發(fā)布時(shí)間：2018-11-23 06:51

【摘要】： 目的:目前隨著刑事技術(shù)領(lǐng)域犯罪形式的多樣化,犯罪分子的作案手段提高及反偵查意識(shí)的加強(qiáng),使得對(duì)犯罪嫌疑人的準(zhǔn)確認(rèn)定、對(duì)案(事)件的精確判定越來越困難,提高疑難生物物證(微量、降解、混合斑檢材)的證據(jù)能力是擺在法醫(yī)工作者面前的一個(gè)難題。短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeats,STRs)具有高度遺傳多態(tài)性,廣泛存在于人類基因組中,因其等位基因片段短,擴(kuò)增成功率高,被廣泛應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)個(gè)體識(shí)別和親權(quán)鑒定,能夠解決大多數(shù)檢材的DNA分型和個(gè)體識(shí)別。但對(duì)于高度降解檢材應(yīng)用常規(guī)STR技術(shù)及現(xiàn)有商品化試劑盒常得不到完整分型或分型失敗。美國(guó)9.11事件后提出的miniSTR技術(shù)通過將引物設(shè)計(jì)在更靠近核心重復(fù)序列的側(cè)翼區(qū),使PCR擴(kuò)增產(chǎn)物比常規(guī)STR擴(kuò)增產(chǎn)物大大縮短,可明顯提高高度降解DNA分型的成功率。美國(guó)、日本、西班牙等相繼報(bào)道了D1S1677,D2S441,D4S2364,D10S1248和D22S1045五個(gè)miniSTR基因座在本國(guó)人群的群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù)及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用。2005年,歐洲D(zhuǎn)NA分型工作組(EDNAP)建議將D10S1248,D2S441和D22S1045 3個(gè)miniSTR基因座加入歐洲D(zhuǎn)NA數(shù)據(jù)庫中,而我國(guó)相關(guān)報(bào)道較少并缺少群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù)。本課題選取了D1S1627,D5S2500,D3S4529,D6S1017和D9S2157五個(gè)miniSTR基因座,調(diào)查其在中國(guó)河北漢族人群的群體分布,并探討其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值。,以期為將miniSTR技術(shù)應(yīng)用于法醫(yī)實(shí)踐提供參考數(shù)據(jù)。 方法:本研究所用河北漢族健康無關(guān)個(gè)體的枸櫞酸鈉抗凝血125份,由河北血液中心提供。采用天根生化公司的血液基因組DNA提取試劑盒提取血液核基因組DNA。對(duì)所有樣本的五個(gè)miniSTR基因座進(jìn)行PCR擴(kuò)增,其中D1S1627,D5S2500兩個(gè)基因座復(fù)合擴(kuò)增; D3S4529 , D6S1017 ,D9S2157基因座復(fù)合擴(kuò)增。D6S1017,D3S4529基因座的上游引物5’端用VIC熒光標(biāo)記;D5S2500,D6S1017基因座的上游引物用TAMRA熒光標(biāo)記;D9S2157基因座上游引物用FAM熒光標(biāo)記。PCR產(chǎn)物在ABI310基因分析儀上電泳分型,結(jié)果用Gene Mapper3.2軟件進(jìn)行分析,計(jì)算基因頻率及遺傳多態(tài)性參數(shù)。將血液放置于夏季室外1周、2周、4周、8周,模擬自然環(huán)境DNA降解過程,提取其DNA,分別采用商品化STR試劑盒和本課題所選用的5個(gè)miniSTR分型體系進(jìn)行分析,比較二者分型成功率。對(duì)某一案件中的尸體心臟、腎臟、肝臟、血液、肌肉、皮膚等組織臟器進(jìn)行五個(gè)miniSTR基因座檢測(cè),分析其是否具有組織同一性。從本鑒定中心日常檢案中隨機(jī)選取10例親子鑒定案例,進(jìn)行5個(gè)miniSTR基因座的家系調(diào)查,評(píng)估其遺傳穩(wěn)定性。檢測(cè)5個(gè)miniSTR基因座在魚、豬、羊、牛中能否得到特異性擴(kuò)增產(chǎn)物,分析其種屬特異性。將9947A DNA稀釋為1ng、0.5ng、0.25ng、0.125ng,檢測(cè)5個(gè)miniSTR基因座分型,評(píng)價(jià)其檢測(cè)靈敏度。 結(jié)果:構(gòu)建了兩組熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增5個(gè)miniSTR基因座的分型體系。應(yīng)用該體系對(duì)河北漢族人群分布進(jìn)行了調(diào)查,結(jié)果五個(gè)miniSTR基因座D1S1627, D5S2500 ,D3S4529,D6S1017和D9S2157被檢出5、5、5、6、8個(gè)等位基因,其等位基因頻率分布在0.0170~0.4260之間;檢出11、13、13、15、24種基因型,其基因型頻率分布在0.008265~0.347107之間。經(jīng)χ2檢驗(yàn),河北漢族群體五個(gè)miniSTR基因座的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。遺傳多態(tài)性參數(shù):D1S1627, D5S2500,D3S4529,D6S1017和D9S2157五個(gè)miniSTR基因座的雜合度(Ho)分別為0.769、0.795、0.803、0.725、0.792;個(gè)人識(shí)別率(DP)分別為0.815、0.867、0.873、0.900、0.921;非父排除率(PE)分別為0.542、0.590、0.605、0.468、0.584;多態(tài)性參數(shù)(PIC)分別為0.620、0.690、0.700、0.730、0.790。五個(gè)miniSTR基因座累積個(gè)人識(shí)別能力為0.9999753;累積非父排除率為0.9835846。模擬高度降解DNA樣本在五個(gè)miniSTR基因座中均得到了完整分型,而Identifiler STR試劑盒則表現(xiàn)為大片段等位基因丟失,顯示了miniSTR技術(shù)比常規(guī)STR試劑盒具有更高的分型成功率。對(duì)同一尸體骨骼、心臟、腎臟、肝臟、血液、肌肉、皮膚等組織臟器進(jìn)行五個(gè)miniSTR基因座檢測(cè),結(jié)果顯示這些組織中的基因型完全相同。10個(gè)家系調(diào)查的結(jié)果顯示,5個(gè)miniSTR基因座均未發(fā)現(xiàn)突變。5個(gè)miniSTR基因座在魚、豬、羊、牛均未檢測(cè)到特異性擴(kuò)增產(chǎn)物。以0.125ng、0.25ng 9947A DNA為模板進(jìn)行5個(gè)miniSTR基因座的擴(kuò)增,均得到了清晰的分型圖譜。 結(jié)論:(1)獲得了D1S1627, D5S2500,D3S4529,D6S1017和D9S2157五個(gè)miniSTR基因座在河北漢族人群的群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù),該5個(gè)基因座在河北漢族人群中具有較好的遺傳多態(tài)性,可應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)個(gè)人識(shí)別和親子鑒定。(2)構(gòu)建了D1S1627,D5S2500,D3S4529,D6S1017和D9S2157五個(gè)miniSTR基因座兩組熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增分型體系,該體系分型靈敏度達(dá)0.125ng~0.25ng,具有組織同一性,一定的種屬特異性,較好的遺傳穩(wěn)定性,在分析高度降解檢材時(shí)較常規(guī)STR試劑盒具有顯著優(yōu)勢(shì),表明該體系在高度降解檢材的法醫(yī)學(xué)鑒定中有較高的應(yīng)用價(jià)值。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：D919

