米糠營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,蛋白質(zhì)的含量約為14%左右。米糠能預(yù)防心血管病、腫瘤等疾病,米糠中的功能性因子,對(duì)降血壓以及降血脂也有適當(dāng)?shù)男ЧＳ捎诿卓焚Y源利用率低,造成嚴(yán)重的資源浪費(fèi),尤其是米糠中蛋白質(zhì)的浪費(fèi)。米糠中蛋白質(zhì)根據(jù)溶解性分為四種蛋白：清蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白和球蛋白。米糠蛋白因其均衡的氨基酸組成、疏水性氨基酸和芳香族氨基酸比例高、生物利用率高和抗?fàn)I養(yǎng)因子低等優(yōu)點(diǎn)成為獲得生物活性肽很好的蛋白質(zhì)資源,米糠蛋白低分子的肽段具有更高的降壓、抗氧化等功效。本研究以米糠蛋白為原料,采用限制性酶解技術(shù),制備高活性ACE抑制肽,基于經(jīng)典的米氏方程理論,應(yīng)用數(shù)學(xué)推導(dǎo)結(jié)合試驗(yàn)研究的方法,利用Origin 8.0軟件,擬合出水解速率動(dòng)力學(xué)模型及水解度-水解時(shí)間的動(dòng)力學(xué)模型。采用中試多功能組合超濾設(shè)備進(jìn)行二次超濾脫鹽分級(jí),通過單柱色譜柱分離操作實(shí)驗(yàn)確定模擬移動(dòng)床色譜分離技術(shù)參數(shù)并進(jìn)行條件優(yōu)化,獲得工業(yè)化生產(chǎn)高純度、高收率的ACE抑制肽的分離技術(shù)。進(jìn)一步進(jìn)行凝膠層析、高效液相色譜分離,得到純化的組分利用Edman N-端測(cè)序法測(cè)定氨基酸序列；并對(duì)模擬移動(dòng)床分離的ACE抑制肽進(jìn)行體外、體內(nèi)活性檢測(cè)。本研究以米糠分... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：172 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 米糠及其產(chǎn)品的應(yīng)用情況
        1.1.1 米糠的利用
        1.1.2 米糠蛋白應(yīng)用情況概述
        1.1.3 米糠蛋白肽應(yīng)用情況
    1.2 高血壓和ACE概述
        1.2.1 高血壓病的發(fā)展概述
        1.2.2 ACE與血壓調(diào)節(jié)機(jī)制
    1.3 食物蛋白源ACE抑制肽現(xiàn)狀與進(jìn)展
        1.3.1 國(guó)內(nèi)外ACE抑制肽的研究與應(yīng)用概況
        1.3.2 ACE抑制肽的體外活性評(píng)價(jià)概況
        1.3.3 食物源ACE抑制肽的制備與純化
        1.3.4 工業(yè)化模擬移動(dòng)色譜分離技術(shù)研究與應(yīng)用概況
    1.4 課題的研究目的與意義
    1.5 本實(shí)驗(yàn)研究的主要內(nèi)容
第二章 酶法制備米糠ACE抑制肽的研究
    2.1 材料與儀器設(shè)備
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 試驗(yàn)試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 米糠蛋白基本成分測(cè)定
        2.2.2 米糠蛋白酶解物的制備工藝
        2.2.3 酶活力測(cè)定
        2.2.4 酶解物水解度的測(cè)定
        2.2.5 ACE抑制率的體外測(cè)定方法
        2.2.6 單因素酶解試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.2.7 二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合試驗(yàn)
        2.2.8 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 米糠蛋白原料基本成分
        2.3.2 蛋白酶活力測(cè)定結(jié)果
        2.3.3 單因素試驗(yàn)
        2.3.4 二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)試驗(yàn)
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 蛋白酶酶解動(dòng)力學(xué)研究
    3.1 材料與儀器設(shè)備
        3.1.1 試驗(yàn)試劑及材料
        3.1.2 主要儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 米糠蛋白酶解制備方法
        3.2.2 水解度測(cè)定方法
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3.1 蛋白水解動(dòng)力學(xué)模型的推導(dǎo)
        3.3.2 蛋白水解動(dòng)力學(xué)模型參數(shù)的確定
        3.3.3 蛋白酶失活常數(shù)的確定
