目的:1)誘導(dǎo)人脂肪干細(xì)胞（human adipose derived stem cells,hASCs）向平滑肌細(xì)胞分化并鑒定;2)探討miR-145在hASCs向平滑肌細(xì)胞分化過程中的表達(dá)及作用;3)預(yù)測miR-145的作用靶基因,并確定miR-145及其靶基因?qū)ASCs向平滑肌細(xì)胞分化過程中的作用機(jī)制;4)闡明鈣離子/鈣調(diào)素依賴的蛋白激酶IIγ（Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase IIγ,Ca MKIIγ）在hASCs向平滑肌細(xì)胞分化過程中的表達(dá)與作用機(jī)制。方法:1)分離培養(yǎng)人脂肪干細(xì)胞并鑒定;將第三代hASCs在轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）和骨形態(tài)蛋白4（BMP4）的作用下向平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化,用熒光定量PCR、western blot、免疫熒光等方法檢測平滑肌細(xì)胞特異性標(biāo)記物的表達(dá);2)hASCs向平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)7天以后檢測miR-145的表達(dá)情況;合成miR-145模擬物及抑制物,并將其轉(zhuǎn)染到hASCs,檢測轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染成功以后進(jìn)行誘導(dǎo),觀察平滑肌細(xì)胞特異性標(biāo)記物的表達(dá),并確定miR-145在這過程中的作用;3)利用生物... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：140 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

原代人脂肪干細(xì)胞,×40

新疆醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文 結(jié)果.1 人脂肪干細(xì)胞的生長狀況及鏡下形態(tài)原代培養(yǎng)的脂肪干細(xì)胞在接種后的 24 小時(shí)呈現(xiàn)短、細(xì)的條索狀，并含有少量的造血細(xì)胞，48 小時(shí)以后細(xì)胞迅速增長，第 4~5 天達(dá)到生長平臺期。當(dāng)細(xì)胞匯達(dá)到 80%左右時(shí)進(jìn)行傳代。第三代人脂肪干細(xì)胞形態(tài)均一，排列有序，成纖維體狹長。（圖 1-1，圖 1-2）

（圖 1-1，圖 1-2）圖 1-1 原代人脂肪干細(xì)胞, ×40 圖 1-2 第三代人脂肪干細(xì)胞, ×40Fig.1-1 hASCs at first passage, ×40 Fig.1-2 hASCs at third passage, ×40 人脂肪干細(xì)胞表面抗原的檢測實(shí)驗(yàn)所用的第三代至第五代人脂肪干細(xì)胞進(jìn)行了流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表結(jié)果顯示：CD13、CD34、CD44、CD49d、CD90、CD105 以及 CD166 陽而造血細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的 CD14、CD45 與 CD31 陰性表達(dá)，根據(jù)這個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞和造血系的污染。（圖 1-3，表 1-2）


本文編號：2901883