本文關(guān)鍵詞：批量煙蒂STR檢驗(yàn)方法建立及應(yīng)用研究

  更多相關(guān)文章： DNA STR 批量提取 煙蒂 自動(dòng)化工作平臺(tái)

【摘要】：DNA證據(jù)已成為法庭科學(xué)揭示罪犯、認(rèn)定嫌疑、定罪量刑最有效的技術(shù)手段之一。犯罪分子反偵察手段日益狡猾,指紋等運(yùn)用時(shí)間較久的痕跡物證常被有意識(shí)地銷(xiāo)毀和破壞。隨著DNA檢驗(yàn)技術(shù)的逐步成熟與基層現(xiàn)場(chǎng)勘察人員對(duì)DNA檢驗(yàn)技術(shù)認(rèn)識(shí)的加深,DNA檢驗(yàn)技術(shù)在刑事案件中的運(yùn)用進(jìn)一步廣泛。除了兇殺案、強(qiáng)奸案等大要及疑難案件外,在多發(fā)性案件尤其是盜竊案中,DNA檢驗(yàn)技術(shù)也開(kāi)始發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。特別是煙蒂,作為常見(jiàn)的脫落細(xì)胞生物檢材,由于提取方便、包裝簡(jiǎn)單、檢驗(yàn)結(jié)果也較好,得到現(xiàn)場(chǎng)勘察人員的青睞,統(tǒng)計(jì)廣州市公安局番禺區(qū)分局2008至2012年盜竊案現(xiàn)場(chǎng)的物證提取,其中提取到煙蒂的案例占總案例數(shù)的60%。同時(shí)其他來(lái)自人體的脫落細(xì)胞類(lèi)檢材,由于常易被忽視或根本無(wú)法消除,在法醫(yī)實(shí)際工作中,90%以上的案件遇到脫落細(xì)胞類(lèi)痕量生物檢材。除了部分檢材現(xiàn)有檢驗(yàn)技術(shù)無(wú)法得出有效STR分型等原因外,DNA實(shí)驗(yàn)室人力資源的緊缺與檢驗(yàn)水平的個(gè)體差異也逐步浮上水面。如何走出不同載體脫落細(xì)胞分類(lèi)手工提取的負(fù)累,走出脫落細(xì)胞類(lèi)生物檢材提取速度的瓶頸,提高脫落細(xì)胞類(lèi)生物檢材的檢驗(yàn)效率；同時(shí)減少人為因素的干預(yù),達(dá)到規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化的要求,成為了DNA發(fā)展的另一個(gè)主要突破點(diǎn)。案件較多的DNA實(shí)驗(yàn)室對(duì)使用自動(dòng)化的工作平臺(tái)結(jié)合商品化磁珠試劑盒批量提取常規(guī)生物檢材要求十分迫切,比如作為DNA數(shù)據(jù)庫(kù)的常規(guī)樣本,群死群傷案件發(fā)現(xiàn)的血痕、侯時(shí)性案件等。煙蒂等脫落細(xì)胞檢材數(shù)量較多,開(kāi)始采用大型的自動(dòng)化工作平臺(tái)進(jìn)行批量操作的嘗試,并在很多重大且脫落細(xì)胞檢材繁多的案件中可以又好又快的提供線索和證據(jù),但在基層、一線單位,脫落細(xì)胞類(lèi)生物檢材的DNA提取,大部分DNA實(shí)驗(yàn)室為了保證提取DNA效果仍然以手工提取為主、或者手工提取結(jié)合一些半自動(dòng)化的純化儀,比如Maxwell 16核酸純化儀等。因此使用一些自動(dòng)化工作站結(jié)合一些商品化試劑盒進(jìn)行批量提取成為一個(gè)可行的嘗試。本課題利用核酸提取工作站epMotion(?) 5075結(jié)合MagAttract(?) DNA Mini M48 Kit試劑盒通過(guò)對(duì)常見(jiàn)的脫落細(xì)胞檢材-煙蒂的各種狀態(tài)進(jìn)行系統(tǒng)的研究,初步建立一個(gè)適合煙蒂的提取的流程,同時(shí)對(duì)手工chelex-100提取、核酸提取工作站epMotion 5075結(jié)合DNA IQTM、MagAttract(?) DNA Mini M48 Kit試劑盒等提取方法以及核酸提取工作站epMotion 5075結(jié)合MagAttract(?) DNA Mini M48 Kit試劑盒DNA提取DNA產(chǎn)物使用各種PCR擴(kuò)增體系擴(kuò)增效果進(jìn)行了比較研究,初步建立煙蒂脫落細(xì)胞檢材批量檢驗(yàn)方法,運(yùn)用到實(shí)際案件中的煙蒂的批量檢驗(yàn)。同時(shí)嘗試將核酸提取工作站epMotion 5075結(jié)合MagAttract(?) DNA Mini M48 Kit試劑盒批量提取煙蒂的方法運(yùn)用到微量脫落細(xì)胞的檢驗(yàn)中,建立一個(gè)適合基層批量提取脫落細(xì)胞DNA的技術(shù)流程,提高脫落細(xì)胞STR檢驗(yàn)的檢驗(yàn)時(shí)效。