本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用細(xì)胞色素氧化酶亞基I鑒定蠅科常見嗜尸性蠅種

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【摘要】：背景： 法醫(yī)昆蟲學(xué)(Forensic entomology)是法醫(yī)學(xué)和節(jié)肢動物科學(xué)在廣泛領(lǐng)域結(jié)合并相互影響的一門新型交叉邊緣性學(xué)科,應(yīng)用范圍上涉及刑事、民事、行政案件,為法醫(yī)實際檢案提供技術(shù)幫助。主要研究方法是對在尸體內(nèi)、尸體表面或尸體附近采集到的昆蟲標(biāo)本,進(jìn)行檢驗、鑒定、分類后,明確昆蟲種類或確定某一昆蟲生長發(fā)育狀態(tài),結(jié)合該昆蟲在尸體上的生態(tài)群落演替及生活習(xí)性,幫助法醫(yī)完成死亡時間(postmortem interval, PMI)推斷。在應(yīng)用尸體上昆蟲群落演替規(guī)律解決相關(guān)法醫(yī)學(xué)問題的前提是鑒定昆蟲的種類。 機(jī)體死后不久,就會有大量嗜尸性蠅類到達(dá)并產(chǎn)卵,因此,測定尸體上嗜尸性蠅類的種類及其蛹的發(fā)育齡期是估計死亡時間(PMI)的重要昆蟲學(xué)資料。然而昆蟲種類繁多,只有經(jīng)過專門訓(xùn)練的專業(yè)人員才能掌握某類群的形態(tài)學(xué)鑒別要點(diǎn)。利用形態(tài)學(xué)特征鑒定蠅類的方法不能得到很好的普及,也給法醫(yī)工作者日常實際檢案帶來很大障礙。 近年發(fā)展起來的分子生物學(xué)技術(shù)便很好的解決了這一難題,本研究通過運(yùn)用自行設(shè)計的線粒體細(xì)胞色素氧化酶亞基Ⅰ(co Ⅰ)引物,從基因水平探索昆蟲種類的鑒別。使昆蟲種類鑒定方法更為準(zhǔn)確和科學(xué)。 目的： 應(yīng)用272bp的細(xì)胞色素氧化酶亞基Ⅰ(co Ⅰ)的基因片段對蠅科常見嗜尸性蠅種進(jìn)行種類鑒定,為建立地區(qū)嗜尸性昆蟲基因庫積累數(shù)據(jù),為蠅科嗜尸性蠅種在實踐中進(jìn)行死亡時間推斷奠定基礎(chǔ)。 方法： 2009-2011年在湖南省及周邊省份應(yīng)用家兔尸體誘捕嗜尸性蠅科成蟲,與本教研室前期(2007-2008)捕獲的嗜尸性蠅科樣本進(jìn)行匯總、挑選,邀請湖南省農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲學(xué)專家對挑選出的樣本進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。利用十六烷基三甲溴化銨(CTAB)法提取樣本DNA,瓊脂糖凝膠電泳檢測提取效果。Epoendorf梯度PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增,PCR膠回收試劑盒純化。純化產(chǎn)物送往華大基因(武漢)進(jìn)行序列測性；MEGA4軟件包進(jìn)行序列分析及構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。 結(jié)果： 通過對DNA COI片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測序的方法,能有效檢測出嗜尸性蠅科樣本的基因序列,利用MEGA4.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。得出與形態(tài)學(xué)鑒定一致的種類,鑒定出4屬5種蠅類的種屬關(guān)系：家蠅屬中家蠅；黑蠅屬中厚環(huán)黑蠅、斑踱黑蠅；腐蠅屬中廄腐蠅；螫蠅屬中廄螫蠅。 結(jié)論： DNA序列分析具有快速、簡便和精確的特點(diǎn),是目前分析進(jìn)化及系統(tǒng)發(fā)育研究中有效、可靠的方法,分子鑒定是對形態(tài)學(xué)鑒定方法上的一個有效補(bǔ)充,因此,mtDNA的272bp COI片段是鑒定蠅科常見嗜尸性蠅種的一個有效分子標(biāo)記。
【關(guān)鍵詞】：法醫(yī)昆蟲學(xué) 死亡時間推斷 線粒體DNA 細(xì)胞色素氧化酶亞基I 種屬鑒定
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：D919.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 技術(shù)路線11-12
• ~.略詞表12-13
• 前言13-15
• 第一章 材料與方法15-24
• 1.1 主要實驗試劑和儀器15-17
• 1.1.1 主要實驗試劑15
• 1.1.2 主要試劑配制15-17
• 1.1.3 主要儀器17
• 1.2 樣本來源和處理17-20
• 1.3 實驗方法與步驟20-24
• 1.3.1 DNA提取20-21
• 1.3.2 DNA質(zhì)量濃度和純度檢測21
• 1.3.3 瓊脂糖電泳檢測DNA提取效果21
• 1.3.4 PCR引物設(shè)計及PCR擴(kuò)增21-23
• 1.3.5 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物純化及測序23
• 1.3.6 序列分析和系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建23-24
• 第二章 結(jié)果24-38
• 2.1 形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果24-26
• 2.2 瓊脂糖電泳檢測mtDNA提取效果26-27
• 2.3 COI DNA基因測序結(jié)果27-32
• 2.4 種蠅科序列登錄NCBI數(shù)據(jù)庫搜索結(jié)果32
• 2.5 COI序列分析和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建結(jié)果32-35
• 2.6 通過COIDNA基因序列獲得的遺傳距離35-38
• 2.6.1 種間差異35-36
• 2.6.2 種內(nèi)差異36-37
• 2.6.3 兩兩種類種間差異百分比37-38
• 第三章 討論38-40
• 第四章 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 綜述45-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 致謝51-52
• 攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果52

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號：726598