發(fā)布時(shí)間：2022-11-05 16:22

　　平滑肌肌球蛋白（smooth muscle myosin, SmM）是一種重要的分子馬達(dá),是平滑肌粗絲的主要成分。通過與肌動(dòng)蛋白細(xì)絲的相互作用,SmM可以將ATP水解產(chǎn)生的化學(xué)能轉(zhuǎn)化成構(gòu)象變化,使粗絲-細(xì)絲間發(fā)生相互滑動(dòng),引起平滑肌收縮。 SmM由兩條重鏈、兩條必需輕鏈（Essential light chain, ELC）、以及兩條調(diào)節(jié)輕鏈（Regulatory light chain, RLC）組成。SmM重鏈包括位于N端的馬達(dá)頭部（包含ATP水解酶活性中心和細(xì)絲結(jié)合位點(diǎn)）、輕鏈ELC和RLC結(jié)合位點(diǎn)、以及C端的卷曲螺旋（coiled-coil）。SmM的馬達(dá)功能受磷酸化調(diào)節(jié)。在非磷酸化狀態(tài)下,SmM的馬達(dá)活性處于抑制狀態(tài),其ATP水解酶活力極低；當(dāng)SmM的RLC輕鏈被磷酸化后,SmM的馬達(dá)活性處于高活性狀態(tài),具有很高的ATP水解酶活力。大量的研究表明,非磷酸化狀態(tài)下,SmM的雙頭之間以及頭部與尾部之間存在相互作用,使SmM處于折疊抑制狀態(tài)；RLC磷酸化后,上述相互作用消失,SmM處于伸展激活狀態(tài)。由于磷酸化位點(diǎn)位于RLC輕鏈,與ATP水解酶活性中心相距甚遠(yuǎn),一個(gè)重要問題是R... 

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)說明
圖序
表序
目錄
第一章 綜述
    1.1 引言
    1.2 肌球蛋白超家族
    1.3 第Ⅱ類肌球蛋白
    1.4 平滑肌肌球蛋白(Smooth Muscle Myosin,SmM)
        1.4.1 平滑肌肌球蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.4.2 平滑肌肌球蛋白的磷酸化調(diào)節(jié)機(jī)制
        1.4.3 肌球蛋白輕鏈激酶(Myosin Light Chain Kinase,MLCK)
        1.4.4 肌球蛋白磷酸酶(MP)
    1.5 研究背景
    1.6 研究意義
第二章 平滑肌肌球蛋白的雙頭結(jié)構(gòu)在磷酸化調(diào)節(jié)中的作用
    2.1 前言
    2.2 材料方法
        2.2.1 試劑
        2.2.2 儀器設(shè)備
        2.2.3 質(zhì)粒與菌種
        2.2.4 基因克隆
        2.2.5 真核細(xì)胞蛋白表達(dá)與純化
        2.2.6 ATP水解酶活力測(cè)定
        2.2.7 蛋白酶處理Sm849
        2.2.8 凝膠過濾層析
        2.2.9 蛋白梯度膠的配制
        2.2.10 電鏡實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 非變性膠電泳
        2.2.12 平滑肌肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)的制備
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 平滑肌肌球蛋白不同截短蛋白的獲得
        2.3.2 平滑肌肌球蛋白二聚化的鑒定
        2.3.3 維持平滑肌肌球蛋白穩(wěn)定二聚化所需要的關(guān)鍵尾部區(qū)域
        2.3.4 雙頭結(jié)構(gòu)對(duì)于平滑肌肌球蛋白的磷酸化依賴的激活是必須的
        2.3.5 酶解增加了S1的ATP水解酶活力
    2.4 本章小結(jié)
    2.5 討論
第三章 平滑肌肌球蛋白頭尾相互作用在磷酸化調(diào)節(jié)中的作用
    3.1 前言
    3.2 材料方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3.1 平滑肌肌球蛋白943之前的尾部參與頭尾相互作用
        3.3.2 平滑肌肌球蛋白899之后的尾部參與頭尾相互作用
        3.3.3 尾部的酸性氨基酸參與了頭尾相互作用
        3.3.4 頭部的堿性氨基酸參與了頭尾相互作用
    3.4 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的其他研究成果



本文編號(hào)：3702934