本文關(guān)鍵詞：去泛素化酶USP13酶活性研究及2D-DIGE在USP13調(diào)控的蛋白分子篩選中的應(yīng)用　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：泛素特異性蛋白酶USP13是人類基因組編碼的泛素特異性蛋白酶家族成員之一,基因位于3號染色體長臂3q26.2 q26.3區(qū)域,基因編碼區(qū)由2,592個堿基組成,編碼863個氨基酸。USP13是泛素特異性蛋白酶USP5的直系同源物,二者的序列具有大約80%的相似性。蛋白結(jié)構(gòu)中包括四個UBP鋅指結(jié)構(gòu)域和一個USP結(jié)構(gòu)域。而且UBP結(jié)構(gòu)域中具有催化位點(diǎn)、鋅指(Zn F)結(jié)構(gòu)域,和兩個泛素相關(guān)的UBA結(jié)構(gòu)域,但二者的去泛素化酶活性和底物特異性均不相同。為了進(jìn)一步明確USP13的去泛素化酶活性,本研究建立了三種去泛素化酶活性檢測體系,利用三種不同類型的模型底物來驗(yàn)證USP13的去泛素化酶活性。除了了解USP13的活性,闡明其底物特異性及其調(diào)控的蛋白分子對于理解其生物學(xué)功能也至關(guān)重要。但是對于篩選去泛素化酶特異性底物的方法研究還相對匱乏。雙向熒光差異凝膠電泳(two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis,2D-DIGE)是經(jīng)典的查找差異蛋白的方法,該技術(shù)可檢測到樣品間小于10%的蛋白表達(dá)差異,具有統(tǒng)計學(xué)意義,已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究領(lǐng)域。本研究首次采用2D-DIGE來篩選USP13調(diào)控的蛋白分子,研究其在去泛素化酶的特異性底物和調(diào)控蛋白分子篩選中的可行性。第一部分:泛素特異性蛋白酶USP13去泛素化酶活性的研究目的:USP13含有兩個短且高度保守的片段即賴氨酸結(jié)構(gòu)域(Cys box)和組氨酸結(jié)構(gòu)域(His box),序列中含有起催化作用的三聯(lián)殘基,即Cys,His和Asp/Asn高度保守的結(jié)構(gòu)域,理論上能將泛素分子從泛素化底物蛋白上移除。然而現(xiàn)有的研究提示USP13的去泛素化酶活性仍存在爭議,需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。為了進(jìn)一步明確USP13的去泛素化酶活性,本研究建立了三種去泛素化酶活性檢測體系,利用三種不同類型的模型底物(模型底物Ub-Met-β-gal和GST-Ub52,以及熒光底物Ub-AMC)來驗(yàn)證USP13的去泛素化酶活性,同時構(gòu)建了四個USP13的snp錯義突變,檢測其對于usp13活性的影響。方法:1構(gòu)建pgex-usp13(c345s)和pac-t7-usp13(c345s)突變質(zhì)粒:采用本科室保存的pgex-usp13(wt)質(zhì)粒為模板,定點(diǎn)突變c345s位點(diǎn),構(gòu)建人的pgex-usp13(c345s)突變質(zhì)粒。采用限制性內(nèi)切酶bamhi酶切pac-t7載體質(zhì)粒,將已構(gòu)建成功的pgex-usp13(c345s)質(zhì)粒用sali和noti酶切后連接到pac-t7載體質(zhì)粒上構(gòu)建pac-t7-usp13(c345s)突變質(zhì)粒。2gst-usp13融合蛋白表達(dá)與精制:將pgex-usp13質(zhì)粒轉(zhuǎn)化bl21感受態(tài)細(xì)胞,低溫(15℃)培養(yǎng)40小時,誘導(dǎo)gst-usp13融合蛋白表達(dá),采用gsh-sepharoseresin精制gst-usp13融合蛋白。3構(gòu)建pgex-usp13(a107v),pgex-usp13(r217q),pgex-usp13(g465s)和pgex-usp13(e669g)突變質(zhì)粒:采用本室保存的pgex-usp13(wt)質(zhì)粒為模板,定點(diǎn)突變a107v:320ct,r217q:650ga,g465s:1393ct和e669g:2006tc位點(diǎn),構(gòu)建人的pgex-usp13(a107v),pgex-usp13(r217q),pgex-usp13(g465s)和pgex-usp13(e669g)突變質(zhì)粒。4去泛素化酶活性檢測:采用ub-met-β-gal、gst-ub52模型底物和ub-amc熒光底物檢測體系檢測usp13的去泛素化酶活性。采用ub-met-β-gal模型底物活性檢測系統(tǒng)檢測usp13(a107v、r217q、g465s、e669g)四個突變體的去泛素化酶活性變化。結(jié)果:1pgex-usp13(c345s)和pac-t7-usp13(c345s)質(zhì)粒的構(gòu)建:pcr產(chǎn)物用sali和noti限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切鑒定,結(jié)果顯示,pgex-usp13(c345s)和pgex-usp13(wt)一樣,均能被正確切開,且目的片段和預(yù)期大小一致。