【摘要】： 目的:目前隨著刑事技術領域犯罪形式的多樣化,犯罪分子的作案手段提高及反偵查意識的加強,使得對犯罪嫌疑人的準確認定、對案(事)件的精確判定越來越困難,提高疑難生物物證(微量、降解、混合斑檢材)的證據(jù)能力是擺在法醫(yī)工作者面前的一個難題。短串聯(lián)重復序列(short tandem repeats,STRs)具有高度遺傳多態(tài)性,廣泛存在于人類基因組中,因其等位基因片段短,擴增成功率高,被廣泛應用于法醫(yī)學個體識別和親權鑒定,能夠解決大多數(shù)檢材的DNA分型和個體識別。但對于高度降解檢材應用常規(guī)STR技術及現(xiàn)有商品化試劑盒常得不到完整分型或分型失敗。美國9.11事件后提出的miniSTR技術通過將引物設計在更靠近核心重復序列的側翼區(qū),使PCR擴增產(chǎn)物比常規(guī)STR擴增產(chǎn)物大大縮短,可明顯提高高度降解DNA分型的成功率。美國、日本、西班牙等相繼報道了D1S1677,D2S441,D4S2364,D10S1248和D22S1045五個miniSTR基因座在本國人群的群體遺傳學數(shù)據(jù)及其法醫(yī)學應用。2005年,歐洲DNA分型工作組(EDNAP)建議將D10S1248,D2S441和D22S1045 3個miniSTR基因座加入歐洲DNA數(shù)據(jù)庫中,而我國相關報道較少并缺少群體遺傳學數(shù)據(jù)。本課題選取了D1S1627,D5S2500,D3S4529,D6S1017和D9S2157五個miniSTR基因座,調(diào)查其在中國河北漢族人群的群體分布,并探討其法醫(yī)學應用價值。,以期為將miniSTR技術應用于法醫(yī)實踐提供參考數(shù)據(jù)。 方法:本研究所用河北漢族健康無關個體的枸櫞酸鈉抗凝血125份,由河北血液中心提供。采用天根生化公司的血液基因組DNA提取試劑盒提取血液核基因組DNA。對所有樣本的五個miniSTR基因座進行PCR擴增,其中D1S1627,D5S2500兩個基因座復合擴增; D3S4529 , D6S1017 ,D9S2157基因座復合擴增。D6S1017,D3S4529基因座的上游引物5’端用VIC熒光標記;D5S2500,D6S1017基因座的上游引物用TAMRA熒光標記;D9S2157基因座上游引物用FAM熒光標記。PCR產(chǎn)物在ABI310基因分析儀上電泳分型,結果用Gene Mapper3.2軟件進行分析,計算基因頻率及遺傳多態(tài)性參數(shù)。將血液放置于夏季室外1周、2周、4周、8周,模擬自然環(huán)境DNA降解過程,提取其DNA,分別采用商品化STR試劑盒和本課題所選用的5個miniSTR分型體系進行分析,比較二者分型成功率。對某一案件中的尸體心臟、腎臟、肝臟、血液、肌肉、皮膚等組織臟器進行五個miniSTR基因座檢測,分析其是否具有組織同一性。從本鑒定中心日常檢案中隨機選取10例親子鑒定案例,進行5個miniSTR基因座的家系調(diào)查,評估其遺傳穩(wěn)定性。檢測5個miniSTR基因座在魚、豬、羊、牛中能否得到特異性擴增產(chǎn)物,分析其種屬特異性。將9947A DNA稀釋為1ng、0.5ng、0.25ng、0.125ng,檢測5個miniSTR基因座分型,評價其檢測靈敏度。 結果:構建了兩組熒光標記復合擴增5個miniSTR基因座的分型體系。應用該體系對河北漢族人群分布進行了調(diào)查,結果五個miniSTR基因座D1S1627, D5S2500 ,D3S4529,D6S1017和D9S2157被檢出5、5、5、6、8個等位基因,其等位基因頻率分布在0.0170~0.4260之間;檢出11、13、13、15、24種基因型,其基因型頻率分布在0.008265~0.347107之間。經(jīng)χ2檢驗,河北漢族群體五個miniSTR基因座的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。遺傳多態(tài)性參數(shù):D1S1627, D5S2500,D3S4529,D6S1017和D9S2157五個miniSTR基因座的雜合度(Ho)分別為0.769、0.795、0.803、0.725、0.792;個人識別率(DP)分別為0.815、0.867、0.873、0.900、0.921;非父排除率(PE)分別為0.542、0.590、0.605、0.468、0.584;多態(tài)性參數(shù)(PIC)分別為0.620、0.690、0.700、0.730、0.790。五個miniSTR基因座累積個人識別能力為0.9999753;累積非父排除率為0.9835846。模擬高度降解DNA樣本在五個miniSTR基因座中均得到了完整分型,而Identifiler STR試劑盒則表現(xiàn)為大片段等位基因丟失,顯示了miniSTR技術比常規(guī)STR試劑盒具有更高的分型成功率。對同一尸體骨骼、心臟、腎臟、肝臟、血液、肌肉、皮膚等組織臟器進行五個miniSTR基因座檢測,結果顯示這些組織中的基因型完全相同。10個家系調(diào)查的結果顯示,5個miniSTR基因座均未發(fā)現(xiàn)突變。5個miniSTR基因座在魚、豬、羊、牛均未檢測到特異性擴增產(chǎn)物。以0.125ng、0.25ng 9947A DNA為模板進行5個miniSTR基因座的擴增,均得到了清晰的分型圖譜。 結論:(1)獲得了D1S1627, D5S2500,D3S4529,D6S1017和D9S2157五個miniSTR基因座在河北漢族人群的群體遺傳學數(shù)據(jù),該5個基因座在河北漢族人群中具有較好的遺傳多態(tài)性,可應用于法醫(yī)學個人識別和親子鑒定。(2)構建了D1S1627,D5S2500,D3S4529,D6S1017和D9S2157五個miniSTR基因座兩組熒光標記復合擴增分型體系,該體系分型靈敏度達0.125ng~0.25ng,具有組織同一性,一定的種屬特異性,較好的遺傳穩(wěn)定性,在分析高度降解檢材時較常規(guī)STR試劑盒具有顯著優(yōu)勢,表明該體系在高度降解檢材的法醫(yī)學鑒定中有較高的應用價值。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：D919

【參考文獻】

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本文編號：2350678