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 米糠ACE抑制肽的超濾效果研究
    4.1 材料與儀器設(shè)備
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 儀器設(shè)備
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 ACE抑制活性測(cè)定
        4.2.2 膜通量測(cè)定的方法
        4.2.3 脫鹽率的測(cè)定方法
        4.2.4 多肽回收率的測(cè)定方法
        4.2.5 米糠降血壓肽的超濾分離
    4.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.3.1 無機(jī)膜超濾處理對(duì)ACE抑制率的影響
        4.3.2 不同超濾條件對(duì)超濾效果的影響
        4.3.3 正交試驗(yàn)分析
        4.3.4 有機(jī)膜超濾前后水解物的ACE抑制率
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 米糠蛋白ACE抑制肽模擬移動(dòng)床色譜分離技術(shù)研究
    5.1 材料與儀器
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 儀器設(shè)備
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 單柱分離系統(tǒng)
        5.2.2 模擬移動(dòng)色譜分離工藝
        5.2.3 米糠蛋白ACE抑制肽的制備條件
        5.2.4 降血壓活性測(cè)定方法
        5.2.5 大孔樹脂的篩選
        5.2.6 大孔吸附樹脂對(duì)米糠蛋白ACE抑制率的影響
        5.2.7 模擬移動(dòng)床分離設(shè)備操作工藝
        5.2.8 SMB色譜分離米糠ACE抑制肽工藝參數(shù)的確定
        5.2.9 高效液相色譜檢測(cè)
        5.2.10 目標(biāo)產(chǎn)物的分子量范圍確定
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 靜態(tài)吸附效果試驗(yàn)
        5.3.2 動(dòng)態(tài)吸附效果試驗(yàn)
        5.3.3 SMB分離純化米糠ACE抑制肽的工藝條件
        5.3.4 高效液相色譜檢測(cè)米糠ACE抑制肽的分子量分布
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
第六章 米糠蛋白ACE抑制肽的凝膠層析色譜分離
    6.1 材料和儀器設(shè)備
        6.1.1 試驗(yàn)材料
        6.1.2 儀器設(shè)備
    6.2 試驗(yàn)方法
        6.2.1 凝膠層析實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)方法
        6.2.2 凝膠層析分離條件的確定
        6.2.3 高效液相色譜分析條件
        6.2.4 質(zhì)譜法分析條件
    6.3 試驗(yàn)結(jié)果和分析
        6.3.1 不同洗脫液對(duì)Sephadex G-15分離米糠蛋白ACE抑制率的影響
        6.3.2 不同上樣濃度對(duì)SephadexG-15分離米糠蛋白ACE抑制率的影響
        6.3.3 不同流速對(duì)sephadex G-15分離米糠蛋白ACE抑制率的影響
        6.3.4 米糠分離蛋白水解液中ACE抑制率活性
    6.4 ACE抑制活性肽活性測(cè)定
    6.5 高效液相色譜分法確定分子量范圍
    6.6 質(zhì)譜法確定分子量范圍
    6.7 討論
    6.8 小結(jié)
第七章 米糠蛋白ACE抑制肽的純化及結(jié)構(gòu)鑒定
    7.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器設(shè)備
        7.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        7.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    7.2 試驗(yàn)方法
        7.2.1 ACE抑制活性的測(cè)定方法
        7.2.2 分子排阻色譜分離米糠ACE抑制肽
        7.2.3 HPLC分離米糠ACE抑制肽分離條件
        7.2.4 米糠蛋白ACE抑制肽氨基酸序列測(cè)定
    7.3 結(jié)果與分析
        7.3.1 分子排阻色譜分離米糠ACE抑制肽
        7.3.2 HPLC分離ACE抑制肽組分分析
        7.3.3 米糠蛋白ACE抑制肽氨基酸序列鑒定
    7.4 討論
    7.5 小結(jié)
第八章 米糠蛋白ACE抑制肽穩(wěn)定性研究
    8.1 材料與儀器設(shè)備