一、批量煙蒂提取的方法學(xué)的比較利用志愿者提供的“雙喜”牌煙蒂30枚,結(jié)合手工chelex-100提取、核酸提取工作站epMotion 5075結(jié)合DNA IQTM、MagAttract(?) DNA Mini M48 Kit試劑盒的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較,明確建立核酸提取工作站epMotion 5075結(jié)合MagAttract(?) DNA Mini M48 Kit試劑盒批量提取煙蒂脫落細(xì)胞的可行性,初步建立一個(gè)適合煙蒂脫落細(xì)胞提取的流程。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：利用核酸提取工作站epMotion(?) 5075結(jié)合MagAttract(?) DNAMini M48 Kit試劑盒批量提取煙紙的過(guò)程中,不同的裂解體系,只要保證煙紙能夠完全浸泡在裂解液里,均可以得到完整的DNA分型；裂解30分鐘以上均得到了完整的DNA分型。在裂解過(guò)程中,是否封膜對(duì)裂解的效果不存在明顯的影響,在裂解過(guò)程中不封膜也沒(méi)有發(fā)生檢材間的相互污染。結(jié)果顯示,3種提取方法中,chelex-100法提取的DNA含量平均值為0.8307ng/μl,在三種方法中最高,IQTM系統(tǒng)提取的DNA含量平均值為0.4875 ng/μl,含量最低。M48體系的DNA含量平均值為0.4990ng/μl,在兩者之間。但檢測(cè)的效果,M48體系的檢測(cè)效果最好,檢出12個(gè)位點(diǎn)以上的有29例,IQTM系統(tǒng)其次,27例,chelex-100法最低,只有26例。結(jié)果顯示,M48 Kit系統(tǒng)結(jié)合核酸提取工作站epMotion(?)5075提取煙蒂脫落細(xì)胞優(yōu)于手工chelex-100提取及核酸提取工作站epMotion 5075結(jié)合DNA IQTM。二、不同品牌煙蒂STR分型效果比較利用收集志愿者提供的廣東生產(chǎn)的六個(gè)品牌的煙蒂600枚進(jìn)行批量提取、并從中隨機(jī)抽取40枚收集志愿者提供的煙蒂分別放置1周、7周、10周后進(jìn)行批量提取,將不同煙蒂的效果比較,并根據(jù)檢驗(yàn)效果對(duì)提取的程序進(jìn)行優(yōu)化,進(jìn)一步完善批量提取煙蒂脫落細(xì)胞的工作站提取體系。中高檔的煙蒂的煙紙因?yàn)樽鲞^(guò)防滲透處理,滲透性較差,在轉(zhuǎn)移速度為150ul/s及100ul/s的時(shí)候,有92例及80例STR基因座檢出數(shù)在12個(gè)以下,而在轉(zhuǎn)移速度為50ul/s的時(shí)候,均檢出了12個(gè)以上的STR的位點(diǎn)。而滲透性較好的低檔煙蒂的煙紙,以上三種轉(zhuǎn)移速度均檢出了12個(gè)以上的STR的位點(diǎn)。因此,對(duì)于滲透性較差的載體,可以適度的降低轉(zhuǎn)移裂解液的速度,以避免或減少堵塞槍頭的機(jī)會(huì)。低檔和中檔煙蒂及高檔雙喜逸品的煙蒂均檢出12個(gè)以上的STR位點(diǎn)的基因型,而高檔五葉神的煙蒂煙紙有8例檢出的位點(diǎn)為9-12個(gè)STR位點(diǎn)之間,原因?yàn)?五葉神的煙蒂煙紙有大量的色素溢出。隨機(jī)抽取30例以上六個(gè)品牌的15個(gè)基因座中平均片段大小區(qū)間在101.68-190.83的D19S433、D3S1358、D8S1179、 D6S1043和平均片段大小區(qū)間在255.26-359.29的D7S820、D18S51、CSF1PO、 D2S1338的峰高的平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì),五葉神煙蒂的大、小片段的峰高比值相對(duì)較其他五個(gè)品牌為低,說(shuō)明存在一定的擴(kuò)增抑制。隨機(jī)抽取30例五葉神煙蒂一次、二次洗滌的結(jié)果進(jìn)行比較,二次洗滌后雖然大、小片段平均峰值的比值增加了,但檢出的STR位點(diǎn)的平均峰值確有所降低。在增加洗滌次數(shù)的情況下,可以進(jìn)一步的去除抑制物的濃度,但對(duì)DNA的提取濃度有一定的影響,因此需要綜合考慮,結(jié)合樣本的條件設(shè)計(jì)合適的提取程序,進(jìn)行批量提取。為了進(jìn)一步減少載體對(duì)批量提取的影響,根據(jù)不同的生物檢材的特點(diǎn)對(duì)批量提取的程序進(jìn)行微調(diào),不失是一個(gè)解決問(wèn)題的方法。三、三種擴(kuò)增體系STR分型效果比較利用收集志愿者提供的100枚煙蒂利用核酸提取工作站epMotion(?)5075結(jié)合MagAttract(?) DNA Mini M48 Kit試劑盒批量提取的DNA產(chǎn)物利用使用sino-filer、 PowerPlex.21、AGCU EX22 STR擴(kuò)增系統(tǒng)進(jìn)行分型一致性的研究。