發(fā)布時(shí)間：2024-05-18 14:00

　　CRISPR/Cas9系統(tǒng)基因編輯技術(shù)的發(fā)現(xiàn)發(fā)展,為人類疾病尤其是罕見(jiàn)遺傳病的基因治療提供了更有利的技術(shù)平臺(tái),為精準(zhǔn)醫(yī)療提供了新策略。如何最大限度地降低和評(píng)估脫靶效應(yīng)、提高其在干細(xì)胞中的基因編輯效率,是CRISPR/Cas9系統(tǒng)走向臨床應(yīng)用的前提和關(guān)鍵。本論文借助細(xì)胞中DNA雙鏈斷裂(DSBs)后自發(fā)進(jìn)行的非同源末端連接(NHEJ)或同源介導(dǎo)的雙鏈修復(fù)(HDR)兩種機(jī)制,將帶有目標(biāo)基因序列向?qū)NA(guide RNA,gRNA)的一個(gè)或多個(gè)CRISPR/Cas9系統(tǒng)導(dǎo)入人的細(xì)胞系和干細(xì)胞中,誘發(fā)DNA雙鏈斷裂,進(jìn)而誘發(fā)基因序列的插入、修飾和缺失,提高靶向編輯的效率和準(zhǔn)確性;同時(shí)利用整合酶缺陷型慢病毒載體(Integration-Defective LentiviralVectors,IDLVs)能夠優(yōu)先識(shí)別DNA雙鏈斷裂的特點(diǎn),對(duì)CRISPR/Cas9系統(tǒng)產(chǎn)生的脫靶位點(diǎn)進(jìn)行了評(píng)估,并優(yōu)化了干細(xì)胞中的基因編輯效率。第1章CRISPR/Cas9系統(tǒng)中g(shù)RNA脫靶效應(yīng)評(píng)估新方法的建立近年來(lái),CRISPR/Cas9系統(tǒng)廣泛地應(yīng)用于動(dòng)植物的基礎(chǔ)研究中,更有望在未來(lái)應(yīng)用于臨床疾病治療。而脫靶效應(yīng)...

【文章頁(yè)數(shù)】：134 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
前言
摘要
Abstract
縮寫(xiě)、術(shù)語(yǔ)表
1 CRISPR/Cas9系統(tǒng)中g(shù)RNA脫靶效應(yīng)評(píng)估新方法的建立
    1.1 引言
    1.2 材料和方法
    1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1.4 討論
    1.5 小結(jié)
2 多能干細(xì)胞中CRISPR/Cas9介導(dǎo)的高效率的同源重組修飾
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
3 造血干細(xì)胞中CRISPR/Cas9介導(dǎo)的靶向刪除在β-globin疾病治療中的應(yīng)用
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 總結(jié)
5 綜述 基因編輯技術(shù)及其在人血液系統(tǒng)中的應(yīng)用
    5.1 基因治療的基本原理
    5.2 靶向核酸酶系統(tǒng)
    5.3 基因治療中應(yīng)用的載體工具
    5.4 基因編輯技術(shù)在血液系統(tǒng)中的應(yīng)用
    5.5 小結(jié)和展望
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3977030