發(fā)布時間：2017-04-24 08:13

  本文關(guān)鍵詞：1999年～2013年山東雞源H9N2亞型禽流感病毒遺傳演化和血凝素抗原性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：H9N2亞型禽流感屬低致病性禽流感,是危害商品肉雞、高產(chǎn)蛋雞和種雞的一種重要疫病,也是目前雞群中流行范圍最廣、危害較大的疫病之一。自1992年在我國首次發(fā)生以來,至今已成為養(yǎng)雞場的一種常見多發(fā)病。本研究通過對H9N2流行株的致病性、血凝抑制試驗、雞胚中和實驗、疫苗免疫保護試驗等評價了山東省H9N2流行株的抗原性變化；從全基因組角度解析了山東省近年來H9N2流行毒的基因重排特點,重點研究了1999年～2013年間H9N2血凝素蛋白(HA)的遺傳變異規(guī)律。此外,探討了基因變異對病毒抗原性的影響,研究了二者的變異相關(guān)性。 1.H9N2病毒山東株的分離、鑒定與生物學(xué)特性測定 在山東發(fā)病雞群中分離鑒定了35株H9N2業(yè)型(其中2010年前分離鑒定19株,2010-2013年分離鑒定16株),排除了外源病毒感染,利用終濃度稀釋法進行了病毒純化和生物學(xué)毒力測定,其中2010年以后分離的毒株的EID50/0.1ml在107.83～109.20之間,IVPI結(jié)果為0～0.17,與本實驗室在1999年～2010年分離的毒株H9N2進行了生物學(xué)比較,毒力有所增強,應(yīng)警惕H9N2毒力增強的趨勢。 2.H9N2病毒全基因組分析 對HA基因的系統(tǒng)發(fā)育研究表明：分離鑒定的35株H9N2流行株均屬于歐業(yè)譜系,其中有BJ94-1ike(1996～2005,3株)、Y280-1ike(1999-2009,4株)：S2-1ike(2010-2013,28株),這表明S2-1ike業(yè)群為近年來山東地區(qū)H9N2主要的流行株。其中對2010年以后的16株流行毒之間核苷酸、氨基酸同源性分別為94.5%-100%、96.1%-100%,但與經(jīng)典疫苗SD-1996的核苷酸、氨基酸同源性已降至90.0%-92.5%、91.8%～95.0%。蛋白裂解位點分析表明：1994年～2010年的H9N2流行毒株,其蛋白裂解位點基序多為PARSSRGL,而2010年以后的毒株則多數(shù)為PSRSSRGL,仍符合低致病性禽流感的序列特征,這與生物學(xué)毒力檢測指標一致。選取CK/SD/S2/05等8個不同年代的流行株進行全基因組測序,發(fā)現(xiàn)均屬于歐業(yè)譜系,相比HA和NA基因,除NS基因較為保守外,其它6個編碼蛋白的遺傳演化表現(xiàn)為多樣性。CK/SD/DY/2009.CK/SD/SIX/2010.CK/SD/YT07/2010、CK/SD/HKY1/2013的PB2和M基因均來源于G1-like,CK/SD/BD/2008的PB2基因來源于F98-1ike,M基因來源于G1-like;而早期的分離毒株及參考株均來源于BJ94-1ike或F98-1ike。2005年之前的毒株屬BJ94-like基因型,而2008年以后的毒株P(guān)B1、PA、NP基因?qū)儆贔98-like,NA、NS基因?qū)儆贐J94-1ike,M基因?qū)儆贕1-like,而在PB2.HA基因上出現(xiàn)F98-like.G1-like和BJ94-like.S2-like的變化。這表明H9N2亞型禽流感病毒流行毒株的發(fā)生了不同程度的重排現(xiàn)象,產(chǎn)生了多種基因型的H9N2病毒。 3.H9N2病毒血凝素抗原性分析 綜合HA基因分型結(jié)果,篩選不同遺傳進化分支上的代表性病毒(8株),分別進行HI交叉抑制。結(jié)果發(fā)現(xiàn),同源病毒對其本身血凝抑制效價較高,而不同時期的H9N2毒株之問,其HI交叉相對較低。表明我國H9N2流行病毒之間已在抗原性上發(fā)生了較大程度的變異。統(tǒng)計學(xué)分析表明,H9N2亞型AIVHI相關(guān)指數(shù)與其HA基因氨基酸的同源性具有顯著相關(guān)性(p0.05),Y=-3.53X+2.4487,R=0.6398。說明H9N2亞型AIV的HI抗原性主要與HA叢因的遺傳變異相關(guān)。進一步利用雞胚中和試驗也證明了這一點。 4.疫苗免疫攻毒評價 疫苗攻毒保護試驗表明：利用流行株制備的疫苗與經(jīng)典疫苗相比,其攻毒后的臨床癥狀、病毒分離率及排毒量均顯著降低,SD/96疫苗株對于YZ/00、JN/05這2個不同流行毒株對攻毒的保護率為80%,而對于流行株LC02/13的保護率只有40%；LC02/13滅活疫苗對于這4個流行株攻毒后的保護率為100%,進而證實利用新流行株制備的疫苗具有更好的保護效果。 本論文對近年來山東雞群中H9N2亞型禽流感的遺傳演化與抗原性進行了系統(tǒng)分析與研究,同時進行了疫苗免疫效果評價探討,研究結(jié)果為山東省H9N2亞型禽流感的防控提供了理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：H9N2亞型禽流感 分離鑒定 全基因組 血凝素蛋白 抗原性
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 中英文對照縮略詞表（Abbreviations)12-13
• 第一章 文獻綜述13-34
• 1.1 禽流感病毒的分子結(jié)構(gòu)13-19
• 1.2 AIV致病的分子機制19-24
• 1.3 AIV的流行病學(xué)24-28
• 1.4 禽流感防控的公共衛(wèi)生意義28-29
• 1.5 本課題的提出背景及意義29-34
• 第二章 H9N2亞型禽流感病毒株的分離鑒定與生物學(xué)特性研究34-42
• 摘要34
• 2.1 前言34
• 2.2 材料和方法34-37
• 2.3 結(jié)果37-41
• 2.4 討論41-42
• 第三章 H9N2亞型禽流感病毒血凝素基因的演化42-63
• 摘要42
• 3.1 前言42
• 3.2 材料和方法42-46
• 3.3 結(jié)果46-61
• 3.4 討論61-63
• 第四章 H9N2亞型禽流感病毒全基因組測序及遺傳演化分析63-80
• 摘要63
• 4.1 前言63
• 4.2 材料與方法63-66
• 4.3 結(jié)果66-78
• 4.4 討論78-80
• 第五章 山東雞源H9N2亞型禽流感病毒抗原性分析80-89
• 摘要80
• 5.1 前言80
• 5.2 材料與方法80-83
• 5.3 結(jié)果83-88
• 5.4 討論88-89
• 第六章 H9N2亞型禽流感常規(guī)滅活疫苗對流行毒株的免疫保護89-94
• 摘要89
• 6.1 前言89
• 6.2 材料與方法89-91
• 6.3 結(jié)果91-93
• 6.4 討論93-94
• 第七章 結(jié)論94-95
• 參考文獻95-107
• 致謝107-109
• 個人簡歷109

【參考文獻】

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本文編號：323853