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CRISPR/Cas9靶向編輯技術的優(yōu)化及其在干細胞中的應用

發(fā)布時間:2024-05-18 14:00
  CRISPR/Cas9系統(tǒng)基因編輯技術的發(fā)現(xiàn)發(fā)展,為人類疾病尤其是罕見遺傳病的基因治療提供了更有利的技術平臺,為精準醫(yī)療提供了新策略。如何最大限度地降低和評估脫靶效應、提高其在干細胞中的基因編輯效率,是CRISPR/Cas9系統(tǒng)走向臨床應用的前提和關鍵。本論文借助細胞中DNA雙鏈斷裂(DSBs)后自發(fā)進行的非同源末端連接(NHEJ)或同源介導的雙鏈修復(HDR)兩種機制,將帶有目標基因序列向?qū)NA(guide RNA,gRNA)的一個或多個CRISPR/Cas9系統(tǒng)導入人的細胞系和干細胞中,誘發(fā)DNA雙鏈斷裂,進而誘發(fā)基因序列的插入、修飾和缺失,提高靶向編輯的效率和準確性;同時利用整合酶缺陷型慢病毒載體(Integration-Defective LentiviralVectors,IDLVs)能夠優(yōu)先識別DNA雙鏈斷裂的特點,對CRISPR/Cas9系統(tǒng)產(chǎn)生的脫靶位點進行了評估,并優(yōu)化了干細胞中的基因編輯效率。第1章CRISPR/Cas9系統(tǒng)中gRNA脫靶效應評估新方法的建立近年來,CRISPR/Cas9系統(tǒng)廣泛地應用于動植物的基礎研究中,更有望在未來應用于臨床疾病治療。而脫靶效應...

【文章頁數(shù)】:134 頁

【學位級別】:博士

【文章目錄】:
致謝
前言
摘要
Abstract
縮寫、術語表
1 CRISPR/Cas9系統(tǒng)中gRNA脫靶效應評估新方法的建立
    1.1 引言
    1.2 材料和方法
    1.3 實驗結(jié)果
    1.4 討論
    1.5 小結(jié)
2 多能干細胞中CRISPR/Cas9介導的高效率的同源重組修飾
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
    2.3 實驗結(jié)果
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
3 造血干細胞中CRISPR/Cas9介導的靶向刪除在β-globin疾病治療中的應用
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
    3.3 實驗結(jié)果
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 總結(jié)
5 綜述 基因編輯技術及其在人血液系統(tǒng)中的應用
    5.1 基因治療的基本原理
    5.2 靶向核酸酶系統(tǒng)
    5.3 基因治療中應用的載體工具
    5.4 基因編輯技術在血液系統(tǒng)中的應用
    5.5 小結(jié)和展望
參考文獻
作者簡歷



本文編號:3977030

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