發(fā)布時間：2021-01-18 05:17

　　細胞衰老是一種不可逆的細胞休眠狀態(tài),由多種機制驅(qū)動,如端�？s短導(dǎo)致的復(fù)制衰竭、癌基因激活、基因毒性、營養(yǎng)和氧化應(yīng)激等。這些機制通常在DNA損傷反應(yīng)（DDR）累積的基礎(chǔ)上,導(dǎo)致腫瘤抑制因子p53的激活,繼而調(diào)控p21和p16等細胞周期依賴性激酶（CDK）抑制因子的表達。雖然細胞衰老最初被認為是一種與正常細胞老化相呼應(yīng)的被動的細胞自主抗增殖程序,但人們越來越認識到細胞衰老在許多其他生理和病理過程中起著重要作用,包括腫瘤抑制、神經(jīng)退行性病變和組織重塑。此外,由衰老細胞分泌蛋白改變導(dǎo)致的衰老相關(guān)分泌表型（SASP）還參與調(diào)節(jié)炎癥、組織微環(huán)境和年齡相關(guān)疾病。越來越多的非編碼RNA被發(fā)現(xiàn)參與調(diào)節(jié)細胞衰老。例如,長鏈非編碼RNA MIR31HG通過調(diào)節(jié)p16的表達來調(diào)節(jié)致癌基因誘導(dǎo)的細胞衰老,而HOTAIR通過DDR-p53-p21信號激活細胞衰老。此外,lncRNAOVAAL通過調(diào)節(jié)CDK抑制因子p27的表達來阻止細胞衰老。本實驗室在之前發(fā)現(xiàn)lncRNAGUARDIN在維持基因組穩(wěn)定性中起著重要作用。而且沉默GUARDIN可誘導(dǎo)某些腫瘤細胞發(fā)生,但其具體作用機制尚不清楚。Rapamycin（雷帕霉... 

【文章來源】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語
第1章 緒論
    1.1 細胞衰老的概述
        1.1.1 細胞衰老的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 誘發(fā)細胞衰老的因素
        1.1.3 細胞衰老的兩面性
        1.1.4 FOXO調(diào)控細胞衰老
        1.1.5 Rapamycin調(diào)控細胞衰老
    1.2 長鏈非編碼RNA的概述
        1.2.1 長鏈非編碼RNA的分類
        1.2.2 長鏈非編碼RNA的作用機制
        1.2.3 長鏈非編碼RNA調(diào)控細胞衰老
        1.2.4 長鏈非編碼RNA GUARDIN
第2章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞系
        2.1.2 藥品和試劑盒
        2.1.3 抗體
        2.1.4 表達載體和質(zhì)粒
        2.1.5 引物、分子探針和shRNA
    2.2 實驗儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）
        2.3.2 純化回收DNA
        2.3.3 限制性核酸內(nèi)切酶酶切
        2.3.4 感受態(tài)細胞制備
        2.3.5 目的片段與載體的連接
        2.3.6 連接產(chǎn)物和質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化及驗證保種
        2.3.7 抽提質(zhì)粒
        2.3.8 細胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代及保種
        2.3.9 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.3.10 慢病毒包裝、感染細胞及細胞篩選
        2.3.11 細胞總RNA提取
        2.3.12 RNA逆轉(zhuǎn)錄
        2.3.13 實時熒光定量PCR（Real-time quantitative PCR,qPCR）
        2.3.14 蛋白質(zhì)樣品制備和定量
        2.3.15 蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)（Western blotting）
        2.3.16 考馬斯亮藍染色
        2.3.17 RNA體外轉(zhuǎn)錄
        2.3.18 RNA免疫印跡技術(shù)（Northern blotting）
        2.3.19 RNA熒光原位雜交（FISH）
        2.3.20 RNA pulldown
        2.3.21 IP（免疫共沉淀技術(shù)）
        2.3.22 RIP（RNA免疫共沉淀技術(shù)）
        2.3.23 CHIP（染色質(zhì)免疫共沉淀）
        2.3.24 雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?br>        2.3.25 細胞基因組提取
        2.3.26 細胞衰老β-半乳糖苷酶染色
        2.3.27 酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（Elisa）
        2.3.28 免疫熒光（IF）
        2.3.29 細胞核質(zhì)分離
        2.3.30 RNA測序
        2.3.31 哺乳動物雙雜交系統(tǒng)
        2.3.32 數(shù)據(jù)處理和分析
第3章 實驗結(jié)果與分析
    3.1 GUARDIN抑制細胞衰老
    3.2 GUARDIN通過轉(zhuǎn)錄抑制p21調(diào)控細胞衰老
    3.3 GUARDIN促進LRP130/PGC1α相互作用
    3.4 LRP130/PGC1α間接轉(zhuǎn)錄調(diào)控p21
    3.5 GUARDIN通過FOXO4調(diào)控p21
    3.6 LRP130/PGC1α直接轉(zhuǎn)錄調(diào)控FOXO4
    3.7 GUARDIN-FOXO4信號軸獨立于BARD1、BRCA1和miR-23a
    3.8 Rapamycin通過轉(zhuǎn)錄因子FOSL2調(diào)控GUARDIN
第4章 實驗討論
    4.1 討論與總結(jié)
    4.2 創(chuàng)新點
    4.3 研究不足與展望
參考文獻
附錄1 響應(yīng)rapamycin的轉(zhuǎn)錄因子信息
附錄2 人體組織中GUARDIN、LRP130和FOXO4相關(guān)性
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)生論文與取得的其他研究成果



本文編號：2984349