本文關(guān)鍵詞：OGT1對穩(wěn)定NSL3蛋白并調(diào)控組蛋白H4乙�；揎椬饔玫难芯�

  更多相關(guān)文章： 組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)移酶 NSL復(fù)合物 H4K16乙�；� O-GlcNAc糖基化 轉(zhuǎn)錄后修飾

【摘要】：含有hMOF(human MOF)的組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)移酶(HAT)NSL(非特異性致死)復(fù)合物可以特異性的乙�；M蛋白H4(N端)的第5,8和16位賴氨酸位點(H4K5,H4K8和H4K16)。我們之前從人細胞中純化和鑒定了含有9個亞基的NSL復(fù)合物,其中包括O-連接的β-N-乙酰葡糖胺(O-Glc NAc)轉(zhuǎn)移酶(同種型1)(OGT1)。OGT是細胞中唯一能夠?qū)-GlcNAc基團催化添加至底物蛋白的絲氨酸/蘇氨酸殘基的O-Glc NAc轉(zhuǎn)移酶,參與調(diào)控多種細胞進程。然而,OGT1作為NSL復(fù)合物的亞基組份與其他NSL復(fù)合物亞基間的相互作用關(guān)系以及其O-GlcNAc轉(zhuǎn)移酶活性是否對NSL復(fù)合物的HAT酶活性有調(diào)控作用卻一無所知。在本論文中,我們利用生物化學(xué)和分子生物的學(xué)實驗手段,證實了OGT1介導(dǎo)的O-GlcNAc修飾可以穩(wěn)定NSL復(fù)合物的特異亞基NSL3,進而調(diào)控NSL復(fù)合物對組蛋白H4 N末端K5,K8和K16位點的乙酰基化催化活性。首先,我們通過siRNA干擾或過表達實驗證明了OGT1對全細胞H4K16,H4K5和H4K8的乙酰化水平的影響。其次,利用共轉(zhuǎn)染/免疫共沉淀實驗結(jié)合體外O-GlcNAc轉(zhuǎn)移酶活性檢測實驗發(fā)現(xiàn)了OGT1不僅能夠特異性結(jié)合NSL3,還可以通過O-GlcNAc修飾NSL3來維持其蛋白水平的穩(wěn)定。麥胚凝集素(WGA)是一種能夠特異性結(jié)合O-GlcNAc殘基的樹脂,常用于檢測內(nèi)源蛋白的O-GlcNAc修飾。我們用麥胚凝集素親和純化實驗進一步證明了NSL3在細胞中確實可以被O-GlcNAc修飾。最后,我們通過比較不再具有O-GlcNAc轉(zhuǎn)移酶活性的OGT1突變體OGT1C964A與野生型OGT1對NSL3的影響,證實了野生型OGT1介導(dǎo)的O-GlcNAc修飾通過穩(wěn)定NSL3來調(diào)控NSL復(fù)合物對細胞組蛋白H4K5,K8和K16的乙�；呋钚浴１菊撐牡难芯拷Y(jié)果不僅揭示了OGT1對NSL復(fù)合物的調(diào)控機制,同時為深入研究NSL復(fù)合物在細胞中的生物學(xué)功能提供了理論和實驗基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：Q75

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本文編號：1300243