本文關鍵詞：青蒿琥酯與雙氫青蒿素試紙條的制備及油菜素內(nèi)酯基因工程抗體的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國農(nóng)業(yè)大學》 2015年

青蒿琥酯與雙氫青蒿素試紙條的制備及油菜素內(nèi)酯基因工程抗體的初步研究

何麗珊  

【摘要】：青蒿素類藥物綜合療法(Artemisinin-based combination therapy, ACT)是當今瘧疾治療的最有效手段。然而假冒、偽劣青蒿素類藥物的泛濫卻嚴重地影響著瘧疾的治療效果。目前,大多數(shù)對青蒿素類藥物進行檢測分析的方法均需要昂貴的檢測儀器和復雜的操作流程。還沒有一種基于免疫學技術、能夠用于青蒿素類抗瘧藥物質(zhì)量評價的現(xiàn)場快速診斷方法。油菜素內(nèi)酯是一種重要的植物激素,可促進細胞伸長和分裂、增強植株的抗逆性和提高作物的產(chǎn)量。國外已有將基因工程抗體應用于植物激素生理活性及其作用機理研究的報道,主要通過將激素的抗體基因轉(zhuǎn)入植物中,表達出該激素的抗體,實現(xiàn)激素的免疫調(diào)節(jié),從而達到對該激素進行研究的目的。采用基因工程抗體技術研究植物激素的生理功能及其作用機理是一個重要的有效手段,但目前還沒有關于油菜素內(nèi)酯的基因工程抗體被報道。 本研究分別制備了青蒿琥酯和油菜素內(nèi)酯的單克隆抗體,并以單克隆抗體為材料對免疫學技術(膠體金免疫檢測試紙條和基因工程抗體技術)進行了研究。主要結(jié)果如下： (1)制備了青蒿琥酯單克隆抗體3D82G7,抗體效價為3.2x104,其對青蒿素、雙氫青蒿素及蒿甲醚的交叉反應率分別為22%、70%和0.3%： (2)制備了油菜素內(nèi)酯單克隆抗體4D81C11,抗體效價為2～4×103,抗體為IgG1類,與IAA、GAS、ABA、ZR、iPA等其他激素均無交叉反應。用其建立了油菜素內(nèi)酯的icELISA, IC50為0.9ng/mL,檢測范圍在0.26ng/mL～3.83ng/mL。對所制備的油菜素內(nèi)酯單抗進行了十字花科材料(小白菜和油菜)的添加回收實驗,發(fā)現(xiàn)對提取樣本進行5-10倍稀釋可基本排除基質(zhì)背景干擾,添加回收率均在90-120%范圍內(nèi)； (3)以篩選到的青蒿琥酯單克隆抗體為基礎,制備了膠體金免疫檢測試紙條,該試紙條對青蒿琥酯、青蒿素和雙氫青蒿素的判別濃度分別為100-200ng/mL,2000-5000ng/mL和200-500ng/mLo用標準品奎寧、磷酸氯喹、磷酸伯氨喹、乙胺嘧啶、本芴醇、阿莫地喹、磷酸哌喹及磷酸咯萘啶分別制備的5000ng/mL檢測液均不能使試紙條上的檢測線抑制；不同溫度條件下貯存的試紙條的檢測靈敏度會隨貯存時間的延長而下降； (4)應用試紙條對青蒿素類抗瘧疾藥物及其原料藥的有效成分進行半定量檢測,所得結(jié)果與高效液相色譜法(HPLC)的一致性好； (5)對油菜素內(nèi)酯基因工程抗體進行了初步研究。從分泌油菜素內(nèi)酯單克隆抗體的雜交瘤細胞中提取了總RNA,反轉(zhuǎn)錄得到了cDNA。以cDNA為模板克隆了抗體的VH和VL基因。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：Q946
【目錄】：

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本文編號：216304