本文關(guān)鍵詞：水飛薊果托總黃酮的分離純化及其生物活性研究　出處：《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 水飛薊果托 黃酮 提取 分離純化 生物活性

【摘要】：水飛薊(Silybum marianum L.)為菊科水飛薊屬一年或二年生植物,我國從上世紀(jì)七十年代開始引進種植。目前國內(nèi)外對于水飛薊的研究和利用主要集中在果實部分,水飛薊植株利用價值較低。黃酮類物質(zhì)廣泛存在于植物中,具有多種生理活性,水飛薊果實中的黃酮類物質(zhì)—水飛薊素已作為護肝藥物的主要成分在臨床上得到廣泛應(yīng)用。國內(nèi)外對水飛薊植株的研究較少,且主要集中在根、莖、葉等部分,未見對水飛薊果托部分的報道。本課題首先對水飛薊植株各部位活性成分及醇提物活性進行研究,然后對醇提物抗氧化活性最高的果托部位的總黃酮進行提取和分離純化,明確果托總黃酮中的主要單體組分,并對其抗氧化活性和降血糖活性進行研究。主要研究結(jié)果如下:1、對水飛薊根、莖、葉、果托等四部位的活性成分含量及其醇提物體外抗氧化活性進行測定,結(jié)果表明:四個部位中,果托總黃酮含量最大(9.98±0.58mg/g),總黃酮含量順序依次為果托根葉莖;水飛薊根中多糖的含量最大(8.02±0.15mg/g),多糖含量的比較順序為根果托葉莖;果托中多酚含量最大(12.19±0.38mg/g),多酚含量順序為果托根葉莖;水飛薊植株各部位蛋白質(zhì)的含量均較少,經(jīng)比較含量順序為莖根果托葉。四部位醇提物對DPPH清除活性、清除羥基和總抗氧化能力試驗結(jié)果表明,醇提物體外抗氧化活性順序為果托根葉莖。2、采用響應(yīng)面法優(yōu)化超聲波輔助乙醇溶液提取水飛薊果托總黃酮的最佳工藝條件。結(jié)果表明,超聲波輔助乙醇溶液提取的最佳工藝條件為:乙醇體積分?jǐn)?shù)40%,提取時間80min,液料比40:1,提取溫度60℃。在此條件下,水飛薊果托中總黃酮的提取量可達(dá)10.18mg/g。四個因素對果托總黃酮提取量的影響順序從大到小依次為液料比乙醇體積分提取溫度提取時間。3、采用大孔樹脂和硅膠柱層析試驗對果托總黃酮進行分離純化,并通過紅外光譜分析、質(zhì)譜分析和核磁共振譜圖分析對分離得到的單體化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果表明,7種大孔樹脂中AB-8最適合對果托總黃酮進行純化,其純化工藝參數(shù)為:果托總黃酮濃度3.98mg/ml、上樣體積80mL、pH5.5、乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、洗脫體積100mL、吸附溫度50℃、解析溫度60℃。在此條件下,分離純化后果托總黃酮純度為73.45±0.26%,回收率為84.04%±1.83。硅膠柱層析梯度洗脫試驗中,從乙酸乙酯:丙酮配比為3:1洗脫液中得到化合物Ⅰ(45mg),從乙酸乙酯:丙酮配比為1:1洗脫液中得到化合物Ⅱ(55 mg),從乙酸乙脂丙酮配比為1:2洗脫液中得到化合物Ⅲ(80mg)。結(jié)構(gòu)鑒定結(jié)果表明,化合物Ⅰ分子式C15H12O7,為二氫榭皮素(花旗松素);化合物物Ⅱ分子式C25H22O10,為水飛薊亭;化合物物Ⅲ分子式C25H22O10),為水飛薊賓。4、通過測定清除DPPH活性、清除羥基自由基活性、總抗氧化能力和對油脂的抗氧化活性等對水飛薊果托總黃酮的體外抗氧化能力進行評價,然后以昆明種小白鼠為受試動物,通過測定果托總黃酮對血清和肝腎中的谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)活力和丙二醛(MDA)含量的影響評價其體內(nèi)抗氧化能力。體外抗氧化試驗結(jié)果表明,DPPH清除率,羥基清除率和總抗氧化能力順序均為果托總黃酮抗壞血酸果托醇提物;對豬油和大豆油的抗氧化試驗結(jié)果表明,果托總黃酮對豬油和大豆油均具有很好的抗氧化效果。體內(nèi)抗氧化試驗結(jié)果表明,果托總黃酮各劑量組均可顯著提高小鼠體內(nèi)血清、肝和腎組織的CAT活性,降低MDA含量;果托總黃酮高劑量組可增加小鼠體內(nèi)血清、肝和腎組織的T-SOD活性和GSH-PX活性。因此,果托總黃酮具有較好的體外和體內(nèi)抗氧化能力。5、通過建立2型糖尿病大鼠模型,測定其血糖、血脂變化、血清丙二醛(MDA)含量、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和糖耐量等指標(biāo),并對其肝臟組織進行切片觀察,研究果托總黃酮的降血糖活性。試驗結(jié)果表明,果托總黃酮對2型糖尿病大鼠有如下作用:總黃酮各劑量組均可起到降低大鼠血糖、血清中總膽固醇(TC)和甘油三脂(TG)濃度的作用,并使TG恢復(fù)到正常水平,對TC的降低存在一定的劑量相關(guān)性;可使血清中高密度脂蛋白(HDL-C)濃度升高,低密度脂蛋白(LDL-C)濃度降低,并使HDL-C恢復(fù)到正常水平,對LDL-C的降低作用存在一定的劑量相關(guān)性;可使血清中SOD活性升高,MDA含量降低;可在一定程度上提高大鼠的口服糖耐量。肝臟組織切片觀察結(jié)果表明,果托總黃酮對糖尿病大鼠肝臟組織脂肪化有一定的抑制作用。
[Abstract]:The results showed that the content of total flavonoids in silybum marianum was the highest ( 9.98 鹵 0.515 mg / g ) and the content of total flavonoids was the highest ( 8.02 鹵 0.15mg / g ) . The results showed that the content of total flavonoids in silybum marianum was the highest ( 8.02 鹵 0.38mg / g ) . The anti - oxidation test results showed that the total flavone concentration was 73.45 鹵 0.26 % , the recovery rate was 84.04 % 鹵 1.83 . The results showed that the total flavone of the compound 鈪，

本文編號：1426060