測序結(jié)果證實(shí)pgex-6p-1和pac-t7中成功插入了usp13(c345s)序列,證明定點(diǎn)突變和換載成功。2gst-usp13融合蛋白的精制:pgex-usp13表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)15℃誘導(dǎo)40小時后,gst-usp13部分溶解,大部分存在于上清中,用gsh-sefinoseresin純化gst融合蛋白,再經(jīng)洗脫液洗脫,精制出gst-usp13融合蛋白。3usp13去泛素化酶活性檢測:采用ub-met-β-gal、gst-ub52模型底物和ub-amc熒光底物檢測體系檢測usp13的去泛素化酶活性,雖然三個體系中均能檢測到usp13的表達(dá),但都沒有檢測到usp13的去泛素化酶活性。4pgex-usp13(a107v),pgex-usp13(r217q),pgex-usp13(g465s)和pgex-usp13(e669g)突變質(zhì)粒的構(gòu)建及去泛素化酶活性檢測:pcr產(chǎn)物用sali和noti限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切鑒定,結(jié)果顯示,pgex-usp13(a107v),pgex-usp13(r217q),pgex-usp13(g465s)以及pgex-usp13(e669g)均和pgex-usp13(wt)一樣,均能被正確切開,且目的片段和預(yù)期大小一致測序結(jié)果證實(shí)pgex-6p-17中成功插入了usp13(a107v)、usp13(r217q)、usp13(g465s)和usp13(e669g)序列,證明定點(diǎn)突變和換載體均成功。但用ub-met-β-gal模型底物活性檢測系統(tǒng)均未檢測usp13(a107v、r217q、g465s、e669g)四個突變?nèi)シ核鼗富钚宰兓�。結(jié)論:1采用ub-met-β-gal、gst-ub52模型底物和ub-amc熒光底物檢測體系檢測了usp13的去泛素化酶活性,但均未檢測到,提示這三種方法不適用于檢測usp13的體外活性。2成功構(gòu)建了usp13失活突變體usp13(c345s)和四個錯義突變體:usp13(a107v),usp13(r217q),usp13(g465s)和usp13(e669g),并采用ub-met-β-gal模型底物活性檢測系統(tǒng)檢測了其去泛素化酶活性變化,四個突變體活性與野生型usp13活性均未檢測到。第二部分:應(yīng)用雙向熒光差異凝膠電泳(2d-dige)技術(shù)篩選usp13調(diào)控的蛋白分子目的:不同物種間泛素化蛋白的類型和長度多種多樣,每種去泛素化酶可能有不同的底物特異性,部分去泛素化酶的這種底物特異性不能用模型底物測定,第一部分的研究證實(shí),ub-met-β-gal、gst-ub52模型底物和ub-amc熒光底物檢測體系均檢測不到usp13的去泛素化酶活性,因此尋找usp13的特異性底物及其調(diào)控蛋白成為研究其去泛素化酶功能的關(guān)鍵。雙向熒光差異凝膠電泳(2d-dige)是經(jīng)典的查找差異蛋白的方法,該技術(shù)可檢測到樣品間小于10%的蛋白表達(dá)差異,具有統(tǒng)計學(xué)意義,但該技術(shù)是否適用于篩選usp13調(diào)控的蛋白分子則需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。因此本研究將2d-dige應(yīng)用于篩選確定usp13調(diào)控的蛋白分子,研究其在去泛素化酶的特異性底物和調(diào)控蛋白分子篩選中的可行性。方法:1構(gòu)建pegfp-usp13(wt)和pegfp-usp13(c345s)質(zhì)粒:采用限制性內(nèi)切酶salⅠ酶切載體質(zhì)粒pegfp-c1,sali和noti酶切pgex-usp13(wt)和pgex-usp13(c345s)質(zhì)粒,用5′filledin的方法分別進(jìn)行平末端化后進(jìn)行連接。利用限制性內(nèi)切酶bamhⅠ酶切進(jìn)行正反鑒定,酶切正向連接的即為構(gòu)建成功的pegfp-usp13(wt)和pegfp-usp13(c345s)質(zhì)粒。2細(xì)胞轉(zhuǎn)染:將重組pegfp-c1、pegfp-usp13(wt)和pegfp-usp13(c345s)質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染hek293t細(xì)胞,從而使細(xì)胞系中分別過表達(dá)gfp、usp13(wt)和usp13(c345s)蛋白。3蛋白樣品制備和純化:pegfp-c1、pegfp-usp13(wt)和pegfp-usp13(c345s)質(zhì)粒分別成功轉(zhuǎn)染hek293t細(xì)胞,收集細(xì)胞,提取總蛋白,用苯酚抽提法進(jìn)行純化后定量,得到進(jìn)行2d-dige的蛋白樣品。4雙向熒光差異凝膠電泳(2d-dige):將純化后的蛋白質(zhì)樣品用不同的熒光染料標(biāo)記,經(jīng)2d-dige進(jìn)行蛋白質(zhì)分離,經(jīng)typhoon9410掃描后,獲得分辨率高、蛋白點(diǎn)分布趨勢一致的蛋白表達(dá)譜。