本文選題：熊果苷　切入點(diǎn)：乙酰化衍生物　出處：《吉林大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：熊果苷,屬于氫醌葡萄糖苷類化合物,化學(xué)名為4-羥苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷。最早,熊果苷被用于酪氨酸酶抑制劑,發(fā)揮了較好的美白效果,且已被國(guó)內(nèi)外廣泛地應(yīng)用于化妝品美白行業(yè)。近來(lái),研究報(bào)道熊果苷還具有顯著的利尿、抗菌、消炎、鎮(zhèn)咳、抗氧化和抗癌等多種藥理活性。但由于熊果苷分子中存在多個(gè)水溶性酚羥基,所以,熊果苷的脂溶性差,難于透過(guò)雙脂層細(xì)胞膜,致使其難以到達(dá)靶向作用點(diǎn)而生物活性降低。目前,研究報(bào)道利用非水相酶催化技術(shù)對(duì)熊果苷進(jìn)行衍生化的修飾,在提高熊果苷的穩(wěn)定性和生物活性等方面取得了很好的研究成果。首先,采用非水相反應(yīng)體系成功完成了熊果苷酶促乙�；磻�(yīng),并對(duì)影響熊果苷非水相酶促乙�；磻�(yīng)的主要因素,如酶源、溶劑、�；w、水活度、反應(yīng)溫度和加酶量等進(jìn)行了優(yōu)化研究,獲得熊果苷非水相酶促乙�；磻�(yīng)條件為酶源CSL,最佳溶劑為T(mén)HF,乙酸乙烯酯為酰基供體,最佳水活度為0.63,反應(yīng)溫度控制為40℃,最適酶量為100 mg。在此最佳反應(yīng)條件下,最高酶活為3.71±0.13μmol/h/mg,反應(yīng)24 h時(shí),最大轉(zhuǎn)化率為91.42±2.43%,經(jīng)核磁波譜儀鑒定反應(yīng)產(chǎn)物為6′-乙�；芄�(99%)。為了提高熊果苷非水相酶促反應(yīng)的酶活,實(shí)驗(yàn)采用了微波加熱輔助熊果苷非水相酶促反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,合適的微波輻射條件可以顯著的提高熊果苷酶促乙�；磻�(yīng)的酶活,縮短反應(yīng)時(shí)間。進(jìn)一步采用響應(yīng)面統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法進(jìn)行優(yōu)化和驗(yàn)證后,得到脂肪酶CSL催化熊果苷乙酰化反應(yīng)的最佳微波功率為400 W,微波溫度60℃,微波條件下aw為0.41。在此最適的微波加熱反應(yīng)條件下,CSL催化熊果苷乙�；磻�(yīng)的最高酶活為15.68±0.15μmol/h/mg,比傳統(tǒng)的加熱方式酶活提高了4倍多。反應(yīng)2 h左右即可達(dá)到90%以上的轉(zhuǎn)化率。為了探究熊果苷酶促乙�；囊饬x,實(shí)驗(yàn)通過(guò)經(jīng)典的總抗氧化能力、DPPH自由基、ABTS自由基、鐵離子還原能力和超氧陰離子自由基的清除力等方法,全面考察了6′-乙酰化熊果苷的體外抗氧化能力。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),6′-乙�；芄盏捏w外抗氧化能力較強(qiáng),與常用抗氧化劑BHT和Vc的抗氧化能力相近或略低,但6′-乙酰化熊果苷的體外抗氧化能力均稍低于熊果苷母體。隨后,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)6′-乙�；芄盏挠H脂性要高于熊果苷母體,所以初步預(yù)期6′-乙酰化熊果苷會(huì)增加透過(guò)脂質(zhì)雙層細(xì)胞膜的機(jī)會(huì),更好地發(fā)揮其在生物體內(nèi)的生理作用。為了驗(yàn)證以上的推測(cè),實(shí)驗(yàn)采用秀麗隱桿線蟲(chóng)為活體模型,探索了6′-乙�；芄盏捏w內(nèi)抗氧化作用。實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)線蟲(chóng)的壽命,產(chǎn)卵和運(yùn)動(dòng)等生理表型及對(duì)熱、化學(xué)氧化和紫外輻射等不良環(huán)境抵御能力的觀測(cè),顯示經(jīng)6′-乙�；芄崭深A(yù)的線蟲(chóng)平均生存時(shí)間延長(zhǎng),運(yùn)動(dòng)更加活躍,與對(duì)照組相比,差異極顯著(p0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且并不影響線蟲(chóng)的生殖。同時(shí),實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)6′-乙酰化熊果苷能夠增強(qiáng)線蟲(chóng)對(duì)熱、化學(xué)氧化劑胡桃琨和紫外輻射等不良環(huán)境的抵抗能力。另外,通過(guò)半定量PCR法測(cè)定線蟲(chóng)體內(nèi)衰老相關(guān)基因daf-16、skn-1、hsp-16.2、hsf-1和hsp-70的表達(dá)都明顯上調(diào),與6′-乙酰化熊果苷能夠顯著的延長(zhǎng)線蟲(chóng)的壽命結(jié)果相一致�？梢�(jiàn),6′-乙酰化熊果苷具有很好的生物體內(nèi)抗氧化和延緩衰老的作用。為了更好的發(fā)揮6′-乙�；芄盏捏w內(nèi)抗氧化作用,將其應(yīng)用于美白和抗腫瘤領(lǐng)域。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步利用生理功能近似的小鼠B16黑色素瘤細(xì)胞株作為受試細(xì)胞,考察了6′-乙�；芄盏拿腊兹ド睾涂购谏亓龅纳锘钚�。對(duì)比研究了熊果苷及其6′-乙酰化熊果苷在抑制小鼠B16細(xì)胞黑色素合成、酪氨酸酶活性及抗細(xì)胞增殖和遷移等方面的生理活性,并通過(guò)線粒體膜電位和western blotting分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)探索了其對(duì)細(xì)胞凋亡的作用機(jī)理。隨后,進(jìn)一步研究了6′-乙酰化熊果苷對(duì)BALB/c裸鼠體內(nèi)黑色素瘤增殖的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明6′-乙�；芄漳軌蝻@著的抑制酪氨酸酶活性,降低小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞的黑色素合成,并且能夠有效的抑制小鼠B16細(xì)胞的增殖和遷移,并引起G1期細(xì)胞停滯,通過(guò)抑制Bcl-2和Bcl-xL兩種蛋白的表達(dá),引起線粒體損傷,并通過(guò)caspases線粒體依賴途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。另外,通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell遷移實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)6′-乙�；芄漳軌蝻@著的抑制小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞的遷移。更重要的是,實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)6′-乙�；芄漳軌蝻@著的抑制BALB/c裸鼠體內(nèi)黑色素瘤的增殖�？梢�(jiàn),6′-乙�；芄詹粌H可作為有效的皮膚美白劑,而且具有治療黑色素瘤的潛在應(yīng)用價(jià)值。
[Abstract]:In order to improve the stability and biological activity of aragrin , it was found that the best water activity was 3.71 鹵 0.13渭mol / h / mg , the best water activity was 0 . 63 , the optimum temperature was 60 鈩，

本文編號(hào)：1705651