【參考文獻(xiàn)】

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1 汪泰初;劉朝良;肖林珍;;線粒體基因組(mtDNA)的研究進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年10期

2 唐春;別平;;線粒體DNA的損傷及其對(duì)細(xì)胞的影響[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年02期

3 呂德堅(jiān),劉秋玲;X染色體STR的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用進(jìn)展[J];中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志;2002年04期

4 婁春光;李淑瑾;叢斌;李愛強(qiáng);宋金平;馬春玲;;3個(gè)miniSTR基因座在高度降解檢材中的應(yīng)用及其遺傳多態(tài)性[J];中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志;2006年05期

5 葉欣,肖露露,羅廣平,趙陽,張偉東,黎世杰;STR系統(tǒng)與HLA系統(tǒng)檢測(cè)在親權(quán)試驗(yàn)中的應(yīng)用[J];臨床輸血與檢驗(yàn);2003年01期

6 袁文濤,徐紅巖,趙進(jìn)英,丁偉,江宏銓,顧鳴敏,薛京倫,陳家倫,方福德,陳竺,金力,黃薇;微衛(wèi)星位點(diǎn)在基因組掃描中的信息表現(xiàn)[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2000年02期

7 劉秋玲,呂德堅(jiān),崔崴;3個(gè)X染色體短串聯(lián)重復(fù)的復(fù)合擴(kuò)增及其多態(tài)性[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2004年03期

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本文編號(hào)：2350676