發(fā)布時(shí)間：2017-08-14 06:03

  本文關(guān)鍵詞：恒溫下鹽酸嗎啡對(duì)絲光綠蠅幼蟲(chóng)的影響及法醫(yī)學(xué)意義

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【摘要】：目的:研究絲光綠蠅(Lucilia sericata)在嗎啡(morphine)作用下的發(fā)育變化情況,探索實(shí)驗(yàn)指標(biāo)與時(shí)間的規(guī)律性變化,從而為死后間隔時(shí)間(Postmortem interval,PMI)的推斷和法醫(yī)昆蟲(chóng)毒理學(xué)(forensic toxicologic entomology)提供參考依據(jù)。 方法: 在河北醫(yī)科大學(xué)校園內(nèi)以大鼠內(nèi)臟誘捕絲光綠蠅,帶回實(shí)驗(yàn)室,在培養(yǎng)箱內(nèi)連續(xù)飼養(yǎng),以第三代作為母代觀察其在嗎啡影響下的發(fā)育。本實(shí)驗(yàn)共使用家兔4只,隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組家兔經(jīng)耳緣靜脈注射生理鹽水1ml/kg,實(shí)驗(yàn)組家兔經(jīng)耳緣靜脈依次注射0.5倍、1.0倍、2.0倍致死劑量的嗎啡[1,2],給藥30min后將4只家兔處死,處死方法均為重?fù)羝湔聿垦杆僦滤�。取家兔的肌肉組織分別保存,對(duì)照組標(biāo)記為M0,實(shí)驗(yàn)組依照給藥濃度從小到大依次標(biāo)記為M1、M2、M3。設(shè)定生化培養(yǎng)箱溫度為28℃,相對(duì)濕度為75%,光照周期為12h:12h。用新鮮豬肝誘絲光綠蠅產(chǎn)卵,產(chǎn)卵時(shí)間記為零時(shí),將卵塊移至家兔的肌肉組織上飼養(yǎng)。幼蟲(chóng)孵出12小時(shí)后,每隔12小時(shí)留取標(biāo)本一次,每組每次留取20頭幼蟲(chóng),直至幼蟲(chóng)達(dá)到離食期。將每組每次留取的10頭幼蟲(chóng)用70℃熱水燙死,然后放入濃度為70%的酒精中保存;其余10頭幼蟲(chóng)用蒸餾水洗凈數(shù)次,濾紙吸干,置于-70℃冰箱保存?zhèn)溆谩?1頭咽骨形態(tài)學(xué)觀察及測(cè)定 從保存液中取出幼蟲(chóng)標(biāo)本后,吸干表面液體,放在培養(yǎng)皿上,用大頭針在幼蟲(chóng)腹部一側(cè)扎幾個(gè)小孔,放入10%的KOH溶液中消化內(nèi)部組織,24h后將幼蟲(chóng)從KOH溶液中取出,放在培養(yǎng)皿上用鑷子輕輕按壓幼蟲(chóng),直至將體內(nèi)已消化的組織排出。幼蟲(chóng)在清水中洗凈數(shù)遍后,在體視顯微鏡下分離出幼蟲(chóng)的頭節(jié),然后將頭咽骨進(jìn)行對(duì)稱分離標(biāo)本依次用30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%的酒精中逐級(jí)脫水,最后用二甲苯透明,顯微鏡下整姿后滴加拿大樹(shù)膠封片,置于陰涼處風(fēng)干。光學(xué)顯微鏡下觀察、拍照。利用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)對(duì)頭咽骨的口鉤及咽骨的面積、骨化面積和平均光密度等多項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。 2蛋白質(zhì)的測(cè)定 從-70℃冰箱中取出幼蟲(chóng)標(biāo)本,每組每日齡幼蟲(chóng)各取10頭,分別在液氮中充分研磨后加入500μl PBS(pH7.4)溶液,12000rpm離心10min,取上清即為粗提液。 取粗提液,根據(jù)Bradford比色法測(cè)定其OD值,標(biāo)準(zhǔn)曲線用0.5mg/ml牛血清蛋白制作,利用標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算出樣品中蛋白質(zhì)含量。各組頭咽骨的各項(xiàng)形態(tài)學(xué)指標(biāo)、蛋白質(zhì)含量均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,各組最大值或最小值間比較應(yīng)用單因素方差分析(one way ANOVA),分析結(jié)果由SPSS16.0軟件處理得出,以P0.05為顯著性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,應(yīng)用Excel程序作圖。 結(jié)果: 1頭咽骨形態(tài)學(xué)特征 1.1在恒定溫度下隨著幼蟲(chóng)的發(fā)育,絲光綠蠅幼蟲(chóng)頭咽骨的顏色變化依次為淡黃色、棕褐色、黑褐色,幾丁質(zhì)化程度不斷加強(qiáng),骨化的范圍不斷增大。絲光綠蠅幼蟲(chóng)無(wú)附口骨。 1.2在M0、M1、M2、M3組中,幼蟲(chóng)口鉤的面積隨時(shí)間的延長(zhǎng)呈階段性增加,齡期更替時(shí)變化顯著,尤以二、三齡期更替時(shí)最顯著。各組幼蟲(chóng)孵出12h時(shí)口鉤面積為最小,各組口鉤面積最小值之間無(wú)明顯差異(P0.05); M1、M2、M3組幼蟲(chóng)口鉤面積均于48h達(dá)到最大值,M0組于60h達(dá)到最大值, 各組幼蟲(chóng)口鉤面積達(dá)到最大值后,隨時(shí)間的延長(zhǎng)基本維持不變。幼蟲(chóng)口鉤的骨化面積和平均光密度的變化趨勢(shì)與口鉤面積變化趨勢(shì)相似,但骨化面積和平均光密度在一、二齡期內(nèi)的變化趨勢(shì)較口鉤面積的變化顯著。