本文關鍵詞：水黃皮根內(nèi)生細菌遺傳多樣性研究及促生菌篩選，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：植物體內(nèi)存在著具有促進植物生長的內(nèi)生細菌,可用于開發(fā)微生物肥料,具有促進植物生長、無污染、低成本等優(yōu)點。水黃皮是一種生物質(zhì)能源植物,具有耐高溫、耐旱、耐貧瘠、耐鹽堿等特性。本研究從采自海南省文昌縣紅樹林的水黃皮(Pongamia pinnata)根中分離內(nèi)生細菌,應用BOX-PCR和16S rDNA全序列分析等方法對其多樣性和系統(tǒng)發(fā)育進行了研究。利用Salkowski比色法測定IAA的分泌量、用鉬銻抗比色法測定溶解無機磷的能力、采用改進的CAS法測定分泌鐵載體的能力、利用Ashby培養(yǎng)基和過硫酸鉀氧化法測定自生固氮能力,進而,通過盆栽試驗研究了供試細菌的促生能力。研究結果如下：1.從水黃皮根中分離出50株內(nèi)生細菌,BOXAIR-PCR聚類分析和16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育分析表明,水黃皮根內(nèi)生細菌具有豐富的遺傳多樣性。BOXAIR-PCR聚類分析結果表明,50株內(nèi)生細菌在82%的相似水平上聚為6個遺傳群,其中I群包含了58%的菌株；而另外,有7株菌獨立成群。2.根據(jù)BOXAIR-PCR聚類分析結果,測定了13株代表菌株的16S rDNA序列,構建了供試菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹,表明水黃皮根內(nèi)生細菌主要分布于芽孢桿菌屬(Bacillus)、賴氨酸芽孢桿菌屬(Lysinibacillus)、類芽孢桿菌屬(Paenibacillus)、棒狀桿菌屬(Corynebacterium)、伯克霍爾德氏菌屬(Burkholderia)、蒼白桿菌屬(Ochrobactrum)6個屬,并揭示了水黃皮根內(nèi)生細菌具有豐富的遺傳多樣性,且與已知同源菌屬的同源性高(99.2%100%)。鑒定結果表明,代表菌株G3、G16和G17屬于Bacillus aryabhattai, G4和G6屬于Bacillus thuringiensis,G9屬于Burkholderia anthina,G10和G26屬于Ochrobactrum anthropi,G14屬于Paenibacillus glycanilyticus、G35屬于Corynebacterium callunae,G36屬于Lysinibacillus fusiformis、G39屬于Bacillus subtilis,而G50屬于Bacillus cereus。3.通過對代表菌株的生物活性測定,獲得了產(chǎn)IAA、溶磷、分泌鐵載體和自生固氮的內(nèi)生細菌。結果表明,13代表菌株均產(chǎn)生IAA(17.55-59.55μg/mL),以G16產(chǎn)量最高,為59.55 μg/mL;有76.9%的代表菌株能分泌鐵載體,鐵載體濃度為6.00-104.50μg/mL,菌株G26產(chǎn)量最高,為104.50μg/mL;G9具有溶無機磷能力,其溶磷量為4.87μg/mL;G9、G14、G10和G26具有自生固氮能力,固氮量為1.57～6.84μg/mL,以G10固氮能力最強,培養(yǎng)液中全氮量達到6.84μg/mL。對G3、G9和G10進行水黃皮盆栽接種試驗,結果表明這3株PGPB能夠不同程度地促進水黃皮的生長,其中G10的促生效果最明顯,水黃皮植株干重和植株含氮量較對照顯著增加。4.篩選獲得了5株產(chǎn)鐵載體能力強的內(nèi)生細菌(G3、G9、G10、 G17和G26),其產(chǎn)鐵載體的濃度為41.50～104.50μg/mL;進而,盆栽試驗驗證了這5株內(nèi)生細菌對花生的促生效果。結果表明,接種供試菌株促進了花生吸收N、P、K和Fe元素,增加花生植株干重。其中,接種GIO和G26,花生干重增加了6.78和23.72%、植株全氮量增加96.94%和76.53%,植株全磷量增加了17.71%和20.83%,植株全鉀含量增加了16.15%和14.91%,植株全鐵增加了32.14-73.45%。這證明了供試菌株具有良好的促生功能。
【關鍵詞】：水黃皮 內(nèi)生細菌 遺傳多樣性 植物促生細菌(PGPB)
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：Q93
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 1. 文獻綜述11-21
• 1.1 引言11-12
• 1.2 植物內(nèi)生菌研究進展12-16
• 1.2.1 植物內(nèi)生菌的概述12
• 1.2.2 內(nèi)生菌多樣性研究12-15
• 1.2.3 內(nèi)生菌系統(tǒng)發(fā)育研究15-16
• 1.3 植物內(nèi)生促生菌研究現(xiàn)狀16-19
• 1.3.1 植物內(nèi)生促生菌對植物的促生機理17-18
• 1.3.2 植物內(nèi)生促生菌的資源開發(fā)與利用18-19
• 1.4 本研究立題依據(jù)及主要研究內(nèi)容19-21
• 1.4.1 立題依據(jù)19-20
• 1.4.2 研究目的20-21
• 2. 水黃皮根內(nèi)生細菌遺傳多樣性研究21-34
• 2.1 材料與方法21-24
• 2.1.1 樣品采集21
• 2.1.2 供試儀器21
• 2.1.3 供試試劑及培養(yǎng)基21-22
• 2.1.4 內(nèi)生細菌分離純化22
• 2.1.5 DNA提取22
• 2.1.6 BOXA1R-PCR指紋圖譜分析22-23
• 2.1.7 代表菌株16S rDNA基因序列分析23-24
• 2.1.8 數(shù)據(jù)分析與處理24
• 2.2 結果分析24-31
• 2.2.1 供試菌株生長特性及形態(tài)24-26
• 2.2.2 BOXA1R-PCR指紋圖譜結果分析26-29
• 2.2.3 代表菌株16S rDNA序列分析29-31
• 2.3 討論31-34
• 3. 水黃皮內(nèi)生細菌高效促生菌的篩選34-42
• 3.1 材料與方法34-37
• 3.1.1 供試菌株34
• 3.1.2 供試儀器34
• 3.1.3 試劑及培養(yǎng)基34-35
• 3.1.4 水黃皮內(nèi)生細菌促生活性測定35-37
• 3.2 結果分析37-40
• 3.2.1 水黃皮根內(nèi)生細菌產(chǎn)IAA活性測定結果分析37
• 3.2.2 水黃皮根內(nèi)生細菌溶磷活性分析37-38
• 3.2.3 水黃皮根內(nèi)生細菌固氮活性分析38
• 3.2.4 水黃皮根內(nèi)生細菌分泌鐵載體活性分析38-40
• 3.3 討論40-42
• 4. 水黃皮根內(nèi)生細菌促生效果研究42-51
• 4.1 水黃皮根內(nèi)生細菌對水黃皮生長的影響42-43
• 4.2 產(chǎn)鐵載體細菌盆栽試驗43-44
• 4.3 數(shù)據(jù)處理44-45
• 4.4 結果分析45-49
• 4.5 討論49-51
• 5. 結論及展望51-52
• 5.1 結論51
• 5.2 展望51-52
• 參考文獻52-58
• 致謝58-59
• 附錄：代表菌株16S rDNA序列59-65

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