本文關鍵詞：內嗎啡肽2抑制骶副交感節(jié)前神經(jīng)元活動的形態(tài)學與機能學研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:骶副交感核(sacral parasympathetic nucleus,SPN)是脊髓的自主神經(jīng)中樞之一,它控制盆腔臟器的多種功能,如排尿、排便、陰莖勃起等。位于SPN內的副交感節(jié)前神經(jīng)元(parasympathetic preganglionic neurons,PPNs)在排尿反射過程發(fā)揮著重要作用。在脊髓完整的成年動物,排尿活動的主要由脊髓以上與排尿活動相關核團之間形成的多突觸反射環(huán)路控制。但在頸段和胸段水平脊髓橫斷損傷后的慢性脊髓化動物,感覺傳入與PPNs的突起之間形成單突觸聯(lián)系形成排尿反射回路。內嗎啡肽包括內嗎啡肽1(endomorphin 1,EM-1)和內嗎啡肽2(endomorphin 2,EM-2)兩種亞型,因其與μ-阿片受體(μ-opioid receptor,MOR)有高度的親和力與選擇性,故被認為是MOR的內源性配體。嗎啡是MOR的外源性配體,它在脊髓水平抑制膀胱活動,這是造成臨床上鞘內應用嗎啡最常見的并發(fā)癥——尿潴留(urinary retention)的原因。我們最近的研究表明EM-2免疫陽性的終末與SPN內表達MOR的PPNs構成突觸聯(lián)系。故推測尿潴留與嗎啡抑制PPNs從而抑制排尿反射有關。但阿片類物質對SPN的PPNs在細胞水平的作用尚不清楚。目的:揭示SPN內PPNs的形態(tài)和化學神經(jīng)解剖學特點以及內源性阿片肽EM-2影響PPNs的效應和作用機制,為防治嗎啡導致尿潴留提供理論依據(jù)。材料與方法:先用熒光追蹤劑四甲基羅達明(TMR)經(jīng)盆神經(jīng)逆行標記方法,特異性顯示谷氨酸脫羧酶67-綠色熒光蛋白(GAD67-GFP)轉基因小鼠SPN內PPNs的形態(tài)結構特點和化學神經(jīng)解剖學特點;再用全細胞膜片鉗記錄方法研究EM-2對24-30天齡大鼠SPN內PPNs興奮性的影響以及對PPNs的興奮性和抑制性神經(jīng)遞質突觸傳遞的影響。結果:1.從形態(tài)學上用GAD67-GFP基因轉基因小鼠證實在SPN內及其周圍有含抑制性遞質——γ-氨基丁酸(GABA)的抑制性中間神經(jīng)元,SPN內還有非副交感節(jié)前神經(jīng)元和不含GABA的其它類型的神經(jīng)元,后者可能為興奮性中間神經(jīng)元,或向上位脊髓結構或脊髓以上的中樞部位投射的神經(jīng)元,也可能是甘氨酸能的抑制性中間神經(jīng)元。2.SPN內的PPNs大都表達MOR,非副交感節(jié)前神經(jīng)元和非GABA能的神經(jīng)元也多數(shù)表達MOR,只有個別含GABA的抑制性中間元微弱表達MOR。3.EM-2(3μM)能夠降低61.1%節(jié)前神經(jīng)元的靜息膜電位,產(chǎn)生半數(shù)最大反應(EC50)的有效濃度為0.282μM;EM-2增加引起動作電位發(fā)放的最小刺激值,并抑制動作電位的重復發(fā)放,這些結果說明EM-2通過超極化PPNs而降低其興奮性。4.電流-電壓關系曲線揭示EM-2引起的電流其反轉電位為-95±2.5 m V;灌流K+通道阻斷劑4-氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP)或Ba Cl2可大部分阻斷EM-2在PPNs引起的電流;在電極內液中加入二磷酸鳥苷(GDP)的類似物guanosine5′-[β-thio]diphosphate trilithium salt(GDP-β-S)可阻斷EM-2引起的電流;灌流選擇性MOR拮抗劑D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Orn-Thr-Pen-Thr-NH2(CTOP)可阻斷這些電流。這些結果說明EM-2與PPNs膜上的MOR結合后,隨之激活G蛋白偶聯(lián)的內向整流鉀通道(GIRK),導致神經(jīng)元的超極化。5.EM-2降低PPNs的微小興奮性突觸后電流(m EPSCs)的頻率與幅度;EM-2還能降低自發(fā)性抑制性突觸后電流(s IPSCs)的頻率與幅度,但不改變微小抑制性突觸后電流(m IPSCs)的頻率與幅度。CTOP可阻斷EM-2對m EPSCs及s IPSCs頻率與幅度的影響。這些結果說明EM-2與突觸前終末的MOR結合之后,可以抑制突觸前終末興奮性神經(jīng)遞質的釋放,但對抑制性神經(jīng)遞質的釋放沒有影響。結論:1.SPN的神經(jīng)元由PPNs、GABA能的抑制性中間神經(jīng)元和其它類型的神經(jīng)元組成。2.SPN內的PPNs與其它類型的神經(jīng)元表達MOR,僅少許GABA能神經(jīng)元微弱表達MOR。3.EM-2與PPNs突觸后膜上的MOR結合,引起PPNs的超極化,降低PPNs的興奮性;EM-2與突觸前終末上的MOR結合,能夠使突觸前終末減少釋放興奮性神經(jīng)遞質,但不影響抑制性神經(jīng)遞質的釋放。這些結果提示EM-2在骶髓的SPN內對PPNs的活動具有直接的抑制作用,且EM-2還可抑制突觸前終末釋放興奮性神經(jīng)遞質,導致初級傳入與PPNs形成回路的排尿反射信息傳遞被抑制,這些現(xiàn)象可以詮釋臨床上鞘內使用嗎啡引起的膀胱功能異常的原因。
【關鍵詞】：內嗎啡肽2 副交感節(jié)前神經(jīng)元 骶副交感核 神經(jīng)元興奮性 興奮性突觸后電流 尿潴留
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R338
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-14
• 第一部分 骶副交感節(jié)前神經(jīng)元的形態(tài)和化學神經(jīng)解剖學研究14-30
• 1 前言14-15
• 2 材料15-17
• 3 方法17-21
• 4 實驗結果21-26
• 5 討論26-30
• 第二部分 內嗎啡肽2對骶副交感核節(jié)前神經(jīng)元的興奮性和興奮性突觸傳遞的影響30-56
• 1 前言30-31
• 2 材料31-33
• 3 方法33-37
• 4 實驗結果37-51
• 5 討論51-56
• 第三部分 內嗎啡肽2對骶副交感核節(jié)前神經(jīng)元抑制性突觸傳遞的影響56-66
• 1 前言56-57
• 2 材料57-58
• 3 方法58-59
• 4 結果59-64
• 5 討論64-66
• 小結66-67
• 結論67-68
• 參考文獻68-75
• 綜述75-85
• 參考文獻82-85
• 致謝85-86
• 個人簡歷及在學期間發(fā)表的論文86

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中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳英標;內嗎啡肽2抑制骶副交感節(jié)前神經(jīng)元活動的形態(tài)學與機能學研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

  本文關鍵詞：內嗎啡肽2抑制骶副交感節(jié)前神經(jīng)元活動的形態(tài)學與機能學研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：256076