本文關(guān)鍵詞：硅藻18S rRNA鑒別實驗家兔水中尸體死因的研究

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【摘要】：目的：利用硅藻18S rRNA基因檢測判定實驗家兔水中尸體的死亡原因。方法：將實驗家兔隨機分成溺死組、死后拋尸入水組及空白對照組；溺死組和死后拋尸入水組又分為兩個亞組：長江水域組和護校河水域組。各組按實驗設(shè)計分別提取死后家兔的肺、肝、腎、腦組織和心血，勻漿后，，選用硅膠密度梯度離心法分離組織中的硅藻并采用Chelex-100法提取硅藻DNA，運用PCR技術(shù)擴增硅藻特異的18S rRNA基因片段，并使用瓊脂糖凝膠電泳法、變性梯度凝膠電泳法、以及DNA測序技術(shù)三種方法對擴增結(jié)果進行檢測并加以分析。同時使用傳統(tǒng)的強酸消化法檢測肺、肝和腎組織中的硅藻，并與PCR結(jié)果進行對比。結(jié)果：溺死組肺、肝、腎、腦組織及心血中硅藻檢測多數(shù)呈陽性：肺（100%）、肝（75%）、腎（83%）、腦（75%）、心血（58.3%）；死后拋尸入水組僅在肺組織和腎組織中各檢出2例和1例陽性；空白對照組各組織全部呈陰性。強酸消化法在溺死組肺、肝和腎組織中的硅藻檢出率分別為：肺（83%）、肝（25%）和腎（16.7%），而死后拋尸入水組僅在1例肺組織中檢出硅藻。 結(jié)論：將PCR技術(shù)擴增硅藻18S rRNA基因片段運用到家兔水中尸體的死亡原因判斷，其靈敏度和特異性均優(yōu)于傳統(tǒng)的硅藻強酸消化法。此檢測方法對水中尸體的死因鑒定具有一定的應用前景。
【關(guān)鍵詞】：硅藻18S rRNA PCR擴增 DGGE DNA測序 水中死亡 死因鑒定
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：D919.4
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-8
• 摘要8-9
• Abstract9-11
• 前言11-20
• 1. 硅藻的生物學特性及其分布12-13
• 2. 硅藻的法醫(yī)學檢驗方法13-17
• 2.1 化學消化法13
• 2.2 酶消化法13-14
• 2.3 微波消解法14
• 2.4 高溫灰化法14
• 2.5 浸漬法14-15
• 2.6 硅膠梯度離心法15
• 2.7 水中浮游生物葉綠素檢測15
• 2.8 分子生物學檢驗15-16
• 2.9 各方法的硅藻檢出率比較16-17
• 3. 硅藻 18S rRNA 基因序列的特異性17-18
• 4. 研究總體思路18-20
• 研究內(nèi)容與方法20-27
• 1. 研究內(nèi)容20
• 2. 材料與方法20-27
• 2.1 動物模型制作材料20
• 2.2 實驗試劑20
• 2.3 實驗儀器20-21
• 2.4 實驗方法21
• 2.5 檢材制備與 DNA 擴增21-23
• 2.6 DNA 測序分析23-24
• 2.7 電泳分析24-26
• 2.8 強酸消化法26-27
• 結(jié)果27-31
• 1. 硅藻 18S rRNA 檢測結(jié)果27-28
• 2. DGGE 檢測結(jié)果28
• 3. DNA 測序結(jié)果28
• 4. 強酸消化法硅藻檢測結(jié)果28-31
• 討論31-37
• 1. 硅藻 18S rRNA PCR 檢測在溺死鑒定中的應用價值31-32
• 2. DGGE 技術(shù)對于硅藻檢測的應用價值32-34
• 3. DNA 測序技術(shù)結(jié)果分析34-35
• 4. 組織中硅藻 DNA 的分離35-36
• 5. 強酸消化法在硅藻檢測中的應用價值36-37
• 結(jié)論37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻39-43
• 附錄43-44
• 綜述44-52
• 參考文獻50-52
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果52

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1 周玉倩;硅藻18S rRNA鑒別實驗家兔水中尸體死因的研究[D];皖南醫(yī)學院;2013年

本文編號：978886