結(jié)果顯示,以上100例利用核酸提取工作站epMotion(?)5075結(jié)合MagAttract(?) DNA Mini M48 Kit提取試劑盒批量提取的煙蒂,使用sino-filer、PowerPlex.21、 AGCU EX22 STR擴(kuò)增系統(tǒng)檢出的相同的15個(gè)str位點(diǎn)的基因座分型完全一致、無(wú)發(fā)生位點(diǎn)漏擴(kuò)或缺失。使用三個(gè)不同的擴(kuò)增體系相同生物檢材的相同str位點(diǎn)的峰高、峰面積基本一致。雜合子兩峰的峰高均未出現(xiàn)PHR0.5的基因座,峰值均衡,短片段、長(zhǎng)片段不存在明顯不均衡擴(kuò)增。因此核酸提取工作站epMotion(?)5075結(jié)合MagAttract(?) DNA Mini M48 Kit提取試劑盒可以較好地解決由于使用者的個(gè)人原因和檢材的質(zhì)地、檢材的提取送檢方式的不同導(dǎo)致不同類(lèi)型甚至同一類(lèi)型的不同檢材提取的DNA量非常懸殊的STR分型難題,特別適于自動(dòng)化提取生物檢材的DNA提取。綜上所述,核酸提取工作站epMotion(?) 5075結(jié)合MagAttract(?) DNA Mini M48 Kit提取試劑盒是批量提取煙蒂檢驗(yàn)較理想的方法。四、拓展應(yīng)用對(duì)廣州市公安局番禺區(qū)分局日常檢案微量體表脫落細(xì)胞200例使用核酸提取工作站epMotion(?)5075結(jié)合MagAttract(?) DNA Mini M48 Kit提取試劑盒的檢驗(yàn)效果與2008年以來(lái)廣州市公安局番禺區(qū)分局日常檢案微量體表脫落細(xì)胞chelex-100法提取的結(jié)果、2010年以來(lái)廣州市公安局番禺區(qū)分局日常檢案微量體表脫落細(xì)胞Maxwell 16核酸純化儀提取的結(jié)果進(jìn)行比較,使用epMotion(?) 5075結(jié)合MagAttract(?) DNA Mini M48 Kit試劑盒批量提取微量脫落細(xì)胞的總的成功率與手工提取結(jié)合Maxwell 16核酸純化儀純化的成功率相似,但在檢驗(yàn)效率及規(guī)范化等方面均優(yōu)于手工提取結(jié)合Maxwell 16核酸純化儀純化的方法。同時(shí)使用epMotion(?) 5075結(jié)合MagAttract(?) DNA Mini M48 Kit試劑盒批量提取微量脫落細(xì)胞的成功率高于手工chelex-100法提取。使用epMotion(?) 5075結(jié)合MagAttract(?) DNA Mini M48 Kit試劑盒批量提取煙蒂的方法同樣適用微量檢材的提取,可以在公安機(jī)關(guān)的基層DNA實(shí)驗(yàn)室推廣,對(duì)提高基層DNA實(shí)驗(yàn)室微量檢材的檢驗(yàn)效率,促進(jìn)公安機(jī)關(guān)的基層DNA實(shí)驗(yàn)室的自動(dòng)化、規(guī)范化檢驗(yàn)具有一定的價(jià)值。結(jié)合實(shí)際案例,進(jìn)一步證明使用核酸提取工作站epMotion(?) 5075結(jié)合MagAttract(?) DNA Mini M48 Kit提取試劑盒在實(shí)際工作中具有可行性。
【關(guān)鍵詞】：DNA STR 批量提取 煙蒂 自動(dòng)化工作平臺(tái)
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：D919
【目錄】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-15
• 前言15-21
• 第一章 批量煙蒂提取的方法學(xué)的比較21-38
• 1.1 材料21
• 1.2 方法21-28
• 1.3 結(jié)果28-35
• 1.4 討論35-38
• 第二章 不同品牌煙蒂STR分型效果比較38-50
• 2.1 材料38
• 2.2 方法38-40
• 2.3 結(jié)果40-47
• 2.4 結(jié)論47-50
• 第三章 三種擴(kuò)增體系STR分型效果比較50-58
• 3.1 材料50
• 3.2 方法50-53
• 3.3 結(jié)果53-57
• 3.4 結(jié)論57-58
• 第四章 拓展應(yīng)用效果58-69
• 4.1 材料58
• 4.2 方法58-60
• 4.3 結(jié)果60-64
• 4.4 結(jié)論64-65
• 4.5 案例應(yīng)用65-69
• 參考文獻(xiàn)69-74
• 在讀碩士期間發(fā)表的論文74-75
• 中英文縮略詞表75-76
• 致謝76-77

