本文關(guān)鍵詞： 脂質(zhì)體 脂肪乳 奧沙利鉑 伊立替康 共遞送 結(jié)直腸癌　出處：《山東大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：癌癥是威脅人類健康的重要疾病之一,結(jié)直腸癌在全球發(fā)病率及死亡率均位列各種癌癥疾病的第三位,并呈逐年上升趨勢(shì)。由于結(jié)直腸癌起病隱匿,早期不易發(fā)現(xiàn),超過(guò)一半的患者在確診時(shí)即已發(fā)生轉(zhuǎn)移,而轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者的5年生存率僅為10%。化學(xué)藥物治療是目前臨床上治療結(jié)直腸癌不可或缺的重要手段,尤其適用于無(wú)法接受手術(shù)切除或放射治療等局部治療手段的轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者。由于化療藥物單獨(dú)使用時(shí)作用靶點(diǎn)單一,治療效果有限,常引起多藥耐藥、腫瘤耐受及復(fù)發(fā),不能滿足臨床治療的要求。因此,目前臨床上結(jié)直腸癌的一線化學(xué)治療方案大部分均采用不同藥物聯(lián)合治療方式,其中,奧沙利鉑(OXA)與伊立替康(IRI)聯(lián)用方案在美國(guó)國(guó)家癌癥綜合網(wǎng)絡(luò)《結(jié)腸癌臨床治療指南》1中,推薦用于結(jié)直腸癌的一線治療。OXA與IRI兩種藥物聯(lián)用時(shí),能夠以不Q嬜饔沒仆弊饔糜諳赴鸇NA,從而產(chǎn)生協(xié)同治療效果。但由于奧沙利鉑和鹽酸伊立替康均存在一系列的缺點(diǎn),如:低的藥物耐受,非特異性,多藥耐藥,非期望的藥代動(dòng)力學(xué)和生物分布,在殺死腫瘤細(xì)胞時(shí)對(duì)正常組織也會(huì)造成嚴(yán)重?fù)p害,而二者的聯(lián)合使用則會(huì)進(jìn)一步加劇對(duì)機(jī)體的毒副作用,限制了其臨床應(yīng)用。另外,臨床上的傳統(tǒng)方法只是簡(jiǎn)單的將兩種藥物聯(lián)合使用,無(wú)法控制藥物在體內(nèi)的釋放,由于每種藥物的藥代動(dòng)力學(xué)不同,而不同藥物比例對(duì)疾病的治療可能起到協(xié)同、相加甚至是拮抗作用,從而導(dǎo)致抗腫瘤效果的不確定性,影響治療效果。因此,建立一種新型給藥體系,提高結(jié)直腸癌治療效果,減少兩種藥物聯(lián)用的毒副作用,具有十分重要意義。藥物遞釋系統(tǒng)為克服化療藥物所存在的弊端提供了一個(gè)很好的機(jī)遇,利用納米載體實(shí)現(xiàn)藥物遞釋及共遞送的研究已成為抗腫瘤研究的熱點(diǎn)。利用藥物遞釋系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)藥物聯(lián)合治療一般有三種策略:單載納米制劑加游離藥物的"雞尾酒策略"(free drug+nano);兩種單載納米制劑聯(lián)用的"混合策略"(nano+nano);兩種藥物裝載于同一納米制劑的"共載策略"(co-encapsulation)。在體內(nèi)遞送過(guò)程中,由于雞尾酒策略及混合策略中兩種藥物在某一部位的比例是任意的,而共載策略中兩種藥物在體內(nèi)能夠保持固定的比例,因此可保證兩藥發(fā)揮最大的治療效果�；谥|(zhì)納米載體(Lipid-based nanocarriers)是構(gòu)建藥物遞送系統(tǒng)的重要載體材料,以脂質(zhì)體和脂肪乳為典型代表,其安全性高,具有良好的生物相容性及生物可降解性,目前脂質(zhì)體、脂肪乳已有多種藥物批準(zhǔn)上市,表現(xiàn)出巨大的應(yīng)用前景。為提高結(jié)直腸癌治療效果,并減輕化療藥物聯(lián)用產(chǎn)生的毒副作用,本課題擬選擇脂質(zhì)體和脂肪乳兩種具有較高臨床轉(zhuǎn)化前景的納米載體,分別構(gòu)建兩種奧沙利鉑和伊立替康共載的藥物遞釋系統(tǒng),以控制兩種藥物在體內(nèi)釋放,實(shí)現(xiàn)兩種化療藥在腫瘤細(xì)胞內(nèi)有效共遞送,從而提高結(jié)直腸癌治療效果。此外,進(jìn)一步探討在藥物遞釋系統(tǒng)聯(lián)合治療中,混合策略及共載策略在抗腫瘤效果上的差異,分析其療效差異原因,為藥物聯(lián)合治療的遞送給藥設(shè)計(jì)提供理論依據(jù)。本課題主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:第一部分奧沙利鉑及鹽酸伊立替康共載脂質(zhì)體的制備、表征及體內(nèi)外評(píng)價(jià)第一章分別采用HPLC及UV-Vis建立奧沙利鉑和鹽酸伊立替康的含量測(cè)定方法,兩種藥物在測(cè)定濃度下均呈現(xiàn)良好線性關(guān)系,且精密度、回收率均符合要求。采用透析法及葡聚糖凝膠G25兩種手段分別建立奧沙利鉑包封率測(cè)定方法,并采用葡聚糖凝膠G25建立鹽酸伊立替康包封率測(cè)定方法,兩種藥物均可與脂質(zhì)體實(shí)現(xiàn)分離,回收率符合要求。