本文關(guān)鍵詞：乙型流感病毒Vero細(xì)胞冷適應(yīng)株遺傳重配研究

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【摘要】：流行性感冒病毒,簡(jiǎn)稱流感病毒,屬正粘病毒科(Orthomyxo viridae),其為有包膜的單負(fù)鏈RNA病毒,其基因組分為8個(gè)節(jié)段。根據(jù)流感病毒核蛋白(NP)和基質(zhì)蛋白(M)抗原性的差異可劃分為甲(A)、乙(B)和丙(C)三型。乙型流行性感冒病毒雖然沒有像甲型流感病毒一樣引起過人群內(nèi)的大流行,但是能通過抗原漂移,產(chǎn)生新的病毒,每年能引起世界范圍內(nèi)的季節(jié)性流行,嚴(yán)重威脅人類的健康和生命安全。因此,季節(jié)性流感疫苗由A (H1N1)、A (H3N2)和乙型病毒共同組成生產(chǎn)毒株。目前已上市的季節(jié)性流感疫苗主要有三類：裂解疫苗、亞單位疫苗和減毒活疫苗。流感減毒活疫苗采取滴鼻方式進(jìn)行接種,模擬病毒自然感染的途徑在呼吸道粘膜誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫應(yīng)答,免疫保護(hù)性好。目前上市的流感減毒活疫苗,都以雞胚作為基質(zhì)生產(chǎn)。使用雞胚生產(chǎn)活疫苗,由于缺乏病毒滅活的手段,存在傳播雞源病原體的風(fēng)險(xiǎn)。此外,雞胚較長(zhǎng)的供應(yīng)周期制約著疫苗生產(chǎn),尤其是突然爆發(fā)高致病性流感時(shí),疫苗生產(chǎn)難于滿足應(yīng)對(duì)流感大流行的需要。Vero細(xì)胞是WHO推薦用于生產(chǎn)人用生物制品的細(xì)胞基質(zhì),可采用發(fā)酵罐大規(guī)模培養(yǎng)病毒。相對(duì)于雞胚培養(yǎng),細(xì)胞培養(yǎng)病毒抗原變異小,更接近原始分離病毒。但Vero細(xì)胞不是培養(yǎng)流感病毒最敏感的基質(zhì),不同毒株間產(chǎn)毒量差異較大,甚或不能生長(zhǎng)復(fù)制。目前全球尚無(wú)以Vero細(xì)胞為基質(zhì)生產(chǎn)的季節(jié)性流感病毒減毒活疫苗面市。我們經(jīng)過10多年的研究,在國(guó)際上率先成功選育出一株乙型流感病毒Vero細(xì)胞冷適應(yīng)株B/Yunnan/23/2011 Vca (BVca)。本研究以BVca作為母本毒株,與WHO推薦的乙型流感病毒流行株B/Brisbane/60/2008 NYMC BX-35 (BX-35)遺傳重配,以解決Vero細(xì)胞乙型流感病毒減毒疫苗生產(chǎn)毒株制備的瓶頸技術(shù)。試驗(yàn)研究中,使用Vero細(xì)胞冷適應(yīng)株BVca與流行株BX-35共感染Vero細(xì)胞,在重配病毒中加入抗BVca血清中和帶有母本株表面抗原HA和NA的子代病毒,經(jīng)蝕斑純化獲得帶有BX-35的表面抗原的乙型流感病毒Vero細(xì)胞冷適應(yīng)株BX-35Vca。該病毒在Vero細(xì)胞上25℃培養(yǎng),感染性滴度不低于1×107TCID50/ml,具有溫度敏感性(ts)、冷適應(yīng)性(ca)和減毒(att)表型。在Vero細(xì)胞連續(xù)傳代20代,HA、NA氨基酸沒有發(fā)生變異。制備的減毒活疫苗滴鼻免疫小鼠能夠抵抗致死劑量的同系乙型流感病毒的感染。本研究首次證實(shí)BVca可作為母本毒株,采用遺傳重配技術(shù)制備Vero細(xì)胞乙型流感病毒減毒疫苗生產(chǎn)用毒株。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R373

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