本文選題：類固醇激素　切入點(diǎn)：尿液　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 脫氫表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)是人體分泌的一種重要生理活性物質(zhì),屬內(nèi)源性類固醇激素。類固醇激素(Anabolic steroids),又稱甾體同化激素,是近年來使用最頻繁與廣泛的運(yùn)動(dòng)興奮劑,因此,DHEA等類固醇激素的檢測(cè)一直是運(yùn)動(dòng)興奮劑檢測(cè)的熱點(diǎn)。尿液與血液是當(dāng)今興奮劑檢測(cè)領(lǐng)域最為普遍采用的檢材,但這些檢材存在檢測(cè)時(shí)限短等難以克服的缺陷,因此探尋新的檢材成為興奮劑檢測(cè)研究的熱點(diǎn)。毛發(fā)具有檢測(cè)時(shí)限長(zhǎng)、易于保存、能夠反映用藥歷史等優(yōu)勢(shì),已在濫用藥物的檢測(cè)領(lǐng)域得到了較為廣泛的應(yīng)用。因此,進(jìn)行毛發(fā)中類固醇激素檢測(cè)的研究,為興奮劑檢測(cè)提供技術(shù)儲(chǔ)備,具有重要的意義。 類固醇激素按照來源不同分為兩大類:外源性類固醇激素以及內(nèi)源性類固醇激素。興奮劑檢測(cè)在對(duì)待這兩類激素的策略上有著本質(zhì)的區(qū)別。針對(duì)外源性類固醇激素相對(duì)比較簡(jiǎn)單,僅需在檢材中檢出該類物質(zhì)即可判為陽(yáng)性。而內(nèi)源性激素因人體內(nèi)存在此類物質(zhì),給研究和結(jié)果判定帶來了復(fù)雜性。因此,作為分析方法應(yīng)用和結(jié)果評(píng)價(jià)的重要環(huán)節(jié),必須考察中國(guó)人群體內(nèi)內(nèi)源性類固醇激素的存在狀況,考察中國(guó)人群尿液及毛發(fā)中內(nèi)源性類固醇激素的分布情況;探討通過尿液、毛發(fā)分析判斷內(nèi)源性類固醇濫用的可行性,從而為內(nèi)源性類固醇濫用的分析和評(píng)價(jià)提供方法和依據(jù)。 本文對(duì)中國(guó)人群體內(nèi)(尿液、毛發(fā))中DHEA及其相關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)、分布及結(jié)果評(píng)價(jià)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究,建立了較為完整的體內(nèi)DHEA及其相關(guān)物質(zhì)的分析、確認(rèn)、評(píng)價(jià)體系。主要包括以下幾個(gè)方面: 一、尿液中DHEA及其相關(guān)物質(zhì)的分析與研究 1.建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)測(cè)定尿液中的DEHA及其相關(guān)物質(zhì)的方法。尿樣經(jīng)液-液提取后,采用Cosmosil C18色譜柱,并以甲醇-0.1%甲酸緩沖液(含0.02 mol/L乙酸銨)(體積比為68∶32)為流動(dòng)相,以三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描方式對(duì)脫氫表雄酮(DHEA)、睪酮、表睪酮、雄酮和苯膽烷醇酮等5種激素成分進(jìn)行檢測(cè)。方法的最低檢出限為0.01～10ng/mL,平均回收率為96.7%～106.5%,日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別小于7%和11%。應(yīng)用所建立的方法測(cè)定了健康志愿者口服DHEA后尿液中內(nèi)源性類固醇激素的變化情況,結(jié)果表明該方法樣品處理簡(jiǎn)便,色譜分離完全,結(jié)果準(zhǔn)確可靠,可應(yīng)用于體液中類固醇激素的常規(guī)分析。 2.考察了中國(guó)健康成人尿液中DHEA及其相關(guān)內(nèi)源性類固醇激素的水平,揭示服用DHEA后尿液中DHEA的代謝規(guī)律以及對(duì)其他相關(guān)內(nèi)源性類固醇激素水平的影響。結(jié)果表明志愿者尿液中的睪酮濃度明顯低于我國(guó)和國(guó)外運(yùn)動(dòng)員。單劑量服用DHEA后,尿液中DHEA、雄酮和苯膽烷醇酮的濃度有明顯的升高,達(dá)峰時(shí)間分別為:3.86±0.64h、3.43±0.90h和3.57±0.90h。因此可以推斷尿液中DHEA等內(nèi)源性類固醇激素水平因種屬、年齡、性別、身體素質(zhì)等因素存在較大差異。監(jiān)測(cè)濫用外源性的DHEA時(shí),其尿液中的DHEA濃度是最有效的技術(shù)指標(biāo)。 二、毛發(fā)中DHEA及其相關(guān)物質(zhì)篩選方法的建立 1.建立了氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)測(cè)定毛發(fā)中的DHEA及其相關(guān)類固醇激素的篩選方法。