【摘要】：真核細胞的內(nèi)吞途徑對大分子、液體、膜和膜蛋白的內(nèi)吞和運輸非常重要。內(nèi)吞途徑中最缺乏了解的一個通路是內(nèi)吞循環(huán)路徑。內(nèi)吞循環(huán)是將內(nèi)吞的大分子(通常是受體)和胞外液體從內(nèi)涵體送回到質(zhì)膜。在以前的研究發(fā)現(xiàn),小GTP蛋白RAB-10是調(diào)節(jié)內(nèi)吞循環(huán)的關(guān)鍵蛋白。RAB-10作用于RME-1的上游,調(diào)節(jié)腸細胞中的基底循環(huán)和中間神經(jīng)元中的突觸后蛋白循環(huán)運輸。EHBP-1/Ehbpl(Eps-15-homology domain Binding Protein-1)是RAB-10/Rab10的效應(yīng)因子,是一個保守的內(nèi)吞循環(huán)調(diào)控蛋白。ehbp-1突變有著和rab-1O突變一樣的內(nèi)涵體形態(tài)和貨物蛋白定位缺陷。EHBP-1含有三個結(jié)構(gòu)域：N端的類C2結(jié)構(gòu)域,中間的細胞骨架結(jié)合CH域(Calponin Homology Domain)和C端的螺旋-螺旋域�，F(xiàn)有研究證明EHBP-1是通過其C端的螺旋-螺旋域介導了與RAB-IO(GTP)的結(jié)合,但EHBP-1具體的分子調(diào)控機理尚不清楚,需開展結(jié)構(gòu)功能研究來解析其功能機制。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)EHBP-1通過N端的類C2結(jié)構(gòu)域與富含phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate (PI(4,5)P2)的膜結(jié)構(gòu)結(jié)合,并通過氨基酸定點突變確定了NT-C2中介導膜結(jié)合的關(guān)鍵氨基酸殘基。另外,EHBP-1中間的CH結(jié)構(gòu)域能夠與微絲結(jié)構(gòu)結(jié)合,值得注意的是,這種結(jié)合能夠被RAB-10(GTP)促進。在線蟲腸上皮細胞中,RAB-10/EHBP-1系統(tǒng)的任一成員缺失都會導致基底循環(huán)貨物蛋白滯留在內(nèi)涵體,并且這些內(nèi)涵體無法形成正常的管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。因此,我們提出這樣一個假設(shè)：EHBP-1將內(nèi)涵體膜結(jié)構(gòu)與微絲骨架連接起來以促進內(nèi)涵體形成管狀結(jié)構(gòu),RAB-10(GTP)促進了這一過程。我們的結(jié)果顯示,局部微絲網(wǎng)絡(luò)能夠穩(wěn)定參與循環(huán)貨物分類和運輸?shù)墓軤顑?nèi)涵體結(jié)構(gòu)域。
【圖文】：

華中科技大學博壬學位論文逡逑發(fā)現(xiàn)雜交后的線蟲腸細胞里的大泡累積表型沒有緩解，，缺失ＮＴ－Ｃ２域的ＥＨＢＰ－１不能逡逑挽救ｅＡ咕－／抑２５巧》表型（圖１Ｄ－Ｄ，）。逡逑Ａ邋４４０邐７扣邋邋邋８邋巧逡逑ａ－Ｕ＾ｋｃ邐Ｈ邋Ｉ邋９０１逡逑邐邋Ｄｉｅ邋邐逡逑￣Ｉ＾Ｈｉ逡逑氃田逡逑９ｈｂｐ．１（ｔｍ２Ｓ２３），邋■？ａａｉ逡逑ＥＨＢＰ－１，ＡＣ２，＾ＦＰ逡逑圖１巧失Ｎ端類Ｕ結(jié)構(gòu)巧或中間ＣＨ結(jié)構(gòu)域的ＥＨＢＰ－ｌ不能l捑認叱嫠鶼赴械拇簀義嚇荼硇汀＃ǎ粒牛齲攏校煨蛄星蚴疽饌跡味死啵茫步峁褂潁ǎ危裕茫玻�，恼E康膩義希茫齲ǎ茫幔歟穡錚睿椋鑠澹齲錚恚錚歟錚紓┙峁褂蠔停枚說穆菪菪峁褂潁ǎ茫茫�。蛋白质结构酉摼捔x希保峰義

本文編號：2530669