR4轉(zhuǎn)基因羊肉作為食品是安全的。這對以后的來自其它的轉(zhuǎn)基因動物產(chǎn)品的安全性提供了寶貴的依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S826

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本文編號：1178500