【摘要】： 載脂蛋白E(apolipoprotein E, apo E )和β淀粉樣前體蛋白(beta-amyloid precursor protein,β-APP)在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、功能的穩(wěn)定及損傷后修復(fù)中都起到重要的作用。目前國內(nèi)外對此報道相對較少,且尚未見自由落體撞擊致腦損傷后apo E和β-APP表達規(guī)律的研究報道。為了進一步闡明其在創(chuàng)傷性腦損傷中的作用和地位,探討在早期腦損傷時間推斷的應(yīng)用價值,本課題對大鼠中度腦挫傷模型進行更深入地研究。 本課題選用健康成年雄性SD大鼠,采用改進的Edward自由落體撞擊儀復(fù)制中度腦挫傷模型,通過常規(guī)蘇木素-伊紅染色技術(shù)(hematoxylin and eosin, HE)對大鼠中度腦挫傷后14d內(nèi)繼發(fā)性腦損傷的病理學(xué)改變、apo E和β-APP的時序及空間分布特征進行光鏡觀察,同時運用免疫組織化學(xué)鏈霉素抗生物素蛋白過氧化酶連接法(Streptavidin Peroxidase Conjunction Method, SP),并結(jié)合計算機圖象分析技術(shù),對apo E和β-APP表達變化的規(guī)律與腦損傷時間的關(guān)系進行定量分析。 實驗組用自由落體撞擊法形成大腦右頂葉中度腦挫傷后,按不同的預(yù)定時間段(0.5h、2h、6h、12h、24h、3d、7d和14d,)分批處死動物(每個時間段取大鼠5只)并立即取出全腦置于4%多聚甲醛溶液(4℃)中固定;假性損傷組經(jīng)0.4%戊巴比妥鈉(用量為:1ml/kg)麻醉后僅行開顱手術(shù)而不行落體撞擊,并于術(shù)后3d處死、取腦;死后損傷組于處死后1h行落體撞擊。各組標本均在腦挫傷灶中心旁開2mm處,冠狀切取挫傷灶前、后端的腦組織。標本經(jīng)取材制片后作apo E和β-APP免疫組化染色觀察,同時行HE染色對照。利用計算機圖象分析技術(shù),定量測定免疫組化染色切片的陽性細胞平均光密度、陽性細胞百分比及陽性細胞數(shù)。所得數(shù)據(jù)用SAS8.0統(tǒng)計學(xué)軟件包進行分析。 實驗結(jié)果顯示:(1)腦損傷后0.5h組,腦皮質(zhì)神經(jīng)元apo E出現(xiàn)陽性表達,3d達到高峰,隨后下降;腦損傷后0.5h組,在海馬區(qū)出現(xiàn)apo E強陽性反應(yīng);CA1區(qū)在傷后3d達到高峰,而CA2～CA4區(qū)在24h達到高峰,隨后逐漸下降;海馬區(qū)apo E免疫染色強度依次為:CA3CA4CA2CA1。(2)皮質(zhì)內(nèi)β-APP在腦損傷后表達呈一定波動性,0.5h表達明顯增加后,逐漸下降,12h降至最低,低于對照組,隨后再次出現(xiàn)表達增加,3d達高峰;海馬CA1區(qū)在腦損傷后24hβ-APP表達開始逐漸下降,3d降至最低,而CA2～CA4區(qū)僅在3d組較對照組顯著降低,14d均回到對照組水平;齒狀回(DG)內(nèi)β-APP在腦損傷后12h低于對照組。 本實驗結(jié)果表明:傷后0.5h即出現(xiàn)表達,因此apo E蛋白可作為腦損傷早期診斷一個新的敏感指標;對照組皮質(zhì)神經(jīng)元和海馬無apo E表達,而傷后才出現(xiàn)表達,也可為法醫(yī)學(xué)上鑒別生前和死后腦損傷提供依據(jù)。皮質(zhì)β-APP及apo E蛋白表達存在一定時續(xù)規(guī)律性,可望作為法醫(yī)學(xué)上推斷腦損傷時間的客觀指標之一。腦損傷后海馬內(nèi)β-APP表達較皮質(zhì)挫傷灶周圍變化不明顯,因此在法醫(yī)腦損傷時間推斷上的應(yīng)用意義不大,具體的作用機制有待進一步研究。
【圖文】：

.2 HE 染色：常規(guī)脫蠟至水，，蘇木精染色 15 分鐘，水洗 15 分鐘，伊紅復(fù)染 5 分鐘，酒精水，二甲苯透明，封片。.3 圖象分析和數(shù)據(jù)處理：在免疫組化染色切片的頂葉皮層挫傷灶周圍、海馬 CA1～CA4 區(qū)及齒狀回DG）（圖像采集部位及海馬分區(qū)見圖 1），各取 5 個視野（7953.7μ3。Ｓτ肕IAS-2000 高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)測量， apo E 選取陽性細胞百分比R)及平均光密度（AOD）兩項指標，β-APP 選用陽性細胞數(shù)（N）。用 SAS8.0計學(xué)軟件包對數(shù)據(jù)進行 Pearson 直線相關(guān)分析和方差分析，兩兩比較用 SNK驗。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：D919

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1 馬娟;陳吉麗;;早發(fā)冠心病與載脂蛋白B、載脂蛋白E基因多態(tài)性的關(guān)系[J];當代醫(yī)學(xué);2011年19期

2 陳q

本文編號：2532865