本文關(guān)鍵詞：大鼠死后心肌肌紅蛋白mRNA的含量變化與死亡時間的相關(guān)性研究

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【摘要】： 研究背景及目的:法醫(yī)學研究領(lǐng)域中,死亡時間(Postmortem interval,PMI)的推斷一直以來都是法醫(yī)學者們致力研究的重點。隨著分子生物信息學技術(shù)的飛速發(fā)展,有關(guān)法醫(yī)病理學方面的研究逐漸向分子生物信息學領(lǐng)域邁進,近幾年已取得了可喜的研究成果。近年來刑事犯罪案件頻繁發(fā)生,且作案手段千變?nèi)f化,法醫(yī)實踐人員面對的環(huán)境異常復(fù)雜,影響檢驗因素眾多,故尋求更科學更靈敏的可檢測指標成為目前法醫(yī)界亟待解決的難題。實踐中,雖然皮膚等表層器官一直被認為是法醫(yī)人員檢驗取材的首選,但在一些腐尸、碎尸案中,方便取材的器官因眾多外界因素大部分已經(jīng)失去了檢測價值,然而心臟是機體內(nèi)器官中尸體腐敗后保存相對完整的。近幾年越來越多的專家致力于心臟器官的研究,臨床醫(yī)學專家已研究證實,肌紅蛋白(Myoglobin,Mb)可高靈敏性的反應(yīng)心肌損傷情況,可作為急性心肌梗死(AMI,Acute myocardial infarction)早期的診斷,有很大的臨床應(yīng)用價值。但目前關(guān)于Mb的研究大多集中在臨床疾病治療方面,法醫(yī)學界對此研究較少。Mb是一個攜氧低分子呼吸性蛋白質(zhì),心肌含量極為豐富,主要為組織攝取和貯存氧。法醫(yī)學工作中時常會遇到碎尸等方面的案件,鑒于法醫(yī)工作者的實踐需要,本實驗通過動物實驗?zāi)Ｐ?完全隨機獨立分組,提取大鼠心肌組織,利用RT-PCR技術(shù)檢測大鼠死后心肌Mb mRNA在體與離體兩種狀態(tài)下各相應(yīng)時間段的降解程度和其規(guī)律性,期望找到一種更為科學有效的推斷PMI的方法。 方法:在本實驗中我們?nèi)〗】登鍧峉D大鼠100只(重慶醫(yī)科大學實驗動物中心提供),重量為220g～240g,雌雄不限,按照大鼠心肌組織原位體內(nèi)處理和取出離體后處理兩種方式隨機獨立分為兩個實驗組:在體實驗保存組和離體實驗保存組,每個實驗組又分為0h、lh、2h、4h、6h、8h、12h、24h、48h、72 h, 10個時間組,每組5只,大鼠斷頸處死后立即置于(25±1)℃,65%～70%溫濕度控制系統(tǒng)中,嚴格依照實驗設(shè)計進行操作。利用perimer 5.0軟件設(shè)計PCR引物,總RNA提取試劑盒提取RNA,RT-PCR試劑盒對RNA進行逆轉(zhuǎn)錄、擴增,得到產(chǎn)物,電泳分離,于凝膠成像儀器上記錄成像,并采用spss17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。 結(jié)果:利用RT-PCR技術(shù)逆轉(zhuǎn)錄Mb mRNA,擴增,在瓊脂糖凝膠上顯示電泳條帶,于凝膠成像儀上觀察記錄結(jié)果如下: (1)在體實驗保存組與離體實驗保存組Mb mRNA均隨著死亡時間的延長逐漸降低,呈時序變化。 (2)在體實驗保存組Mb mRNA到死后72小時時已檢測不出;而離體實驗保存組到24小時后就已檢測不出。 (3)在體實驗保存組和離體實驗保存組兩種狀態(tài)下Mb mRNA的降解情況比較,離體組降解速度要更快一些。 結(jié)論:利用RT-PCR技術(shù)檢測死后大鼠心肌Mb mRNA的降解情況,通過spss17.0統(tǒng)計學軟件分析得出結(jié)論如下: (1)死后大鼠心肌Mb mRNA降解呈時序性變化,隨著死亡時間的延長逐漸遞減,可作為PMI的一個檢測指標。 (2)研究發(fā)現(xiàn)Mb只在前24小時內(nèi)有明顯的降解趨勢,在24小時至72小時則無明顯變化,故此指標更適宜于PMI的早期推斷。 (3)Mb mRNA的降解呈時間相關(guān)性,但在體與離體條件下的降解規(guī)律并不是完全一致。
【關(guān)鍵詞】：法醫(yī)病理學 死亡時間 心肌肌紅蛋白 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：D919.1
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 1 材料與方法14-21
• 2 結(jié)果21-25
• 3 討論25-29
• 全文總結(jié)29-30
• 參考文獻30-33
• 文獻綜述33-43
• 致謝43-44
• 攻讀學位期間發(fā)表的文章44

【參考文獻】

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本文編號：661968