各組幼蟲(chóng)孵出12h時(shí)口鉤骨化面積和平均光密度均為最小;M0、M1、M2、M3各組口鉤的骨化面積和平均光密度達(dá)到最大值的時(shí)間分別為72h、60h、48h、48h。說(shuō)明隨著藥物濃度的增加幼蟲(chóng)生長(zhǎng)速度是增快的。 在供試的四組中,口鉤面積、口鉤骨化面積、口鉤平均光密度三項(xiàng)指標(biāo)各自最大值之間無(wú)明顯差異,說(shuō)明鹽酸嗎啡沒(méi)有對(duì)口鉤各項(xiàng)指標(biāo)的最大值產(chǎn)生顯著影響。 1.3在M0、M1、M2、M3組中,每組幼蟲(chóng)孵出12h時(shí)咽骨面積值為最小,各組最小值之間存在顯著性差異(P0.05),說(shuō)明在幼蟲(chóng)最初攝食的過(guò)程中藥物即對(duì)其產(chǎn)生了影響;隨著藥物濃度的增加咽骨面積也在增加。各組幼蟲(chóng)咽骨面積均于48h達(dá)到最大值,各組咽骨面積M0M1M2M3,咽骨面積最大值之間存在顯著性差異(P0.05)提示鹽酸嗎啡增加了幼蟲(chóng)的最大咽骨面積。 在M0、M1、M2、M3組中,每組幼蟲(chóng)孵出12h時(shí)咽骨骨化面積值均為最小,并且M0M1M2M3 ,各組骨化面積最小值之間存在顯著性差異(P0.05);幼蟲(chóng)咽骨骨化面積達(dá)到最大值的時(shí)間分別為120h、120h、96h、84h,說(shuō)明咽骨骨化面積的發(fā)育隨藥物濃度的增加而增快,濃度越高達(dá)到最大骨化面積的時(shí)間越短;同時(shí)分析數(shù)據(jù)顯示四個(gè)組中咽骨骨化面積最大值的變化關(guān)系為:M0M1M2M3,咽骨骨化面積最大值之間存在顯著性差異(P0.05),提示鹽酸嗎啡增大了幼蟲(chóng)最大骨化面積。幼蟲(chóng)咽骨骨化面積的變化趨勢(shì)與咽骨平均光密度的變化趨勢(shì)相同,二者隨幼蟲(chóng)發(fā)育時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)持續(xù)性增加的趨勢(shì),并一直保持到三齡結(jié)束,是推測(cè)PMI的理想指標(biāo)。 2蛋白質(zhì)含量的變化 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:蠅類幼蟲(chóng)的蛋白質(zhì)含量變化呈S型,是一個(gè)連續(xù)變化的過(guò)程。一齡、二齡增長(zhǎng)迅速,不同實(shí)驗(yàn)組蠅類幼蟲(chóng)隨著發(fā)育在三齡后變化均不明顯。四個(gè)組蛋白質(zhì)含量的變化趨勢(shì):M0=M1M2M3,且最大值之間存在顯著性差異(P0.05) ,提示隨著藥物濃度的增加使蠅幼蟲(chóng)的蛋白質(zhì)含量有所增加,并且鹽酸嗎啡使蠅幼蟲(chóng)的蛋白質(zhì)含量最大值有所增加。 結(jié)論: 1幼蟲(chóng)口鉤的面積、平均光密度和骨化面積隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增加,齡期更替時(shí)變化顯著,但進(jìn)入三齡達(dá)到最大值后變化不明顯。鹽酸嗎啡對(duì)口鉤各項(xiàng)指標(biāo)的影響不明顯。 2幼蟲(chóng)咽骨面積的變化趨勢(shì)與口鉤面積的變化趨勢(shì)相同。隨時(shí)間的延長(zhǎng)咽骨骨化面積和平均光密度呈現(xiàn)持續(xù)性增加的趨勢(shì),并一直保持到三齡結(jié)束,是推測(cè)PMI的理想指標(biāo)。 3鹽酸嗎啡增大了咽骨面積、咽骨骨化面積、咽骨平均光密度三項(xiàng)指標(biāo)的最大值;在藥物影響下,咽骨骨化面積和咽骨平均光密度的發(fā)育隨藥物濃度的增加而增快,濃度越高達(dá)到咽骨骨化面積最大值和咽骨平均光密度最大值的時(shí)間越短。 4蠅類幼蟲(chóng)的蛋白質(zhì)含量變化呈S型,是一個(gè)連續(xù)變化的過(guò)程。各組蛋白質(zhì)含量在幼蟲(chóng)攝食初期隨時(shí)間的延長(zhǎng)呈增長(zhǎng)趨勢(shì),當(dāng)?shù)竭_(dá)最大值后變化不明顯。但各組到達(dá)最大值的時(shí)間隨著藥物濃度的增加而縮短,并且鹽酸嗎啡增大了幼蟲(chóng)體內(nèi)蛋白質(zhì)含量的最大值。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。
【關(guān)鍵詞】：法醫(yī)昆蟲(chóng)學(xué) 法醫(yī)昆蟲(chóng)毒理學(xué) 絲光綠蠅 死后間隔時(shí)間(PMI) 頭咽骨 骨化面積 平均光密度
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：D919
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-16
• 結(jié)果16-19
• 附圖19-33
• 附表33-34
• 討論34-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述 尸源性蠅蛆在毒物和毒品鑒定中的應(yīng)用42-50
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 致謝50-51
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷51
• 一、一般情況51
• 二、個(gè)人經(jīng)歷51
• 三、發(fā)表論文51
• 四、獲獎(jiǎng)情況51

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