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 路鏡玉,梁英,劉戰(zhàn)強(qiáng),馮中文,劉莊朝;法醫(yī)生物檢材管理存在的問(wèn)題及改進(jìn)辦法的探討[J];刑事技術(shù);2003年04期

2 任宏;李健;孫耀東;陳月勇;;微量生物檢材提取2例[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2006年02期

3 王海生;王錕;彭皓明;;淺議生物檢材的來(lái)源及與犯罪的關(guān)系[J];刑事技術(shù);2010年05期

4 陳玲妹,陳衛(wèi)東,郅惠珠;反相高效液相色譜法測(cè)定生物檢材中的溴敵隆[J];中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志;1994年01期

5 盧延旭,孫雙龍,李宜春,姚麗娟,鄧小軍,依偉力,牛文有,溫智勝;馬錢(qián)子中毒生物檢材的毛細(xì)管電泳法分析[J];中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志;2001年04期

6 王朝虹,何毅,胡春華,張繼宗;生物檢材中蒙藥那如-3號(hào)的檢驗(yàn)[J];中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志;2002年04期

7 李樸,周海梅,馬錦琦;應(yīng)用酶解-氣質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定生物檢材中安定的含量[J];洛陽(yáng)醫(yī)專(zhuān)學(xué)報(bào);2002年03期

8 劉克林,沈偉峰,張春水,周淑光,白燕平,鄒洪,朱玉軍,李文君,王學(xué)琳;腐敗生物檢材中毒物毒品檢測(cè)幾種新技術(shù)的應(yīng)用介紹[J];刑事技術(shù);2002年03期

9 何柏芳;樓迪棟;;降解生物檢材遺傳標(biāo)記檢測(cè)的研究進(jìn)展[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2006年02期

10 李勇軍;王大利;，

本文編號(hào)：538869