        8.1.1 試驗(yàn)材料
        8.1.2 儀器設(shè)備
    8.2 實(shí)驗(yàn)方法
        8.2.1 ACE抑制肽活性的測(cè)定
        8.2.2 溫度對(duì)米糠蛋白ACE抑制肽穩(wěn)定性影響試驗(yàn)
        8.2.3 pH對(duì)米糠蛋白ACE抑制肽穩(wěn)定性影響試驗(yàn)
        8.2.4 米糠蛋白ACE抑制肽耐鹽穩(wěn)定性試驗(yàn)
        8.2.5 干燥方式對(duì)米糠蛋白ACE抑制肽活性的影響
        8.2.6 腸道蛋白酶對(duì)米糠蛋白ACE抑制肽穩(wěn)定性影響試驗(yàn)
    8.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        8.3.1 溫度對(duì)米糠蛋白ACE抑制肽穩(wěn)定性影響
        8.3.2 pH對(duì)米糠蛋白ACE抑制肽穩(wěn)定性影響試驗(yàn)
        8.3.3 米糠蛋白ACE抑制肽耐鹽穩(wěn)定性試驗(yàn)
        8.3.4 干燥方式對(duì)米糠蛋白ACE抑制肽抑制率的影響分析
        8.3.5 胃蛋白酶和胰蛋白酶對(duì)米糠蛋白ACE抑制肽穩(wěn)定性影響試驗(yàn)
    8.4 討論
    8.5 小結(jié)
第九章 米糠蛋白ACE抑制肽在大鼠體內(nèi)降壓效果的研究
    9.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器設(shè)備
        9.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        9.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    9.2 試驗(yàn)方法
        9.2.1 米糠蛋白降血壓肽的制備
        9.2.2 米糠蛋白降血壓肽的活性測(cè)定
        9.2.3 大鼠飼養(yǎng)條件
        9.2.4 SHR大鼠灌胃給藥試驗(yàn)
        9.2.5 SHR大鼠靜脈注射給藥試驗(yàn)
        9.2.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血壓測(cè)定方法
        9.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    9.3 結(jié)果與討論
        9.3.1 米糠蛋白ACE抑制肽的抑制率結(jié)果
        9.3.2 米糠蛋白ACE抑制肽一次性灌胃對(duì)SHR大鼠血壓的影響分析
        9.3.3 米糠蛋白ACE抑制肽一次性灌胃對(duì)正常SD大鼠血壓的影響分析
        9.3.4 米糠蛋白ACE抑制肽連續(xù)性灌胃對(duì)分析
        9.3.5 米糠蛋白ACE抑制肽靜脈注射對(duì)SHR大鼠血壓的影響分析
        9.3.6 米糠蛋白ACE抑制肽長(zhǎng)期灌胃對(duì)SHR大鼠體重的影響分析
    9.4 討論
    9.5 小結(jié)
總結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)、進(jìn)一步研究的方向
參考文獻(xiàn)
附錄Ⅰ 本文中使用的縮略語
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表文章


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[5]花生短肽制備及其功能活性研究[D]. 張宇昊.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2007
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碩士論文
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[5]酶法提取米糠油和蛋白及米糠油微膠囊化研究[D]. 史素偉.南昌大學(xué) 2011
[6]模擬移動(dòng)床制備EGCG和ECG的工藝研究[D]. 黃永東.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011
[7]米糠發(fā)酵制品及功能評(píng)價(jià)[D]. 李璐.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[8]甘薯ACE抑制肽的制備及其降血壓活性研究[D]. 王碩.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011
[9]牛初乳中乳鐵蛋白分離純化的產(chǎn)業(yè)化技術(shù)參數(shù)研究[D]. 劉江麗.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2011
[10]米糠的微波穩(wěn)定化及其油脂和蛋白質(zhì)的提取研究[D]. 張志慧.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3025341