本文關(guān)鍵詞：痕量指紋DNA的提取及STR基因分型

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【摘要】：目的：建立從滲透性和非滲透性載體上提取檢驗(yàn)指紋DNA的方法,最大限度地發(fā)揮指紋特別是特征點(diǎn)殘缺不全的指紋的刑偵作用,為刑偵工作提供科學(xué)依據(jù)。 方法：利用自主研發(fā)的汗?jié)撝讣yDNA提取液提取痕量指紋DNA,用改進(jìn)的MDA擴(kuò)增法擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)用AmpF/STR(?) IdentifilerTM CR Amplification Kit, PowerPlex(?) 16 System, GoldeneyeTM DNA身份鑒定系統(tǒng)20A 3種多重STR檢測(cè)試劑盒進(jìn)行基因分型檢測(cè)。 結(jié)果：5pg模板改進(jìn)的MDA擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行16個(gè)STR位點(diǎn)分型檢測(cè),可獲得12個(gè)STR位點(diǎn)基因分型結(jié)果,而Sigma WGA法僅獲4個(gè)位點(diǎn)基因分型結(jié)果。改良的MDA法擴(kuò)增汗?jié)撝讣yDNA提取液提取非滲透性載體-玻片上指紋DNA,經(jīng)AmpFlSTR(?) IdentifilerTM PCR Amplification Kit對(duì)16個(gè)STR位點(diǎn)分型檢測(cè),可獲得9個(gè)STR位點(diǎn)基因分型結(jié)果。而5% chelex-100提取汗?jié)撝讣yDNA, STR分型只能獲得2-3位點(diǎn)基因分型結(jié)果。 結(jié)論：改進(jìn)的MDA方法能提高痕量DNA樣本STR分型檢驗(yàn)的靈敏度,但指紋DNA的分型檢測(cè)中存在等位基因偏差現(xiàn)象,實(shí)驗(yàn)方法還有待改進(jìn)。使用SNP標(biāo)記代替STR標(biāo)記可能提高痕量DNA正確檢出率。
【關(guān)鍵詞】：痕量指紋DNA 全基因組擴(kuò)增 STR
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：D919.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-12
• 第一章 研究背景12-25
• 1 基因組多態(tài)性12-18
• 1.1 RFLP12-13
• 1.2 STR13-17
• 1.3 SNP17-18
• 2. WGA技術(shù)18-22
• 2.1 DOP-PCR19
• 2.2 LMP-PCR19
• 2.3 PEP和MDA19-20
• 2.4 pWGA20-22
• 3. 指紋DNA研究現(xiàn)狀介紹22-25
• 第二章 商業(yè)化WGA kit在指紋DNA的基因分型的應(yīng)用25-36
• 1. 材料和方法25-31
• 1.1 材料25-27
• 1.1.1 主要試劑25-26
• 1.1.2 主要儀器26-27
• 1.2 方法27-31
• 1.2.1 手指脫落細(xì)胞檢測(cè)27
• 1.2.2 指紋樣品的制備27
• 1.2.3 指紋樣品的轉(zhuǎn)移27-28
• 1.2.4 汗?jié)撝讣yDNA的提取28
• 1.2.5 痕量DNA的WGA擴(kuò)增28-30
• 1.2.6 產(chǎn)物的純化30-31
• 2. 結(jié)果31-34
• 2.1 手指脫落細(xì)胞檢測(cè)31
• 2.2 不同濃度梯度DNA-9947A標(biāo)準(zhǔn)品WGA擴(kuò)增結(jié)果31-32
• 2.3 紙張和玻片上指紋DNA擴(kuò)增結(jié)果32-34
• 3. 討論34-36
• 3.1 汗?jié)撝讣yDNA檢驗(yàn)原理34
• 3.2 滲透性和非滲透性載體指紋DNA提取結(jié)果說明34-36
• 第三章 改良MDA擴(kuò)增方法的建立36-49
• 1. 材料和方法36-43
• 1.1 材料36-37
• 1.1.1 主要試劑36-37
• 1.1.2 主要儀器及軟件37
• 1.2 改良MDA方法的建立37-43
• 1.2.1 不同引物及引物組合實(shí)驗(yàn)37-40
• 1.2.2 酶濃度的影響40-41
• 1.2.3 起始模板濃度的影響41
• 1.2.4 溫度的影響41-42
• 1.2.5 改良MDA法對(duì)指紋DNA的擴(kuò)增42-43
• 2. 結(jié)果43-48
• 2.1 不同引物對(duì)MDA擴(kuò)增效率的影響43-44
• 2.2 酶濃度影響的結(jié)果44-45
• 2.3 起始模板濃度影響的結(jié)果45-46
• 2.4 溫度影響的結(jié)果46
• 2.5 對(duì)指紋DNA擴(kuò)增的結(jié)果46-48
• 3. 討論48-49
• 第四章 STR基因分型實(shí)驗(yàn)49-75
• 1. 材料和方法49-58
• 1.1 材料49-50
• 1.1.1 主要試劑49-50
• 1.1.2 主要儀器及軟件50
• 1.2 方法50-58
• 1.2.1 口腔拭子DNA的提取50
• 1.2.2 AmpFlSTR~(?) Identifiler~(TM) PCR Amplification Kit的使用50-51
• 1.2.3 PowerPlex~(?) 16 System試劑盒使用51-52
• 1.2.4 Goldeneye~(TM) DNA身份鑒定系統(tǒng)20A試劑盒的使用52-54
• 1.2.5 樣品的電泳54-55
• 1.2.6 數(shù)據(jù)分析55-58
• 2. 結(jié)果58-74
• 2.1 口腔拭子的STR分型結(jié)果58-59
• 2.2 10U phi29酶組和20U phi29酶組MDA擴(kuò)增產(chǎn)物STR分型結(jié)果59-60
• 2.3 不同溫度下擴(kuò)增產(chǎn)物的STR分型結(jié)果60-64
• 2.4 改良MDA法和Sigma WGA法擴(kuò)增不同起始濃度9947A STR分型結(jié)果64-71
• 2.5 指紋DNA提取擴(kuò)增的STR分型結(jié)果71-74
• 3. 討論74-75
• 第四章 總結(jié)75-76
• 致謝76-77
• 參考文獻(xiàn)77-81
• 附錄81-87
• 附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表論文目錄81-82
• 附錄B 空白對(duì)照STR基因分型圖82-83
• 附錄C 志愿者口腔拭子STR基因分型圖83-87

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 顧麗華,平原,閻建軍,王德明,陳連康,顧明波,鄭秀芬,周懷谷,江濤,李h，

本文編號(hào)：763070