應(yīng)用decyderdifferentialanalysissoftware對其進(jìn)行分析,經(jīng)過組間配比t檢驗(yàn)分析,得到具有明顯差異的蛋白點(diǎn),用ettanspotpicker挖點(diǎn)進(jìn)行后續(xù)質(zhì)譜分析。結(jié)果:1pegfp-usp13(wt)和pegfp-usp13(c345s)質(zhì)粒的構(gòu)建:經(jīng)平末端化后連接的質(zhì)粒用bamhⅠ限制性內(nèi)切酶進(jìn)行正反鑒定,正向插入的切出1900bp和5500bp左右的兩條帶,1%瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示其中一條接近2000bp,另一條約為5500bp,與預(yù)期大小一致。測序結(jié)果也證實(shí),pegfp-c1質(zhì)粒中插入的2700bp左右片段為人類usp13的編碼區(qū),與genebank參考序列相一致。2pegfp-c1、pegfp-usp13(wt)和pegfp-usp13(c345s)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染hek293t細(xì)胞:轉(zhuǎn)染細(xì)胞24小時后熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染情況。結(jié)果顯示:pegfp-c1、pegfp-usp13(wt)和pegfp-usp13(c345s)均成功轉(zhuǎn)染至hek293t細(xì)胞中,三種轉(zhuǎn)染細(xì)胞均表達(dá)了綠色熒光蛋白gfp。3蛋白樣品制備與純化:苯酚抽提純化的總蛋白。用10%sds-page電泳驗(yàn)證純化前后總蛋白量沒有明顯變化。用抗gfp抗體檢測gfp、gfp-usp13以及gfp-usp13(c345s)蛋白均有表達(dá)。4gfp-usp13過表達(dá)與空白質(zhì)粒gfp對比檢測差異蛋白的表達(dá):對照組(gfp)和實(shí)驗(yàn)組(gfp-usp13)樣品各50μg分別加入0.5μlcy3-(綠色)和0.5μlcy5-(紅色)來標(biāo)記蛋白,然后通過雙向熒光差異凝膠電泳分離蛋白點(diǎn),經(jīng)typhoon9410掃描,decyderdifferentialanalysissoftware分析,經(jīng)過組間配比t檢驗(yàn)分析,共得到11個具有明顯差異且有相同變化的蛋白點(diǎn)。用ettanspotpicker挖點(diǎn)進(jìn)行后續(xù)質(zhì)譜分析。5gfp-usp13與gfp-usp13(c345s)過表達(dá)對比檢測差異蛋白的表達(dá):對照組(gfp-usp13c345s)和實(shí)驗(yàn)組(gfp-usp13)樣品各50μg分別加入0.5μlcy3-(綠色)和0.5μlcy5-(紅色)來標(biāo)記蛋白,然后通過雙向熒光差異凝膠電泳分離蛋白點(diǎn),經(jīng)typhoon9410掃描,decyderdifferentialanalysissoftware分析,經(jīng)過組間配對t檢驗(yàn)分析,共得到3個具有明顯差異且有相同變化的蛋白點(diǎn)。用ettanspotpicker挖點(diǎn)進(jìn)行后續(xù)質(zhì)譜分析。結(jié)論:12d-dige技術(shù)適用于查找去泛素化酶相關(guān)蛋白的研究,靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確。2應(yīng)用2d-dige技術(shù)對不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的hek293t細(xì)胞蛋白進(jìn)行分離,結(jié)果顯示與空白質(zhì)粒對照組比較,usp13高表達(dá)的細(xì)胞中蛋白質(zhì)表達(dá)具有差異性,且部分差異蛋白可能與usp13的去泛素化酶活性相關(guān),應(yīng)進(jìn)一步研究。第三部分:應(yīng)用lc-ms/ms技術(shù)聯(lián)合qrt-pcr及westernblot鑒定與驗(yàn)證差異蛋白目的:應(yīng)用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(lc-ms/ms)技術(shù)對2d-dige分離出的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行鑒定,采用熒光定量pcr(qrt-pcr)和westernblot方法來進(jìn)一步驗(yàn)證經(jīng)質(zhì)譜分析得到的差異蛋白質(zhì),分別驗(yàn)證蛋白質(zhì)的mrna水平和蛋白表達(dá)水平在不同實(shí)驗(yàn)組間是否存在差異,從而進(jìn)一步驗(yàn)證所得蛋白質(zhì)是否與usp13的過表達(dá)有關(guān),為進(jìn)一步確定usp13的特異性底物以及調(diào)控的蛋白分子提供依據(jù)。方法:1質(zhì)譜鑒定及數(shù)據(jù)庫檢索:應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用儀ltqxl對樣品進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。