本文關(guān)鍵詞：OGT1對(duì)穩(wěn)定NSL3蛋白并調(diào)控組蛋白H4乙酰基化修飾作用的研究

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【摘要】：含有hMOF(human MOF)的組蛋白乙�；D(zhuǎn)移酶(HAT)NSL(非特異性致死)復(fù)合物可以特異性的乙�；M蛋白H4(N端)的第5,8和16位賴氨酸位點(diǎn)(H4K5,H4K8和H4K16)。我們之前從人細(xì)胞中純化和鑒定了含有9個(gè)亞基的NSL復(fù)合物,其中包括O-連接的β-N-乙酰葡糖胺(O-Glc NAc)轉(zhuǎn)移酶(同種型1)(OGT1)。OGT是細(xì)胞中唯一能夠?qū)-GlcNAc基團(tuán)催化添加至底物蛋白的絲氨酸/蘇氨酸殘基的O-Glc NAc轉(zhuǎn)移酶,參與調(diào)控多種細(xì)胞進(jìn)程。然而,OGT1作為NSL復(fù)合物的亞基組份與其他NSL復(fù)合物亞基間的相互作用關(guān)系以及其O-GlcNAc轉(zhuǎn)移酶活性是否對(duì)NSL復(fù)合物的HAT酶活性有調(diào)控作用卻一無所知。在本論文中,我們利用生物化學(xué)和分子生物的學(xué)實(shí)驗(yàn)手段,證實(shí)了OGT1介導(dǎo)的O-GlcNAc修飾可以穩(wěn)定NSL復(fù)合物的特異亞基NSL3,進(jìn)而調(diào)控NSL復(fù)合物對(duì)組蛋白H4 N末端K5,K8和K16位點(diǎn)的乙�；呋钚浴Ｊ紫�,我們通過siRNA干擾或過表達(dá)實(shí)驗(yàn)證明了OGT1對(duì)全細(xì)胞H4K16,H4K5和H4K8的乙�；降挠绊�。其次,利用共轉(zhuǎn)染/免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)合體外O-GlcNAc轉(zhuǎn)移酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了OGT1不僅能夠特異性結(jié)合NSL3,還可以通過O-GlcNAc修飾NSL3來維持其蛋白水平的穩(wěn)定。麥胚凝集素(WGA)是一種能夠特異性結(jié)合O-GlcNAc殘基的樹脂,常用于檢測(cè)內(nèi)源蛋白的O-GlcNAc修飾。我們用麥胚凝集素親和純化實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明了NSL3在細(xì)胞中確實(shí)可以被O-GlcNAc修飾。最后,我們通過比較不再具有O-GlcNAc轉(zhuǎn)移酶活性的OGT1突變體OGT1C964A與野生型OGT1對(duì)NSL3的影響,證實(shí)了野生型OGT1介導(dǎo)的O-GlcNAc修飾通過穩(wěn)定NSL3來調(diào)控NSL復(fù)合物對(duì)細(xì)胞組蛋白H4K5,K8和K16的乙�；呋钚�。本論文的研究結(jié)果不僅揭示了OGT1對(duì)NSL復(fù)合物的調(diào)控機(jī)制,同時(shí)為深入研究NSL復(fù)合物在細(xì)胞中的生物學(xué)功能提供了理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q75

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1 宋麗娜;王京蘭;錢小紅;蔡耘;;O-GlcNAc修飾蛋白質(zhì)的生理功能和研究方法[J];生命的化學(xué);2007年01期

2 劉華東;陳永湘;趙玉芬;李艷梅;;O-GlcNAc修飾研究進(jìn)展[J];中國(guó)科技論文在線;2007年08期

3 叢琦;顧玉超;于文功;;蛋白質(zhì)O-GlcNAc修飾的檢測(cè)技術(shù)[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2012年06期

4 覃培斌;董潤(rùn)安;彭博;應(yīng)萬濤;錢小紅;;O-GlcNAc糖蛋白/糖肽的分離富集方法[J];生命的化學(xué);2013年02期

5 王s，

本文編號(hào)：1300243