第二章通過(guò)Gaddum模型及CI指數(shù)法確定了奧沙利鉑及鹽酸伊立替康存在協(xié)同效應(yīng),且在OXA/IRI摩爾比在1:1～1:1.5時(shí),兩藥具有最佳協(xié)同效應(yīng)。選擇乙醇注入法結(jié)合硫酸銨梯度法制備得到OXA及IRI共載脂質(zhì)體,粒徑小于200 nm,PDI小于0.2,呈圓整球形。該方法采用次序載藥策略,能夠精確控制兩藥比例。體外釋放實(shí)驗(yàn)表明兩種藥物的釋放行為包括初始的突釋釋放以及后續(xù)的持續(xù)釋放兩部分,且共載脂質(zhì)體能夠更好的控制兩藥比例在最佳協(xié)同范圍。第三章體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明共載脂質(zhì)體具有更強(qiáng)的細(xì)胞殺傷作用;以CT-26荷瘤小鼠為模型進(jìn)行體內(nèi)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明共載脂質(zhì)體與混合溶液及混合脂質(zhì)體相比,能夠顯著增強(qiáng)抗腫瘤效果(p0.05)。對(duì)小鼠給予不同DiR處方進(jìn)行近紅外熒光成像掃描,表明脂質(zhì)體能夠增加藥物在腫瘤部位的蓄積。以羅丹明B及FITC為熒光染料對(duì)脂質(zhì)體進(jìn)行標(biāo)記,通過(guò)體外細(xì)胞攝取及體內(nèi)荷瘤小鼠冰凍切片觀察,對(duì)共載脂質(zhì)體的共遞送不同藥物至同一細(xì)胞的能力進(jìn)行評(píng)價(jià),結(jié)果表明共載脂質(zhì)體較混合制劑具有更高的共遞送效率。荷瘤小鼠給予共載脂質(zhì)體后體重變化明顯高于混合溶液組,此外組織HE染色中混合溶液組可見心、肺、脾組織異常,均表明脂質(zhì)體具有良好的安全性,能夠降低藥物的毒副作用。第二部分奧沙利鉑及伊立替康共載脂肪乳的制備、表征及體內(nèi)外評(píng)價(jià)第四章成功制備了制備奧沙利鉑脂質(zhì)復(fù)合物(OPPC)及伊立替康脂質(zhì)復(fù)合物(IPPC),并分別確定了二者的優(yōu)化工藝。所制備的OPPC及IPPC在7天內(nèi)均能夠保持較好的穩(wěn)定性。通過(guò)DSC曲線對(duì)所制備的OPPC及IPPC進(jìn)行表征,其吸熱放熱峰均與藥物發(fā)生明顯改變,證明兩種復(fù)合物的成功制備。第五章采用藥物脂質(zhì)復(fù)合物技術(shù)成功制備了奧沙利鉑及伊立替康共載的脂肪乳制劑,并確定其優(yōu)化處方及工藝為:選擇MCT為油相、處方比例5%;普郎尼克F68處方比例2%;甘油及油酸處方比例分別為2%、0.125%;乳化溫度60℃;勻質(zhì)壓力1000 bar、循環(huán)次數(shù)15次。所制備的共載脂肪乳其粒徑在100～120 nm之間,PDI小于0.2,zeta電位在-20 mV左右,且具有良好的穩(wěn)定性。長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明其于4℃條件下貯存,在三個(gè)月內(nèi)粒徑無(wú)明顯變化,可保持穩(wěn)定。體外釋放實(shí)驗(yàn)表明脂肪乳能夠控制藥物的持續(xù)釋放,至48 h時(shí),兩種藥物在單載與共載脂肪乳的累積釋放分別可達(dá)80%及70%以上,表現(xiàn)出整體相當(dāng)?shù)尼尫判袨?表明脂肪乳可控制兩種藥物的同步釋放并達(dá)到最佳協(xié)同比例。第六章體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)表明空白脂肪乳表現(xiàn)出較好的安全性,共載脂肪乳具有較混合溶液及混合脂肪乳略強(qiáng)的細(xì)胞毒性,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。小鼠體內(nèi)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明,共載脂肪乳與較混合溶液及混合脂肪乳相比,表現(xiàn)出顯著增強(qiáng)的抗腫瘤效果。此外,脂肪乳制劑能夠降低OXA及IRI游離藥物聯(lián)用時(shí)的毒副作用。近紅外熒光成像結(jié)果表明,脂肪乳可增加藥物在腫瘤部位的蓄積,且能夠延緩藥物在腫瘤部位的滯留時(shí)間。以DiI及DiO對(duì)脂肪乳進(jìn)行熒光標(biāo)記進(jìn)行體外細(xì)胞攝取及體內(nèi)小鼠腫瘤冰凍切片評(píng)價(jià),均表明共載脂肪乳能夠以固定的比例同時(shí)共遞送兩種藥物至同一細(xì)胞,表現(xiàn)出較高的共遞送效率,從而保持二者的最佳協(xié)同治療比例。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R943
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本文編號(hào)：1488083