發(fā)布時(shí)間：2019-05-23 07:26

【摘要】： 前言 隨著醫(yī)學(xué)界對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷后分子病理學(xué)認(rèn)識(shí)的提高以及免疫組織化學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，人們從免疫組織化學(xué)角度，對(duì)腦挫傷與時(shí)間的關(guān)系做了大量的研究。由于受到檢材要求所限，在此方面的研究多為模擬腦挫傷的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，從而造成了理論研究與實(shí)際鑒定工作相“脫鉤”的現(xiàn)象。 目前，已有人分別應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)熱休克蛋白70(HSP70)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)和環(huán)氧合酶-2(COX2)在大鼠腦挫傷后的表達(dá)進(jìn)行了研究，結(jié)果表明這三項(xiàng)指標(biāo)的表達(dá)在傷后均呈現(xiàn)出一定的變化規(guī)律，但未見(jiàn)有人將HSP70、bFGF和COX2應(yīng)用于人腦挫傷時(shí)間推斷的研究。故本實(shí)驗(yàn)采用實(shí)際工作中的案例標(biāo)本，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色，，旨在了解人腦挫傷后HSP70、bFGF和COX2的表達(dá)，揭示其表達(dá)與人腦挫傷時(shí)間變化關(guān)系，同時(shí)觀察尸體解剖標(biāo)本與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)標(biāo)本免疫組織化學(xué)的差別，為腦挫傷時(shí)間判定實(shí)際鑒定工作提供一條可行的理論依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)材料與方法 1．實(shí)驗(yàn)分組。選擇1995-2001年因閉合性顱腦損傷死亡并伴有明顯大腦皮質(zhì)挫傷灶的35個(gè)案例，分成7個(gè)實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組選取非顱腦損傷且急性損傷致死5個(gè)案例，各組男女不限，年齡在19-58歲之間，平均年齡為38.09歲。 2．免疫組織化學(xué)染色方法。石蠟切片常規(guī)脫蠟至水；3％H_2O_2滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶；PBS沖洗；抗原修復(fù)；PBS沖洗；正常血清封閉；一抗，37℃1h；PBS沖洗；二抗，37℃30min；PBS沖洗；滴加 SP（或 SABC），37℃30min；PBS沖洗；DAB顯色后水洗；蘇木素復(fù) 染，脫水、透明、封片。 3．圖像分析與統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。應(yīng)用MOTICAM 1300圖像分析 儀，對(duì)免疫組織化學(xué)染色呈陽(yáng)性的細(xì)胞定量檢測(cè)其灰度值，然后在 SPSS 10．0 for Window軟件下進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ＊結(jié)構(gòu)型HSP70免疫組織化學(xué)染色。即刻死亡組HSpoo陽(yáng) 性神經(jīng)細(xì)胞灰度值最小，與其它各實(shí)驗(yàn)組相比有顯著差異（P＜ 0．01人隨挫傷時(shí)間的延長(zhǎng)，神經(jīng)細(xì)胞的 HSP70灰度值逐漸增大， 至20－27h組，HSpoo灰度值達(dá)最大，與其它各實(shí)驗(yàn)組（除10．5－ 11．sd組）相比有顯著差異（P＜O．01人 以后各實(shí)驗(yàn)組mn0 灰度值有所下降，10．5刁1．sd組HSP70灰度值又再次升高。 2．bFGF免疫組織化學(xué)染色。即刻死亡組hFGF陽(yáng)性神經(jīng)細(xì) 胞灰度值最小，與其它各實(shí)驗(yàn)組相比有顯著差異（P＜O．01人 10－14h組bFGF灰度值急劇增力（P＜0．0），以后bFGF灰度 值緩慢升高，至 10．5叫．sd組，灰度值達(dá)最大。 3．COXZ免疫組織化學(xué)染色。10－1均組 COXZ陽(yáng)性神經(jīng)細(xì) 胞的灰度值開(kāi)始顯著不久p＜｛一n，至排一月h組COXZ灰度值 達(dá)最｛ 鄉(xiāng)與其｛ 各實(shí)驗(yàn)主卜以一入了顯名差異（ ＜O．OU哆＊ 一＊卜組 和 2．5－3．sd組陽(yáng)性全月再度值開(kāi)步 升高，6。5－7．sd組陽(yáng)性細(xì) 胞灰度值達(dá)最大，與其他各實(shí)驗(yàn)組相比有顯著差異沖＜O．01廠 10．5－11．sd組未見(jiàn) COXZ 的表達(dá)。 討 論 1．HSpoo免疫組織化學(xué)染色結(jié)果分析。Seidbers等應(yīng)用 Western印跡發(fā)現(xiàn)8例腦外傷手術(shù)患者的受損腦組織的結(jié)構(gòu)型 HSP70與對(duì)照組相比沒(méi)有差異。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)人腦挫傷后結(jié)構(gòu)型 ·2· HSpoo的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，各實(shí)驗(yàn)組中，即刻死亡組神經(jīng)細(xì)胞 HSP70表達(dá)最強(qiáng)，HSpoo表達(dá)在損傷后 id顯著下降，以后隨著腦 挫傷時(shí)間的延長(zhǎng)而有所恢復(fù)，這與Seidbers的實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在較大 差異，原因是本實(shí)驗(yàn)案例的顱腦損傷程度較Seidbers的實(shí)驗(yàn)對(duì)象 更為嚴(yán)重，同時(shí)所采用的實(shí)驗(yàn)方法也不相同，所以，實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在 較大的差異。因此，可以用結(jié)構(gòu)型HSP70免疫組織化學(xué)染色推斷 人腦挫傷時(shí)間。 2．bFGF免疫組織化學(xué)染色結(jié)果分析。Finklestein等發(fā)現(xiàn)大 鼠腦損傷后五周，bFGF免疫活性顯著增加，其陽(yáng)性細(xì)胞大多數(shù)類 似于反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞。Frantschy等檢測(cè)大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng) 損傷后bFGF蛋白表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)在損傷灶周邊區(qū)的早期反應(yīng)kh 到7d）中增加的bFGF表達(dá)大多數(shù)存在于MAC陽(yáng)性細(xì)胞（巨噬細(xì) 胞和／或膠質(zhì)細(xì)胞）中。本實(shí)驗(yàn)即刻死亡組的陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞bFGF 表達(dá)最強(qiáng)，傷后lid內(nèi)隨時(shí)間的增加其表達(dá)不斷下降。本實(shí)驗(yàn) bFGF表達(dá)與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)差異的形成原因可能有以下幾個(gè)方面：①實(shí) 驗(yàn)對(duì)象的差異。②顱腦損傷程度不一致。③由于腦損傷后，挫傷 周邊區(qū)反應(yīng)性缺血、缺氧，細(xì)胞反應(yīng)性減低，從而抑制蛋白質(zhì)的合 成。因此，可以用bFGF免疫組織化學(xué)染色推斷人腦挫傷時(shí)間。 3．COXZ免疫組織化學(xué)染色結(jié)果分析。Str3SSS等人在大鼠外 傷性腦損傷后COXZ表達(dá)研究中發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)細(xì)胞COXZ免疫活性 于傷后Zh在4h和3d時(shí)升高，其中在24h顯著增加，于傷后7d返 回至對(duì)照組水平。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)人腦挫傷后COXZ的表達(dá)情況，結(jié) 果發(fā)現(xiàn)，重度顱腦損傷后 COXZ表達(dá)開(kāi)始升高，在傷后 id左右達(dá) 峰值，以后逐步下降，其表達(dá)變化規(guī)律同Str8SSS等人的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 基本一致。但本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)2．5－3．sd組和 6．5－7．sd組 COXZ表 達(dá)迅速下降，顯著低于對(duì)照組，傷后 11d，COXZ表達(dá)消失，造成此 種現(xiàn)象的
[Abstract]:foreword With the improvement of the molecular pathology and the progress of the immunohistochemical technique in the treatment of the central nervous system after the trauma of the central nervous system in the medical community, it is known from the angle of the immunohistochemistry, the brain contusion and the time. The relationship is a lot of research. Because of the limited requirements of the material, the research on this aspect is mostly the animal experiment to simulate the contusion of the brain, thus causing the theoretical research and the practical appraisal work. At present, the heat shock protein 70 (HSP70), the basic fibroblast growth factor (bFGF) and the cyclooxygenase-2 (C) The expression of OX2 in the rat brain contusion was studied. The results showed that the expression of these three indexes showed a certain change in the postburn, but the expression of HSP70 and bFGF was not found. And the expression of HSP70, bFGF and COX2 after the contusion of the human brain is known, the relationship between the expression of the expression and the time of the human brain contusion is disclosed, and the body solution is observed at the same time. The difference of the immunohistochemistry between the sample and the experimental specimen of the animal is the time of the brain contusion. Determine the actual qualification to provide a viable option The experimental materials and methods 1. The experimental materials and methods 1. The experimental group was selected. In 1995-2001,35 cases of closed brain injury and with significant cerebral cortex contusion were selected and divided into 7 experimental groups, and the control group was selected from the group of non-craniocerebral injury and acute cerebral cortex contusion. 5 cases of injury, male and female in each group The age ranged from 19 to 58 years with a mean age of 38.09 years.2. Immunohistochemistry staining. The paraffin sections were routinely dewaxed to water;3% H _ 2O _ 2 inactivates the endogenous peroxidase; PBS rinse; Antigens complex; PBS wash; normal serum closure;1-,37 & deg; C for 1 h; PBS wash;2-,3 7 鈩

本文編號(hào)：2483717