本論文以核酸適配體為識(shí)別元件,以小檗堿為熒光探針,引入核酸工具酶、納米材料、雜交鏈反應(yīng)等信號(hào)放大技術(shù)及分子邏輯門技術(shù),構(gòu)建了免標(biāo)記的生物傳感體系并將其應(yīng)用于環(huán)境中多種物質(zhì)的分析檢測(cè),其主要研究?jī)?nèi)容如下:1.概述了核酸適配體的特征、篩選(SELEX)及其傳感技術(shù),并著重介紹了近年來基于信號(hào)放大策略的適配體傳感體系檢測(cè)技術(shù)及研究進(jìn)展,在此基礎(chǔ)上提出本論文的立題背景,研究?jī)?nèi)容和創(chuàng)新之處。2.以小檗堿為熒光探針構(gòu)建了基于酶輔助放大策略免標(biāo)記的核酸適配體熒光傳感體系并用于河豚毒素的分析檢測(cè),河豚毒素(TTX)可與其核酸適配體特異性結(jié)合,并引起其構(gòu)型由單鏈轉(zhuǎn)換成頸環(huán)結(jié)構(gòu),基于小檗堿與單鏈寡核苷酸和頸環(huán)結(jié)構(gòu)之間的作用差異可引起體系熒光強(qiáng)度的變化,加入核酸外切酶Ⅰ后,由于核酸外切酶Ⅰ可特異性剪切單鏈DNA,明顯減小了檢測(cè)體系的背景信號(hào)從而實(shí)現(xiàn)高選擇性、高靈敏檢測(cè)河豚毒素,在最佳的實(shí)驗(yàn)條件下,得到河豚毒素的檢測(cè)線性范圍為0.03nM⁶000 nM,方法的檢出限為11.0 pM,遠(yuǎn)低于目前已報(bào)道的方法。與此同時(shí)我們對(duì)酶輔助方法與免酶方法進(jìn)行了比較,在免酶體系中,小檗堿/TTX-適配體...

【文章頁數(shù)】：191 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖1.1核酸適配體篩選示意圖[22]

基于信號(hào)放大策略的免標(biāo)記多功能核酸適配體傳感體系構(gòu)筑及其分析應(yīng)用4定的分離技術(shù)，分離出可以與靶分子特異性結(jié)合的核酸適配體，通過PCR擴(kuò)增后分離，對(duì)得到的序列再次篩選，并使其以指數(shù)形式富集，經(jīng)過9-11輪的篩選富集，獲得與靶標(biāo)分子特異性結(jié)合的核酸適配體[22]，見圖1.1。圖1.1....

圖1.2單克隆表面顯示-SELEX技術(shù)的工作原理[24]

第一章緒論5圖1.2單克隆表面顯示-SELEX技術(shù)的工作原理[24]。Fig.1.2MonoclonalsurfaceshowingSELEXtechnology[24].首先，將具有正向引物功能化珠子(F-Primer珠子)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)稀釋的ssDNA文庫(kù)分隔為單分子水平的油包水小....

圖1.3核酸適配體與目標(biāo)物的結(jié)合模式：(A)包埋型；(B)單位點(diǎn)結(jié)合型；(C)雙位點(diǎn)結(jié)合型；(D)

一對(duì)適配體，一個(gè)捕獲靶標(biāo)的探針和另一個(gè)指示信號(hào)功能的探針夾在中間，捕獲探針通常固定在固體支持物(例如電極，玻璃片，納米材料)的表面上，而信號(hào)探針通常與信號(hào)傳導(dǎo)部分(例如熒光團(tuán)，酶或納米顆粒)結(jié)合，一般來說，捕獲探針和信號(hào)探針具有不同的核酸序列，如果靶標(biāo)(例如二聚體)含有兩個(gè)....

圖1.4采用末端帶有MB標(biāo)記的適配體修飾金電極和互補(bǔ)DNA(cDNA)構(gòu)建

第一章緒論9圖1.4采用末端帶有MB標(biāo)記的適配體修飾金電極和互補(bǔ)DNA(cDNA)構(gòu)建檢測(cè)AFB1的電化學(xué)適配體傳感器示意圖[44]。Fig.1.4SchematicdiagramoftheelectrochemicalaptasensorforAFB1detectionbyus....

本文編號(hào)：3909539