應(yīng)用bioworks3.3.1軟件(thermofisherscientific)的sequest運(yùn)算方法進(jìn)行數(shù)據(jù)庫檢索。2熒光定量pcr檢測差異蛋白的mrna水平:pegfp-c1、pegfp-usp13(wt)和pegfp-usp13(c345s)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染hek293t細(xì)胞后,提取細(xì)胞中的總rna,用熒光定量pcr檢測各個差異蛋白在不同處理組的mrna水平。3westernblot檢測差異蛋白的表達(dá)水平:pegfp-c1、pegfp-usp13(wt)和pegfp-usp13(c345s)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染hek293t細(xì)胞后,提取細(xì)胞中的總蛋白質(zhì),用westernblot檢測差異蛋白在不同處理組的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1質(zhì)譜鑒定及數(shù)據(jù)庫檢索:11個差異表達(dá)蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定,經(jīng)質(zhì)譜分析及數(shù)據(jù)庫檢索,成功鑒定出7種蛋白,usp13過表達(dá)后,表達(dá)上調(diào)的有4種,分別是細(xì)胞骨架蛋白(vinculin)、甲拌磷寡肽酶(thop1)、聚腺苷酸化裂解因子3(cpsf3)和甲基化蛋白50(wdr77);表達(dá)下調(diào)的有3種,分別是腺苷酸基琥珀酸合成酶(adss),膜聯(lián)蛋白(annexin)和磷酸甘油酸變位酶(pgam1)。其中細(xì)胞骨架蛋白(vinculin)在usp13過表達(dá)與gfp及usp13c345s過表達(dá)比較時均有上調(diào),提示vinculin的表達(dá)上調(diào)可能與usp13的去泛素化酶活性有關(guān)。2熒光定量pcr檢測差異蛋白的mrna水平:轉(zhuǎn)染pegfp-c1組和轉(zhuǎn)染pegfp-usp13(c345s)組細(xì)胞mrna分別與轉(zhuǎn)染pegfp-usp13(wt)組細(xì)胞的mrna之間進(jìn)行比較,各個蛋白mrna表達(dá)水平均沒有明顯差別。說明usp13過表達(dá)不影響各個差異蛋白的mrna水平。3westernblot檢測差異蛋白的表達(dá)水平:2d-dige結(jié)果顯示,vinculin在USP13過表達(dá)時上調(diào),而在USP13(C345S)過表達(dá)時蛋白水平不變。為了進(jìn)一步驗(yàn)證,應(yīng)用Western blot技術(shù),對分別轉(zhuǎn)染pEGFPC1、pEGFP-USP13(WT)和p EGFP-USP13(C345S)質(zhì)粒的HEK293T細(xì)胞中vinculin蛋白表達(dá)進(jìn)行分析,結(jié)果顯示:vinculin蛋白在USP13(WT)組表達(dá)上調(diào),與GFP組和USP13(C345S)組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:1應(yīng)用質(zhì)譜分析成功鑒定出7種差異蛋白,可能與USP13過表達(dá)相關(guān)。為進(jìn)一步研究USP13以及其相關(guān)蛋白的生物學(xué)功能提供了新的線索和方向。2通過Western blotting進(jìn)一步驗(yàn)證了vinculin蛋白在USP13過表達(dá)時上調(diào),但在USP13 C345S過表達(dá)時無變化,提示vinculin可能是USP13的特異性底物,但還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：Q75

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1 王慧;去泛素化酶CYLD通過下調(diào)Nrf2調(diào)節(jié)心臟重構(gòu)和功能障礙[D];山東大學(xué);2015年

2 周紫章;Usp7/HAUSP通過去泛素化Ci/Gli調(diào)控Hh信號通路[D];南京大學(xué);2015年

3 郭曰帥;精子發(fā)生相關(guān)泛素化修飾的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

4 張還添;PRMT5的轉(zhuǎn)錄調(diào)控及其泛素化-蛋白酶體降解機(jī)制研究[D];暨南大學(xué);2015年

5 謝鑫;稻瘟菌效應(yīng)蛋白MoNLE1的功能分析和水稻泛素化蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 王建敏;去泛素化酶USP13酶活性研究及2D-DIGE在USP13調(diào)控的蛋白分子篩選中的應(yīng)用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

7 楊q，

本文編號：1319607