本文關(guān)鍵詞：cAMP調(diào)控小鼠卵母細(xì)胞第一次減數(shù)分裂和原始卵泡形成，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2015年

cAMP調(diào)控小鼠卵母細(xì)胞第一次減數(shù)分裂和原始卵泡形成

王怡婧  

【摘要】：在雌性哺乳動(dòng)物的生殖活動(dòng)中,卵母細(xì)胞與體細(xì)胞互作形成特殊的卵泡結(jié)構(gòu),并以卵泡為基本的生殖單位。不同于青春期之后才開始進(jìn)入減數(shù)分裂并持續(xù)完成減數(shù)分裂活動(dòng)的精母細(xì)胞,卵母細(xì)胞早在胚胎期形成原始卵泡前便進(jìn)入減數(shù)分裂,并且被阻滯在第一次減數(shù)分裂前期雙線期的核網(wǎng)期；與此同時(shí),卵母細(xì)胞被卵巢內(nèi)的體細(xì)胞包裹形成原始卵泡,建立原始卵泡庫(kù)。原始卵泡庫(kù)作為雌性哺乳動(dòng)物一生唯一的卵泡來源,其形成與數(shù)量對(duì)于雌性動(dòng)物的生殖能力至關(guān)重要。目前人類中發(fā)現(xiàn)的許多不孕癥以及雌性動(dòng)物繁殖率下降都與卵母細(xì)胞減數(shù)分裂異常、原始卵泡庫(kù)建立失常密切相關(guān),因此研究卵母細(xì)胞的減數(shù)分裂進(jìn)程及原始卵泡庫(kù)的建立具有重要意義。 第二信使環(huán)腺苷酸(cyclic AMP, cAMP)是目前已知的維持出生后卵母細(xì)胞長(zhǎng)期減數(shù)分裂前期-中期阻滯的關(guān)鍵因子,但cAMP是否參與調(diào)控原始卵泡形成前的卵母細(xì)胞早期減數(shù)分裂進(jìn)程及原始卵泡庫(kù)建立還不清楚,因此,針對(duì)這一系列的科學(xué)問題,我們開展了本論文的研究。 研究發(fā)現(xiàn),卵巢中的cAMP含量隨著減數(shù)分裂的進(jìn)程上升,在卵母細(xì)胞進(jìn)入雙線期時(shí)達(dá)到高峰,隨后維持在較高水平直至原始卵泡庫(kù)建立。隨后對(duì)腺苷酸環(huán)化酶(Adcy)的檢測(cè)表明Adcy2是卵巢這個(gè)時(shí)期主要表達(dá)的cAMP合成酶,表明卵巢具有合成cAMP的能力。同時(shí),免疫熒光定位的結(jié)果表明Adcy2主要表達(dá)于卵母細(xì)胞。 為了驗(yàn)證卵母細(xì)胞內(nèi)cAMP的功能,我們通過體外添加Adcy的廣譜性抑制劑MDL-12,330來培養(yǎng)16.5dpc的卵巢,發(fā)現(xiàn)加藥組中進(jìn)入雙線期和核網(wǎng)期的卵母細(xì)胞明顯少于對(duì)照組,說明cAMP調(diào)控了卵母細(xì)胞的減數(shù)分裂進(jìn)程。當(dāng)添加間隙連接的阻斷劑CBX培養(yǎng)卵巢時(shí),卵母細(xì)胞的減數(shù)分裂進(jìn)程不受影響,提示調(diào)控卵母細(xì)胞減數(shù)分裂進(jìn)程的cAMP是由卵母細(xì)胞自身合成的。隨后我們檢測(cè)了聯(lián)會(huì)復(fù)合體蛋白SYCP1的解離和降解情況,發(fā)現(xiàn)SYCP1可能是cAMP調(diào)控減數(shù)分裂進(jìn)程的靶蛋白。 為了探索減數(shù)分裂進(jìn)程與原始卵泡庫(kù)建立的關(guān)系,我們檢測(cè)了添加MDL-12,330培養(yǎng)的卵巢中與卵母細(xì)胞發(fā)育及卵泡生成相關(guān)基因的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)這些基因表現(xiàn)出不同程度的變化,提示加藥組中卵巢發(fā)育異常。隨后我們檢測(cè)了原始卵泡庫(kù)的建立情況,發(fā)現(xiàn)加藥組的原始卵泡數(shù)量明顯少于對(duì)照組,提示這些缺失cAMP、無法正常進(jìn)入核網(wǎng)期的卵母細(xì)胞不能正常地形成原始卵泡。最后,利用原位染色體核相觀察的方法,進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)在生理?xiàng)l件下,核網(wǎng)期的進(jìn)入對(duì)于原始卵泡的形成是非常重要的。 本論文的研究證明cAMP是卵母細(xì)胞第一次減數(shù)分裂及卵泡發(fā)生的重要調(diào)控因子。此前對(duì)這兩者的研究多集中在各自特異性表達(dá)蛋白的功能上,而對(duì)兩者關(guān)系的研究較少。本論文的研究不僅發(fā)現(xiàn)了cAMP對(duì)卵母細(xì)胞第一次減數(shù)分裂雙線期和核網(wǎng)期的調(diào)控作用、對(duì)原始卵泡庫(kù)建立的作用,同時(shí)還發(fā)現(xiàn)了卵母細(xì)胞核網(wǎng)期阻滯與原始卵泡形成之間的關(guān)系,本論文對(duì)于闡明卵母細(xì)胞第一次減數(shù)分裂的內(nèi)在調(diào)控機(jī)制和原始卵泡庫(kù)建立的分子機(jī)理具有重要的科學(xué)意義。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：Q954.43
【目錄】：

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