頭發(fā)經(jīng)堿水解后液-液提取,利用MSTFA衍生化試劑衍生化后以串聯(lián)四極桿質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描方式對(duì)脫氫表雄酮、睪酮、表睪酮、雄酮、苯膽烷醇酮、諾龍、甲基異睪酮、甲基睪酮、去氫甲基睪酮、乙諾酮等10種激素成分進(jìn)行檢測(cè)。方法的最低檢出限為0.2-5pg/mg,平均回收率為71.0%～110.5%,日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別小于17%和18%。結(jié)果表明該方法樣品處理簡(jiǎn)便,色譜分離完全,結(jié)果準(zhǔn)確可靠,可應(yīng)用于毛發(fā)中類固醇激素的常規(guī)分析。 2.應(yīng)用建立方法測(cè)定了健康人頭發(fā)中DHEA及其相關(guān)內(nèi)源性類固醇激素。此外,按照NIST所列方法自行制備了類固醇激素的陽(yáng)性毛發(fā),應(yīng)用所建立的方法對(duì)陽(yáng)性毛發(fā)中去氫甲基睪酮與乙諾酮進(jìn)行了測(cè)定。 三、中國(guó)健康人頭發(fā)中DHEA及其相關(guān)類固醇激素的檢測(cè)與評(píng)價(jià) 1.應(yīng)用所建立的篩選方法測(cè)定了88名不同性別和年齡的中國(guó)健康人頭發(fā)中DHEA及其相關(guān)內(nèi)源性類固醇激素含量。 2.考察了不同性別年齡健康中國(guó)人頭發(fā)中DHEA及其相關(guān)內(nèi)源性類固醇激素分布情況,結(jié)果表明頭發(fā)中雄酮、表睪酮、苯膽烷醇酮的含量明顯低于DHEA與睪酮的含量;男性頭發(fā)中睪酮的含量在20-40年齡段達(dá)到峰值隨后隨著年齡的增長(zhǎng)下降;男性女性頭發(fā)中睪酮含量沒有明顯區(qū)別。 四、DHEA在豚鼠毛發(fā)中的分布研究 1.測(cè)定了豚鼠毛發(fā)中內(nèi)源性DHEA的含量。取單色、雙色或三色毛發(fā)豚鼠共22只,剃去背部取樣區(qū)的毛發(fā),測(cè)定空白毛發(fā)中DHEA的含量,結(jié)果表明豚鼠毛發(fā)中內(nèi)源性DHEA含量與毛發(fā)顏色沒有明顯關(guān)系,與人頭發(fā)中DHEA含量相比較沒有明顯區(qū)別。 2.考察了單次注射DHEA后豚鼠毛發(fā)中DHEA含量變化過程。選取背部單色、雙色或三色毛發(fā)豚鼠各6只,給藥前剃光背部取樣區(qū)毛發(fā),以20mg/kg劑量單次腹腔注射DHEA,隔天剃毛,分別包裝保存,連續(xù)7次,測(cè)定DHEA的含量。結(jié)果表明毛發(fā)中DHEA的含量高峰出現(xiàn)在給藥后的第二天。 3.考察了多次給藥后豚鼠毛發(fā)中DHEA含量的變化過程。選取背部黑色毛發(fā)豚鼠共18只,分成高、中、低3組。給藥前剃光背部取樣區(qū)毛發(fā),以20mg/kg劑量注射DHEA,連續(xù)注射3天,第一次給藥后第二天剃毛并隔天取毛,分別包裝保存,連續(xù)7次,測(cè)定毛發(fā)中DHEA的含量。結(jié)果表明三個(gè)劑量組中DHEA含量均在末次給藥后第二天達(dá)到峰值,毛發(fā)中DHEA的含量與給藥劑量相關(guān),低劑量組毛發(fā)中DHEA含量變化不明顯。 4.毛發(fā)顏色對(duì)注射DHEA后豚鼠毛發(fā)中DHEA含量的影響,取背部長(zhǎng)有不同毛發(fā)色塊(黑、白、棕)的豚鼠6只,給藥前剃光背部取樣區(qū)毛發(fā),以20mg/kg劑量腹腔注射DHEA,給藥后第二天剃毛,測(cè)定所得各色毛發(fā)中DHEA的含量。結(jié)果表明同體豚鼠毛發(fā)中DHEA的含量與顏色有關(guān),含量從大到小依次為黑色、棕色、白色。 綜上所述,本文的創(chuàng)新點(diǎn)及研究的意義如下: 1.本文所建立的尿液中DHEA及其相關(guān)內(nèi)源性類固醇激素的定性定量分析方法靈敏、專屬性強(qiáng)、為國(guó)內(nèi)首創(chuàng),該方法的檢測(cè)限與定量限明顯低于其他研究報(bào)導(dǎo)結(jié)果,總體指標(biāo)達(dá)到國(guó)際先進(jìn)水平。 2.首次測(cè)定了中國(guó)人群毛發(fā)中DHEA及其相關(guān)內(nèi)源性類固醇激素的含量,為陽(yáng)性結(jié)果的判定提供了依據(jù)。討論了中國(guó)人群不同年齡、性別毛發(fā)中內(nèi)源性類固醇激素含量的分布。為毛發(fā)中內(nèi)源性類固醇激素結(jié)果的判定提供了依據(jù)。 3.首次對(duì)DHEA在豚鼠毛發(fā)中的分布及時(shí)間過程進(jìn)行了研究,結(jié)果表明給于外源性DHEA后黑色毛發(fā)中的DHEA結(jié)合率較高。并且中國(guó)人黑色頭發(fā)適合毛發(fā)中內(nèi)源性類固醇激素的檢測(cè)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：D919

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1633813